陳宏，宋瑜欣，于曉華，蘇玉明，秦琪，延宇欣，賀紫薇，柳琳琳

慢性咳嗽是兒童呼吸門診最常見(jiàn)的癥狀之一，發(fā)病原因多樣，其中咳嗽變異性哮喘(cough variant asthma,CVA) 是常見(jiàn)的原因之一。CVA主要的臨床癥狀表現(xiàn)為常在夜間或清晨出現(xiàn)持續(xù)反復(fù)發(fā)作的咳嗽[1]。CVA疾病周期長(zhǎng)，多由于空氣，氣候以及上呼吸道感染所誘發(fā)，常規(guī)治療效果不佳[2]。本研究主要觀察射干麻黃湯加減聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)劑脾多肽注射液對(duì)于小兒CVA的療效以及對(duì)病兒免疫功能的影響，旨在探索治療該疾病的更優(yōu)治療方法。

1 資料與方法

1.1一般資料將黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院2015年2月到2016年12月收治的64例小兒CVA，按隨機(jī)數(shù)字表法分成兩組。其中觀察組32例(男18例，女14例)，年齡范圍為1.5～8.0周歲，年齡(4.76±0.57)周歲；對(duì)照組32例(男20例，女12例)，年齡范圍為1.3～8.0周歲，年齡(4.98±0.66)周歲。兩組資料均衡。每一位病兒在征得監(jiān)護(hù)人同意下抽取外周血3 mL用以檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，所有病兒的監(jiān)護(hù)人在取血液標(biāo)本前均已簽署知情同意書。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)及治療方法診斷標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)全國(guó)兒科哮喘協(xié)作組制訂的兒童哮喘診斷治療常規(guī)(試行方案)[3]中CVA的診斷如下：(1)常在夜間(或清晨)發(fā)作的咳嗽，持續(xù)反復(fù)超過(guò)1個(gè)月，運(yùn)動(dòng)后會(huì)加重， 臨床無(wú)感染現(xiàn)象， 痰少，或經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期抗生素治療無(wú)效；(2)支氣管擴(kuò)張劑可緩解；(3)有個(gè)人過(guò)敏史或家族過(guò)敏史；(4)氣道呈高反應(yīng)性、變應(yīng)原試驗(yàn)陽(yáng)性等作輔助診斷。

治療方法：對(duì)照組采用射干麻黃湯加減治療?；痉綖樯涓? g，炙麻黃5 g，細(xì)辛3 g，大棗6 g，法半夏6 g，款冬花8 g，五味子5 g，紫菀8 g，生姜4 g，干地龍8 g，蟬衣5 g。臨證加減：鼻癢、噴嚏連聲者加辛荑花6 g，蒼耳子6 g；久咳氣虛無(wú)力者去細(xì)辛、生姜，加太子參10 g，白術(shù)10 g，黃芪10 g，牡蠣10 g；皮膚瘙癢、濕疹病史者加土茯苓10 g，刺蒺藜8 g；食欲不振者加神曲6 g，麥芽15 g。每天1劑，以水600 mL煎至150～200 mL，分2次服。觀察組采用以上方子聯(lián)合脾多肽注射液治療，即在以上基本方加減的基礎(chǔ)上，每日1次靜脈滴注脾多肽注射液1支(溶于100 mL的0.9%氯化鈉注射液，吉林豐生制藥有限公司，產(chǎn)品規(guī)格為每支2 mL，生產(chǎn)批號(hào)20161215、20170606、20171105)，7 d為一個(gè)療程。

1.3實(shí)驗(yàn)材料及測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)材料：流式抗體CD3，CD4，CD8、CD25及Foxp3均為BD Bioscience公司產(chǎn)品；Cytofix/Cytoperm破膜固定試劑盒為BD Bioscience公司產(chǎn)品。

分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)方法：用EDTA抗凝血管采集抗凝血1支(3 mL)，離心3 500 r/min，10 min。生理鹽水2∶1稀釋血細(xì)胞，混勻。然后將稀釋后的血液緩慢注入5 mL的淋巴細(xì)胞分離液上。離心750g，30 min，20 ℃。然后使用毛細(xì)吸管吸取中間白膜層(單個(gè)核細(xì)胞層)置于新的15 mL離心管中，再用干凈的生理鹽水清洗兩次即可得到PBMC細(xì)胞。

流式細(xì)胞染色及其分析：將5×105的細(xì)胞轉(zhuǎn)至EP管中，離心，去上清。取所需的流式抗體3～5 μL，于EP管中振蕩混勻，加入細(xì)胞中，冰上或4 ℃冰箱避光反應(yīng)25～30 min。結(jié)束后用PBS洗滌兩次。然后使用500 μL PBS重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至流式管中，上機(jī)分析。胞內(nèi)染色時(shí)加入破膜固定劑，清洗時(shí)用破膜固定清洗液∶PBS=1∶9稀釋，其他步驟相同。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 24.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料部分，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料部分，組間比較為成組t檢驗(yàn)，組內(nèi)前后比較為配對(duì)t檢驗(yàn)。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組血清IgM、IgG和IgA水平的比較治療前觀察組和對(duì)照組的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG和IgA)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，觀察組的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG)較治療前升高(P<0.05)，且高于對(duì)照組(P<0.05)(表1)。

表1 小兒CVA 64例治療前后血清免疫球蛋白因子的兩組比較

2.2兩組外周血T淋巴細(xì)胞CD3+，CD4+及CD8+亞群比較治療前觀察組和對(duì)照組的外周血T淋巴細(xì)胞亞群(CD8+T細(xì)胞亞群)的比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，由于免疫系統(tǒng)的活性改善，免疫功能增強(qiáng)，觀察組的CD3+T及CD4+T細(xì)胞亞群較治療前比例均有明顯升高(P<0.05)，且高于對(duì)照組(P<0.05)。觀察組的CD8+T細(xì)胞亞群較治療前降低(P<0.05)，且低于對(duì)照組(P<0.05)?；颊叩拿庖咭种茽顟B(tài)較前解除，故觀察組的Treg細(xì)胞亞群(CD4+CD25+Foxp3+)較治療前降低且低于對(duì)照組(P<0.05)(表2)。

表2 小兒CVA 64例治療前后外周血T淋巴細(xì)胞亞群的兩組比較

2.3兩組治療效果比較觀察組臨床治愈率為46.9%，總體有效率為90.6%；對(duì)照組臨床治愈率為31.2%，總體有效率為78.1%，兩組臨床治愈率、總有效率比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

表3 小兒CVA 64例治療效果的兩組比較/例(%)

3 討論

小兒慢性咳嗽歷來(lái)是臨床上較為棘手的問(wèn)題，因其發(fā)病原因多樣。其中小兒CVA是最常見(jiàn)原因之一。尤其是近年來(lái)，全國(guó)各地空氣質(zhì)量下降，污染加劇，霧霾頻發(fā)，該病的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)[4]。本病主要特點(diǎn)以夜間或清晨陣發(fā)性咳嗽為主，無(wú)發(fā)熱體征，病理改變以持續(xù)氣道炎癥與氣道高反應(yīng)性為特點(diǎn)，極大的影響了病兒正常的休息及健康成長(zhǎng)[5]。對(duì)于本病，西醫(yī)治療有一定的緩解作用，但缺點(diǎn)是停藥后易反復(fù)發(fā)作[6]。故探索一種治標(biāo)且治本的方法來(lái)治療本病尤為重要。

采用射干麻黃湯加減治療哮喘由來(lái)已久，在既往的各種研究中已經(jīng)證實(shí)，采用此方治療小兒CVA是有效的。脾多肽提取自健康小牛的脾臟，然后運(yùn)用復(fù)雜工藝將其制成分子量較小的多肽、游離氨基酸等組成的無(wú)菌水溶液[7-8]。脾多肽注射液能夠激活和增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫，并促使T淋巴細(xì)胞分化成熟，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[9-10]。在本研究中，主要目的是觀察中西醫(yī)結(jié)合的方法對(duì)于小兒CVA的治療效果，并觀察病兒的免疫功能的改變。我們發(fā)現(xiàn)，采用射干麻黃湯加減聯(lián)合脾多肽注射液治療可以提高病兒外周血T淋巴細(xì)胞中CD3+及CD4+T淋巴細(xì)亞群胞的比例[11]，降低CD8+T及Treg亞群的比例，從而激活病兒免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)免疫力[12-13]。其臨床治愈率及總體有效率均高于對(duì)照組。本研究為我們?cè)谛篊VA的臨床治療中提供了一種更優(yōu)選擇，即采用射干麻黃湯聯(lián)合脾多肽注射液治療。但是本研究的不足之處在于樣本量較小，隨訪時(shí)間較短，所以目前尚需要更大樣本量及多中心的研究來(lái)證實(shí)這一結(jié)論。