馬敏敏 萬曉青

浙江醫(yī)院 浙江 杭州 310013

本研究旨在明確不同蒸制時間對三七總皂苷含量的影響，從而確立三七理想的蒸制時間。

1 材料

1.1 藥材與試劑：生三七（批號130227，產(chǎn)地云南），購自杭州華東中藥飲片有限公司；人參皂苷Rg1對照品（批號110703-201027，純度99%，中國藥品生物制品檢定所）。甲醇（批號201301201，上海振興化工一廠）；乙酸（批號20130129，中國杭州化學(xué)試劑有限公司）；高氯酸（批號20120626，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；香蘭素（批號20120928，上海雙香助劑廠）；氫氧化鈉（批號20130328，杭州蕭山化學(xué)試劑廠）；水為自制超純水（由純水儀制備），除標(biāo)明外其余試劑均為分析純。

1.2 儀器：PerkinElmer Lambda45紫外分光光度計(jì)（美國珀金埃爾默公司）；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MILLI-Q Synthesis A 10純水儀（美國Millipore公司）；DZ30—32C10型離心機(jī)；DG120型粉碎機(jī)（浙江省瑞安市春海藥材器械廠）；DGG—9240A型立式電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；恒溫水浴鍋XMTE-2000型號R201D；FA2204B電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備：取生三七飲片，均分為3等份各100g。置蒸籠中100℃下分別蒸制1、1.5、2h后取出，晾干，打粉，過3號篩。精確稱取上述三七粉末各100mg，置50ml錐形瓶中，精密加入60%甲醇15ml，超聲處理（100W，40℃）50min，取出，離心（3500r/min）15min。取上清液，用60%甲醇定容于25ml容量瓶中，搖勻即得。

2.2 對照品溶液制備：精密稱取人參皂苷Rg1對照品5.1mg于50ml容量瓶中，加60%甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得到0.102mg/ml的人參皂苷Rg1對照品溶液。

2.3 檢測波長的確定：精密移取對照品溶液及供試品溶液0.2ml于10ml具塞試管中，揮干溶劑，移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，于60℃烘箱中加熱15min，立即置冷水中冷卻，然后加入冰醋酸5.0ml，搖勻，放置15min，相應(yīng)試劑進(jìn)行空白對照，經(jīng)Lambda45紫外可見分光光度計(jì)在200～700nm范圍內(nèi)掃描，確定最大吸收波長。如圖1所示。確定最大吸收波長549.89nm為檢測波長。

2.4 方法學(xué)考察：分述如下。

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密移取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0ml，分別置于10ml具塞試管中，揮干溶劑，移入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，于60℃烘箱中加熱15min，立即置冷水中冷卻，然后加入冰醋酸5.0ml，搖勻，放置15min，相應(yīng)試劑進(jìn)行空白對照，在最大吸收波長處測定吸光度A，以A值為縱坐標(biāo)（Y），以相應(yīng)具塞試管人參皂苷Rg1含量（mg/ml）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=28.412X-0.0612，r=0.999。表明人參皂苷Rg1含量在0.008～0.049mg/ml與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 儀器精密度實(shí)驗(yàn)：取供試品溶液0.2ml，按

2.4.1項(xiàng)下方法操作顯色，重復(fù)測定6次，計(jì)算RSD值為0.516%，符合精密度試驗(yàn)要求（RSD＜2%）。

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取供試品溶液0.2ml，按2.4.1項(xiàng)下方法顯色，分別在10、20、30、40、50、60min測定吸光度，RSD值為0.792%，說明顯色在60min內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)：平行取供試品6份，按2.1中方法制備成供試品溶液，并且按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線法顯色，測吸光度，RSD值為0.31%，符合重復(fù)性試驗(yàn)要求（RSD＜5%）。

2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：精密吸取對照品溶液0.2ml，加入已知含量的皂苷供試品溶液中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定，平行5份，回收率為98.95±1.09%，RSD值為1.01%，符合加樣回收率試驗(yàn)要求（RSD＜2%）。

2.5 不同蒸制時間下三七中總皂苷含量測定：精密稱取不同蒸制時間下的三七樣品各100mg，按2.1項(xiàng)制備供試品溶液制備方法制備，并測定其中總皂苷含量。結(jié)果表明，以1h為最佳蒸制時間。見表1。

表1 不同蒸制時間下三七中總皂苷的含量

3 討論

三七作為常用的活血化瘀藥，臨床多用于治療咯血、吐血、衄血、便血、胸腹刺痛、跌撲腫痛等多種病癥。近年來研究表明，三七生用有止血散瘀、消腫止痛之功，熟用有補(bǔ)血益氣、壯陽散寒之效。有文獻(xiàn)顯示，蒸三七比生三七抗血小板聚集活性更強(qiáng)，且蒸制時間越長，抗血小板聚集活性越強(qiáng)。本研究通過對不同蒸制時間下，生、熟三七中總皂苷含量的比較發(fā)現(xiàn)，熟三七中總皂苷含量高于生三七；隨蒸制時間變化，熟三七中總皂苷含量呈現(xiàn)先升高后逐漸降低的趨勢；其中以蒸制1h后所得熟三七中總皂苷含量最高，可作為臨床炮制應(yīng)用熟三七的參照蒸制時間。