張澤鳳， 李暉， 鄧秀秀， 辜群利

成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中心實驗室(四川成都 610075)

各種慢性損傷因素[1-2]導(dǎo)致肝實質(zhì)細胞、肝竇內(nèi)皮細胞(liver sinusoidal endothelial cells, LSECs)、kupffer細胞及其他炎性細胞等釋放出復(fù)雜的刺激信號，包括損傷相關(guān)分子模式(damage-associated molecular patterns，DAMPs)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor β，TGF-β)、血小板生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)等[3-4]，上述細胞因子及活性物質(zhì)激活肝星狀細胞(hepatic stellate cells，HSCs)成為肌成纖維細胞，表達α平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin，α-SMA)，通過調(diào)控TGF-β1/Smad3等相應(yīng)信號通路[5]，導(dǎo)致細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)基因表達增強，促降解基因表達下降，特別是Ⅰ型膠原(type Ⅰ collagen，CoⅠ)和Ⅲ型膠原(Type Ⅲ collagen，CoⅢ)增加[6]。細胞因子及相應(yīng)的信號通路僅關(guān)系著ECM基因轉(zhuǎn)錄的啟動，而不編碼蛋白質(zhì)的非編碼RNA(non-coding RNA, ncRNA)作用在ECM基因轉(zhuǎn)錄過程或翻譯水平。越來越多證據(jù)表明，ncRNA在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答中具有重要作用[7]，在肝纖維化進程中，ncRNA出現(xiàn)明顯的表達異常，并隨著病情的進展而發(fā)生變化，其中最具相關(guān)性的有微小RNA(microRNA，miRNA)、長鏈ncRNA(long noncoding RNA，lncRNA)，二者均屬于調(diào)節(jié)性ncRNA[8]。本文即對miRNA 和lncRNA與肝纖維化的相關(guān)性進行綜述。

1 miRNAs與肝纖維化的相關(guān)性

miRNA屬于短鏈ncRNA，由19～24個核苷酸組成，通常由RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄，初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在Drosha酶和雙鏈RNA結(jié)合蛋白的作用下形成約70nt、具有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的pre-miRNA，pre-miRNA在轉(zhuǎn)運蛋白Exportin-5的介導(dǎo)下從細胞核轉(zhuǎn)入胞質(zhì)后被Dicer酶等剪切形成較短的雙鏈miRNA中間體，其引導(dǎo)鏈(成熟miRNA)與RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex，RISC)結(jié)合而產(chǎn)生作用。

大量文獻報道了肝纖維化微環(huán)境刺激產(chǎn)生的miRNA和正常肝臟之間miRNA表達譜的差異[9-10]，而miRNA表達失調(diào)進一步影響促纖維化及抑制纖維化基因表達，影響肝纖維化進展。Lakner等[10]在CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型中發(fā)現(xiàn)23個miRNA的表達發(fā)生改變，其中13種miRNA表達下調(diào)，10種表達上調(diào)；在靜止和激活的大鼠HSCs上進行miR微陣列分析(microarray analysis)、測定差異表達的miRNA，顯示miR-17-92簇(19a、19b、92a)的成員在活化的HSCs中顯著下調(diào)；Noetel等[11]發(fā)現(xiàn)，抑制HSCs活化為肌成纖維細胞的miRNA減少；而 miR-19b、miR-29、miR-150、miR-194體外過表達，可抑制HSCs細胞遷移特性，并減少肌成纖維細胞標(biāo)志物α-SMA和膠原蛋白產(chǎn)生[12-13]。miRNA表達譜差異表現(xiàn)為miR-214-5p、miR-221/222、miR-21、miR-9、miR-125、miR-199a、miR-128、miR-17-5p等表達上調(diào)，miR-19b、miR-30、miR-193、miR-200a、miR-126、miR-122、miR-29、miR-34a、miR-133、miR-17、miR-378等表達下調(diào)。此外miRNA靶標(biāo)包括組蛋白、甲基化酶及組蛋白去乙?；傅龋室部赏ㄟ^調(diào)控組蛋白修飾引起染色質(zhì)重塑調(diào)節(jié)ECM基因的表達、導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄阻遏或激活[14]。

1.1 具有抗肝纖維化作用的miRNAs 肝纖維化患者或動物、細胞模型，均可出現(xiàn)某些miRNAs的表達水平下調(diào)，而模擬物可起到抗纖維化的作用，目前研究較多的具有抗肝纖維化作用的miRNAs有miR-30、miR-193、miR-200a、miR-19b、miR-29、miR-101、miR-378a-3p等。由于其在HSCs活化和細胞外基質(zhì)產(chǎn)生中的作用，TGF-β被認為是最重要的促纖維化細胞因子[15]；miRNA可通過抑制TGF-β信號通路，起到抗肝纖維化的作用。

在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化的小鼠模型，miR-30可抑制其直接靶標(biāo)Kruppel樣因子11(Krüppel-like factor 11，KLF11)的表達，減弱KLF11對Smad7轉(zhuǎn)錄抑制，從而增強對TGF-β信號傳導(dǎo)起抑制性作用的Smad7負反饋作用，促進活化的HSCs逆轉(zhuǎn)至靜止?fàn)顟B(tài)[16]；無論是實驗性肝纖維化還是肝纖維化患者，miR30、miR-193均出現(xiàn)下調(diào)，miR30、miR-193在肝纖維化中的潛在靶基因是TGF-β2，可通過調(diào)控TGF-β2 的表達水平減輕肝纖維化[17]；miR-200a[18]的過表達顯著抑制了α-SMA的活性，影響依賴TGF-β1的HSCs的活化、增殖。

在CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型、肝纖維化患者[10]、膽道閉鎖動物模型[19]及患者[20]，肝臟的miR-19b水平均顯著降低，miR 19b模擬物可降低TGF-β受體Ⅱ(TGF-βRⅡ)和SMAD3的表達，減少Ⅰ型膠原α1 及 α2 mRNA的表達，抑制HSCs活化，減少TGF-β和α-SMA的表達。

CCl4小鼠肝纖維化模型、膽管結(jié)扎小鼠模型及進展性肝纖維化患者，均出現(xiàn)肝臟miR-29家族表達水平的明顯下調(diào)，HSCs中miR-29表達水平的下調(diào)是通過TGF-β和核因子-κB(NF-κB)依賴途徑進行的，HSCs中miR-29的過度表達可下調(diào)膠原表達水平，阻止TGF-β1刺激的HSCs產(chǎn)生膠原，起到抗肝纖維化的作用[21]。miR-29b除通過抑制TGF-β2-Smad信號通路調(diào)控HSCs活化外，還可以抑制PI3K/AKT信號通路，誘導(dǎo)HSCs凋亡，抑制HSCs活化，減少α-SMA，阻止肝纖維化發(fā)生[22]；用攜帶miR-29b1類似物的納米粒子治療小鼠，可顯著降低肝臟膠原沉積，改善肝臟損傷，促進肝纖維化恢復(fù)[23]。人丙型肝炎病毒(HCV)感染可下調(diào)肝細胞中miR-29水平，HSCs中的miR-29水平下降使膠原合成增加[24]。

miR-101是TGF-β信號通路的抑制劑，Tu等[25]在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型觀察到活化的HSCs和受損肝細胞中miR-101顯著下調(diào)，進一步實驗驗證了TGF-βⅠ型受體(TGFβ receptor Ⅰ, TβRⅠ)是miR-101的靶標(biāo)，故可認為miR-101通過減少TGF-β RⅠ表達抑制TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進活化的HSCs逆轉(zhuǎn)為靜止?fàn)顟B(tài)，抑制纖維化發(fā)展。

Hh(Hedgehog)信號途徑促進肝纖維化并調(diào)節(jié)癌癥有利的微環(huán)境，膠質(zhì)母細胞瘤家族成員(Glioblastoma,Gli)Gli3和Gli2是Hh信號的轉(zhuǎn)錄激活因子。miR-378家族成員(miR-378a-3p，miR-378b和miR-378d)的表達在CCl4誘導(dǎo)小鼠纖維化模型中下降，其中miR-378a-3p通過靶向作用于gli3抑制HSCs的活化[26]。

1.2 具有促肝纖維化的miRNAs 肝纖維化患者或動物、細胞模型，均可出現(xiàn)某些miRNA的表達水平上調(diào)，而抑制劑可起到抗纖維化的作用，目前研究較多的具有促肝纖維化作用的miRNA有miR-34a、miR-126、miR-214。二甲基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型中，miR-34家族表達水平上調(diào)[27]。過氧化物酶體增殖激活受體γ(peroxisome proliferator-activated receptors α, PPAR-γ)是miR-34a和miR-34c的靶標(biāo)，miR-34a和miR-34c的抑制劑可上調(diào)PPAR-γ表達水平，下調(diào)α-SMA，抑制肝纖維化[28]。

研究發(fā)現(xiàn)，miR-126的潛在靶標(biāo)是核因子κB抑制子α (nuclear factor kappa B inhibitor alpha，IκBα)，過度表達的miR-126可抑制LX-2細胞中IκBα的表達，增加NF-κB表達，促進TGF-β1和Ⅰ型膠原mRNA的表達[29]。

無論是活化的大鼠原代HSCs、LX2細胞株，還是CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型、NASH大鼠模型，miR-214均出現(xiàn)明顯的上調(diào)，miR-214可能通過抑制Hedgehog信號通路負調(diào)節(jié)因子的表達，促進HSCs活化，達到促肝纖維化的作用[30]；miR-214還可通過調(diào)控表皮生長受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)和TGF-β信號通路參與肝纖維化的形成[31]。但也有研究結(jié)果提示miR-214具有抗肝纖維化的作用，硫代乙酰胺誘導(dǎo)大鼠肝硬化模型中[32]，肝組織miR-214表達水平也出現(xiàn)上調(diào)，且與肝硬化進展程度平行，過度表達miR-214可減少α-SMA的表達，誘導(dǎo)活化HSCs凋亡，抑制成肌纖維細胞分化，具有抗肝纖維化的作用，因此miR-214的作用尚需進一步證實。

1.3 通過影響脂質(zhì)代謝，調(diào)控肝纖維化的miRNAs 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)、酒精性脂肪性肝病(alcoholic fatty liver disease, ALD)導(dǎo)致肝纖維化的比例在逐年攀升，因此調(diào)控脂質(zhì)代謝，也是防控肝纖維化的重要手段，對脂質(zhì)代謝產(chǎn)生影響的miRNAs主要有miR-122、miR29、miR155、miR-34a等。

miR-122主要在肝細胞中表達，維持肝臟內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、分化，在膽固醇和脂肪酸代謝中也起著關(guān)鍵作用，靶向調(diào)控多個脂質(zhì)代謝相關(guān)酶，如脂肪酸合酶，3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methyl-glutarylcoenzyme A reductase，HMGCR)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein-1c，SREBP-1c)等[33-34]，miR-122表達水平下調(diào)與肝臟疾病的發(fā)生密切相關(guān)，NAFLD大鼠模型以及非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)患者肝組織中miR-122的表達均出現(xiàn)下調(diào)，miR-122敲除小鼠出現(xiàn)三酰甘油合成增加、分泌減少，導(dǎo)致三酰甘油累積在肝臟，甚至進展至脂肪性肝炎、肝纖維化[35]；miR-122的反義寡核苷酸可降低血漿高膽固醇水平[36]。與嚴(yán)重脂肪變性患者相比，輕微脂肪變性患者肝組織中miR-122水平更低。

人miR-29家族主要由miR-29a、miR-29b、miR-29c組成，主要在肝細胞和HSCs上表達。既往報道m(xù)iR-29在藥物性、膽汁淤積小鼠纖維化模型及CHB患者肝纖維化中下調(diào)[8]，近年在脂質(zhì)代謝中有進一步發(fā)現(xiàn)，在NASH動物模型，出現(xiàn)肝臟miR-29a和miR-29c 的下調(diào)，miR-29a通過增加脂蛋白脂肪酶的表達，促進肝臟脂質(zhì)沉著和脂肪性肝病發(fā)生；但也有研究得出不一樣的結(jié)論， Kurtz等[37]在標(biāo)準(zhǔn)飲食處理小鼠體內(nèi)，應(yīng)用鎖核酸29抑制劑，使miR-29家族功能喪失，導(dǎo)致血漿膽固醇水平降低約40%、肝臟中的脂肪酸含量約20%，在肝臟全轉(zhuǎn)錄組測序顯示通過抑制miR-29而上調(diào)的基因中有抗脂質(zhì)脫乙酰酶——沉默調(diào)節(jié)蛋白1(sirtuin 1, Sirt1)，和抗脂質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子——芳烴受體(aryl hydrocarbon receptor, Ahr)，實驗結(jié)論不一致可能與應(yīng)用動物模型及實驗條件的差異有關(guān)；體外證實，miR-29的抑制顯著降低了從頭膽固醇和脂肪酸合成。

miR-155在肝細胞和免疫細胞表達，NAFLD患者肝臟和外周血miR-155下調(diào)，miR-155的靶標(biāo)是肝臟X受體α(liver X receptor alpha, LXRα)和PPARα，缺乏miR-155小鼠在高脂飲食6個月后，脂肪性肝炎形成的比例明顯增加；miR-155過表達降低肝臟和血清脂質(zhì)水平，減少高脂飲食導(dǎo)致的脂肪性肝炎形成[38]；但也有研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食喂養(yǎng)小鼠miR-155表達水平升高，miR-155基因敲除小鼠在應(yīng)用甲基蛋氨酸膽堿缺乏飲食喂養(yǎng)5周，出現(xiàn)脂肪性炎癥和肝纖維化減輕[39]，研究結(jié)論相互矛盾，需要進一步證實；miR-155基因敲除小鼠可緩解酒精誘導(dǎo)的脂肪性肝炎，酒精誘導(dǎo)的脂質(zhì)沉著減少與過氧化物酶體增殖激活受體反應(yīng)元素(peroxisome proliferator-activated receptors response element, PPRE)和PPARα增加有關(guān)。

miR-34家族由miR-34a、miR-34b、miR-34c組成，miR-34a在NALD和NASH中起重要作用，靶標(biāo)為調(diào)控極低密度脂蛋白(very-low-density lipoprotein, VLDL)代謝、脂肪酸β氧化、膽固醇合成等過程中關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)錄因子，包括肝細胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α, HNF4α)、過氧化物酶體增殖激活受體α(peroxisome proliferator-activated receptors α, PPARα)、Sirt1和p53，NAFLD和NASH患者血清和肝組織miR-34a均升高，而且與VLDL、膽固醇、三酰甘油呈正相關(guān)， miR-34a上調(diào)可通過抑制Sirt1，AMP激活蛋白激活失活，維持HMGCR持續(xù)激活，從而增加肝臟膽固醇合成，使血清三酰甘油降低，肝臟三酰甘油增高；miR-34a通過抑制PPARα，抑制線粒體脂肪酸β氧化，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝臟的累積，肝臟中三酰甘油含量增加，鼠尾草酸可通過降低miR34a，激活Sirt1，起到治療NAFLD的作用[40]。研究發(fā)現(xiàn)miR-34a在脂肪肝模型小鼠中顯著上調(diào)，miR-34a模擬物轉(zhuǎn)染HepG2細胞使miR-34a過表達，減少線粒體含量并增加脂質(zhì)沉積，而miR-34a抑制劑可保護線粒體膜[41]。

2 lncRNAs與肝纖維化的相關(guān)性

lncRNA指>200nt的ncRNA，來源尚不清楚，大部分由RNA polymerase Ⅱ轉(zhuǎn)錄，少部分由RNA polymerase Ⅲ轉(zhuǎn)錄；最先發(fā)現(xiàn)并數(shù)量多的為長鏈基因間非編碼RNA(long intergenic noncoding RNA，lincRNA)，根據(jù)在基因組上相對于編碼基因位置，lncRNA可分為正義(sense)、反義(antisense)、雙向(bidirectional)、基因內(nèi)(intronic)、基因間(intergenic)[42]。lncRNAs功能可作為信號[43]、誘餌、引導(dǎo)或支架在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)基因表達[25，44]。lncRNAs與肝纖維化的相關(guān)性表現(xiàn)在促肝纖維化作用或抗肝纖維化作用。

2.1 具有抗肝纖維化作用的lncRNAs

2.1.1 母系表達基因3(maternally expressed gene 3，MEG3) MEG3，也稱為基因陷阱基因座2(gene trap locus 2，GTL2)，是一個母系表達的印跡基因，位于人14號染色體q32.3的Dlk1-Gt12印跡基因座[45]。在許多正常組織中表達，其編碼與幾種人類癌癥相關(guān)的lncRNA。MEG3表達在多種腫瘤中減少或消失，如肝癌、胃癌、膠質(zhì)瘤及宮頸癌等[46]。MEG3可誘導(dǎo)p53蛋白的積累，選擇性調(diào)節(jié)p53靶基因表達，導(dǎo)致細胞生長抑制。研究發(fā)現(xiàn)[46]，MEG3水平在CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型和TGF-β1誘導(dǎo)的LX-2細胞中顯著降低，LX-2細胞中MEG3的過度表達可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的LX-2細胞增殖，促進細胞凋亡。可能為MEG3的過度表達誘導(dǎo)p53的活化并介導(dǎo)cyt-c釋放，導(dǎo)致TGF-β處理的LX-2細胞凋亡，作用機制可能與由p53依賴線粒體介導(dǎo)的凋亡途徑有關(guān)； 但也有研究得出不一樣的結(jié)論，Zhang等[47]發(fā)現(xiàn)肝纖維化和NASH導(dǎo)致的肝硬化患者，肝組織MEG3出現(xiàn)顯著升高，因此，尚需更深入的研究進行證實。

2.1.2 生長抑制特異轉(zhuǎn)錄本5(growth arrest-specific transcript 5，GAS5) GAS5最初使用減影雜交從小鼠NIH 3T3細胞中分離，作為控制細胞增殖和生長的關(guān)鍵介質(zhì)，GAS5與胃癌、前列腺癌等腫瘤相關(guān)[48]。GAS5在大鼠、小鼠肝纖維化模型和肝纖維化患者肝臟中的表達水平均顯著降低，GAS5過表達抑制HSCs的活化，降低模型動物體內(nèi)膠原的沉積；GAS5是miR-222的靶標(biāo)，能夠直接與miR-222結(jié)合，此外，作為miR-222內(nèi)源性競爭性RNA，GAS5可通過增加p27蛋白含量，抑制HSCs活化和增殖[49]。

2.2 具有促肝纖維化作用的lncRNAs

2.2.1 肺腺癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1) MALAT1位于人染色體11q13.1(小鼠染色體19qA)內(nèi)，在腫瘤細胞增殖，遷移和侵襲中起關(guān)鍵作用[50]；首次在非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移研究中被發(fā)現(xiàn)[51]。CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型中，肝組織MALAT1表達明顯上調(diào)，活化HSCs中也出現(xiàn)MALAT1表達明顯上調(diào)；MALAT1敲除后，抑制HSCs活化，小鼠肝臟膠原沉積降低，MALAT1表達與miR-101b呈負相關(guān)，MALATI和RAS相關(guān)C3型肉毒桿菌底物1(RAS-related C3 botulinum substrate 1, Rac1)是miR-101b的靶標(biāo)[52]，Rac1是一種小G蛋白，屬于Rho家族，可調(diào)節(jié)NADPH氧化酶活化的ROS主要細胞內(nèi)生成物，Rac1的持續(xù)活化可維持HSCs活化表型表達并加劇肝損傷和纖維化[53]，MALAT1可通過作為競爭性內(nèi)源RNA，增加Rac1表達，促進HSCs的增殖和活化[52]，加劇肝損傷和纖維化；MALAT1的表達在活化LX-2細胞中明顯增高；MALAT1還能促進脂肪性肝炎[54]和胰島素抵抗[55]，上述研究成果均提示MALAT1具有促肝纖維化作用。

2.2.2 Alu介導(dǎo)的p21轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(Alu-mediated p21 transcriptional regulator，APTR) APTR是7號染色體q21(chromosome 7q21)中的PTPN12和RSBN1L之間的基因間區(qū)域的相對鏈表達的2303個核苷酸的lncRNA[56]。P21，也是一種CDK抑制劑，與G1/S轉(zhuǎn)換中重要的激酶如CDK4、CDK6、CDK2相關(guān)和抑制，其抑制e2F轉(zhuǎn)錄因子從而導(dǎo)致G1期細胞周期停滯。p21是抑制正常和癌細胞中的細胞增殖的關(guān)鍵分子，并且在多種水平上受到調(diào)節(jié)，在轉(zhuǎn)錄水平上DNA損傷時被激活最顯著。研究表明，在纖維化肝臟和活化HSCs中APTR上調(diào)，用Ad-APTR siRNA處理的小鼠中觀察到α-SMA和Col1A1表達的降低，在APTR敲除CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化的α-SMA蛋白上調(diào)， APTR可以募集多梳抑制復(fù)合物2(polycomb repressive complex 2，PRC2)至p21啟動子，從而抑制p21的表達，下調(diào)APTR通過增加p21抑制HSC的細胞周期和增殖[57]。此外，血清APTR水平可能反映肝硬化的嚴(yán)重程度，失代償期肝硬化患者的血清APTR水平高于代償期肝硬化患者[57]。

2.2.3 漿細胞瘤變型異位子1(plasmacytoma variant translocation 1, PVT1) PVT1在多種腫瘤中表達水平上調(diào)[58]，可介導(dǎo)腎臟系膜細胞ECM沉積[59]；Zheng等[60]報道，纖維化肝組織和活化HSCs中，PVT1均出現(xiàn)上調(diào)，去除PVT1減少膠原在模型動物肝臟的沉積，PVT1下調(diào)可通過抑制內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程(epithelial-mesenchymal transition, EMT)和Hh信號通路，使HSCs增殖、α-SMA和Ⅰ型膠原產(chǎn)生減少，從而抑制HSCs的活化；PVT1可通過競爭性地與miR-152結(jié)合來下調(diào)Patched 1，一種Hh信號通路的負向調(diào)節(jié)因子，激活HSCs，進而促進EMT過程的發(fā)生，促進肝纖維化。

2.2.4 同源盒轉(zhuǎn)錄反義RNA(homeobox transcript antisense RNA，HOTAIR) HOTAIR位于12號染色體上的同源框C(homeobox C，HOXC)基因座中，在多種腫瘤中高度表達并涉及腫瘤的不良預(yù)后，如乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌及非小細胞肺癌等；此外，HOTAIR在肝癌中具有異常表達，并且與肝癌的進展和復(fù)發(fā)密切相關(guān)。

HOTAIR在CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化模型、HBV感染后肝纖維化患者以及活化的HSCs中及均顯著升高，LX-2細胞中增加HOTAIR的表達可促進細胞增殖和活化；上述作用可能通過調(diào)控HSCs的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA metheyltransferase 1, DNMT1)、MEG3和p53通路實現(xiàn)[61]。Yu等[62]研究證明HOTAIR上調(diào)與肝纖維化的進展相關(guān)，在CCl4誘導(dǎo)肝纖維化小鼠中HOTAIR表達增加，抑制小鼠體內(nèi)的HOTAIR表達水平，Ⅰ型膠原和α-SMA水平顯著減弱，HSCs增殖和細胞周期也受到抑制；HOTAIR過表達可通過下調(diào)miR-29b表達并減弱其介導(dǎo)的表觀遺傳機制，導(dǎo)致DNMT3b和PTEN甲基化增強，部分地促進HSCs活化。

2.2.5 核旁裝配轉(zhuǎn)錄本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1，NEAT1) NEAT1由多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤基因座轉(zhuǎn)錄形成的一種新型lncRNA，是參與組成旁斑亞細胞器的核心結(jié)構(gòu)組分，作為許多基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，也在各種腫瘤的細胞增殖、遷移和侵襲中發(fā)揮重要作用，如乳腺癌、肺癌、胰腺癌及肝癌等[63]。Zhang等[64]發(fā)現(xiàn)在CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型和分離活化的HSCs中NEAT1表達顯著增加，NEAT1的過表達加速HSCs活化，包括HSCs細胞增殖和膠原蛋白表達，而NEAT1缺失在體內(nèi)和體外均可抑制肝纖維化；NEAT1和Kruppel樣因子6(Kruppel-like factor 6, KLF6)都是miR-122的靶標(biāo)，且NEAT1對HSCs活化的可被miR-122模擬物或KLF6敲除所阻斷，證明NEAT1競爭性結(jié)合miR-122通過miR-122-KLF6軸參與了HSCs活化。Wang等[65]發(fā)現(xiàn)在NAFLD大鼠模型中，NEAT1表達水平和乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS) mRNA水平均明顯增強，敲除NEAT1可降低肝細胞中FFA誘導(dǎo)的ACC和FAS升高，延緩NAFLD大鼠模型中的NAFLD進展。

2.2.6 肝纖維化相關(guān)lncRNA1(liver fibrosis-associated lncRNA1, lnc-LFAR1) Lnc-LFAR1促進肝纖維化，沉默lnc-LFAR1可抑制HSCs活化，減少TGF-β誘導(dǎo)的肝細胞凋亡，該作用在CCl4誘導(dǎo)和膽管結(jié)扎小鼠肝纖維化模型中均得到證實；Lnc-LFAR1促進Smad2/3與TGF-βR1的結(jié)合，也可直接與Smad2/3結(jié)合，促進TGF-β、Smad2、Smad3、Notch2和Notch3等的轉(zhuǎn)錄，激活TGF-β和Notch信號通路，促進肝纖維化[64]。

3 總結(jié)

近年，ncRNA在腫瘤診斷治療中迅速發(fā)展，且越來越多證據(jù)表明ncRNA在調(diào)節(jié)炎癥及免疫中也具有重要作用，隨著人工ncRNA抗原性的解決、靶標(biāo)預(yù)測工具的開發(fā)、運輸遞呈載體的深入研究，使ncRNA在臨床運用中具有可實現(xiàn)性；肝纖維化形成機制涉及多種細胞因子及信號途徑形成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，單一細胞因子或信號途徑靶點控制難以調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)/炎癥抑制、免疫應(yīng)答/免疫損傷、損傷修復(fù)/膠原過度沉積、誘導(dǎo)凋亡/細胞損傷等多方面失衡，調(diào)節(jié)肝纖維化相關(guān)ncRNA表達水平，可望是解決肝纖維化治療矛盾的有效方法。