張麗潔,李艷春,趙喬佳杰,王九菊,趙 園,魏緒倉(cāng)

(陜西省人民醫(yī)院血液病研究室,西安 710068;*通訊作者,E-mail:weixucang62@sina.com)

乳腺癌是當(dāng)今危害女性健康的主要癌癥類型。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道,2012年全球約有168萬(wàn)新發(fā)乳腺癌病例,522 000例死亡病例。近年來(lái)我國(guó)女性乳腺癌發(fā)病率也呈現(xiàn)明顯增高趨勢(shì),且生存率較發(fā)達(dá)國(guó)家低[1-4]。目前主要是通過(guò)B超、CT、PET-CT等檢查監(jiān)測(cè)乳腺癌患者是否發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移等來(lái)判斷預(yù)后情況。正常細(xì)胞惡變時(shí),膜表面的聚糖結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,分泌的異常糖鏈糖蛋白達(dá)到一定程度后向血液排放,并較多地存在于外周血液[5-8]。外周血TAP檢測(cè),由于檢查方便、快速、無(wú)創(chuàng),易于被患者接受,已成為最方便、最廣泛應(yīng)用于臨床的腫瘤檢查方法[9,10]。本研究通過(guò)檢測(cè)經(jīng)治乳腺癌患者的外周血TAP表達(dá)水平,分析其與治療后患者腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性,探討TAP檢測(cè)作為乳腺癌預(yù)后判斷指標(biāo)的可能性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018-01～2018-11于陜西省人民醫(yī)院入院診治的52例女性乳腺癌患者,年齡30-86歲。所有患者均采用手術(shù)切除聯(lián)合化療的方法治療。

1.2 試劑與方法

1.2.1 主要試劑 TAP檢測(cè)試劑盒購(gòu)自浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司。

1.2.2 方法 ①采血與制片:采集乳腺癌手術(shù)及化療后復(fù)查患者EDTA抗凝靜脈血2 ml,制備厚薄均勻的血片2張,每張涂片的用血量為25 μl。靜置待干后,在每張血涂片上依次垂直滴加3滴TAP凝集素試劑,靜置1.5-2 h自然干燥,形成圓形“斑點(diǎn)”,即標(biāo)本制作完成。②檢測(cè):將標(biāo)本置于TAP集成閱片儀(浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司)的顯微鏡下,用4倍平場(chǎng)消色差物鏡,依次掃描觀察血片標(biāo)本的三個(gè)斑點(diǎn),尋找特異形態(tài)的凝聚物。③TAP陽(yáng)性判斷:凝聚物顆粒面積≥121 μm2,邊緣完整,橢圓形、不規(guī)則圓形或多邊形,具有折光性,中央淡染區(qū),判為TAP陽(yáng)性;凝聚物顆粒面積<121 μm2,斑點(diǎn)呈樹(shù)枝狀、雪花狀,無(wú)弧形條帶狀小顆粒者,判為TAP陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,TAP陽(yáng)性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn),治療后未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組和出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組的TAP凝聚物面積采用M(P25,P75)的形式表示,兩組數(shù)據(jù)比較采用Wilcoxon(Mann-Whitney)秩和檢驗(yàn),P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床病理特征乳腺癌患者治療后TAP表達(dá)情況比較

對(duì)52例經(jīng)治乳腺癌患者進(jìn)行TAP檢測(cè),與年齡<60歲乳腺癌患者相比,年齡≥60歲患者治療后的TAP陽(yáng)性表達(dá)率顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.127,P<0.05);PR陰性乳腺癌患者較陽(yáng)性患者的TAP陽(yáng)性表達(dá)率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.282,P<0.05);與治療后未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組相比,出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組的TAP陽(yáng)性表達(dá)率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.326,P<0.05);而腫瘤的TNM分期、淋巴結(jié)受累狀態(tài)、腫瘤組織ER表達(dá)情況及病程對(duì)TAP表達(dá)陽(yáng)性率沒(méi)有影響(見(jiàn)表1)。

表1不同臨床病理特征乳腺癌患者治療后TAP表達(dá)情況

Table1TAPexpressioninbreastcancerpatientswithdifferentclinicalandpathologicalcharacteristicsaftertreatment

指標(biāo)nTAP陰性TAP陽(yáng)性陽(yáng)性率(%)χ2P年齡5.1270.024 <60歲2722518.5 ≥60歲25131248.0TNM分期1.2840.257 Ⅰ-Ⅱ36261027.8 Ⅲ-Ⅳ169743.8淋巴結(jié)狀態(tài)0.0080.927 陰性2416833.3 陽(yáng)性2819932.1ER狀態(tài)0.3800.530 陰性74342.9 陽(yáng)性45311431.1PR狀態(tài)4.2820.039 陰性26141246.2 陽(yáng)性2621519.2病程0.5530.457 <12月1914526.3 ≥12月33211236.4預(yù)后18.3260.000 未轉(zhuǎn)移3832615.8 轉(zhuǎn)移1431178.8

2.2 不同預(yù)后乳腺癌患者的TAP含量比較

比較治療后出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者和未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的TAP凝聚物面積大小,并進(jìn)行Wilcoxon秩和檢驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)治療后出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者的TAP凝聚物面積[145.9(128,154.7)μm2]高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組[97.6(79.1,116.8)μm2],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Mann-WhitneyU=52,P<0.05)。

3 討論

乳腺癌患者經(jīng)手術(shù)治療和放化療輔助治療后需要定期做超聲、CT、PET-CT等影像學(xué)檢查有無(wú)轉(zhuǎn)移以評(píng)估預(yù)后情況。這些大量的檢查給患者造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),亟需一種簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)手段實(shí)現(xiàn)對(duì)乳腺癌患者預(yù)后情況的初步評(píng)估。

大量研究表明異常糖鏈糖蛋白(TAP)的產(chǎn)生與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后存在密切關(guān)系。TAP是腫瘤細(xì)胞在代謝過(guò)程中排放出來(lái)的異常糖蛋白和鈣-組蛋白復(fù)合物,此類物質(zhì)達(dá)到一定濃度后釋放入血液[8-10]。本研究所采用的TAP檢測(cè)技術(shù)是一種異常糖鏈的多級(jí)偶聯(lián)技術(shù),檢測(cè)試劑含有凝集素,通過(guò)輔助和促進(jìn)多種異常糖鏈糖蛋白和鈣-組蛋白相互凝聚成特異形狀的類晶體凝聚物,在TAP檢測(cè)用圖像分析儀下,可觀察到特異圖像,與沒(méi)有TAP的血液有顯著的區(qū)別。該檢測(cè)技術(shù)可在同一反應(yīng)體系中、將二十多種與腫瘤密切相關(guān)、糖鏈結(jié)構(gòu)異常的糖蛋白進(jìn)行一次性組合檢測(cè),大大提高了腫瘤檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。TAP檢測(cè)已被應(yīng)用于多種腫瘤的早期診斷,廣譜篩查,療效監(jiān)控及預(yù)后判斷,如消化道腫瘤的早期診斷和預(yù)后[11-14],肝癌的早期診斷[15],非小細(xì)胞肺癌的療效監(jiān)控[16],膀胱癌的早期診斷和預(yù)后判斷[17,18]等。祁潔等[19]的研究發(fā)現(xiàn)TAP檢測(cè)可作為乳腺癌的早期篩查指標(biāo),敏感度為80%,特異度為100%,準(zhǔn)確度為90.42%,優(yōu)于CEA和CA153檢測(cè)指標(biāo)。史英等[20]發(fā)現(xiàn)TAP在乳腺癌療效監(jiān)測(cè)等方面具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值,乳腺癌患者經(jīng)過(guò)2周期化療后,臨床療效為部分緩解者化療后TAP凝聚物面積減小;疾病進(jìn)展者其化療后TAP凝聚物面積增加。

我們通過(guò)比較不同臨床病理特征乳腺癌患者治療后TAP表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)與年齡<60歲患者相比,年齡≥60歲患者的TAP陽(yáng)性表達(dá)率顯著增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.127,P<0.05),PR陰性乳腺癌患者的TAP陽(yáng)性表達(dá)率高于PR陽(yáng)性乳腺癌患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.282,P<0.05),這與史英等[20]對(duì)不同臨床病理特征乳腺癌患者治療前TAP表達(dá)的比較結(jié)果有所不同,說(shuō)明乳腺癌治療前和治療后TAP表達(dá)情況可能與不同的臨床病理特征有關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)與治療后未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組相比,出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組的TAP陽(yáng)性表達(dá)率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.326,P<0.05);且出現(xiàn)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者組的TAP凝聚物面積[145.9(128,154.7)μm2]高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組[97.6(79.1,116.8)μm2],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Mann-WhitneyU=52,P<0.05),說(shuō)明TAP含量在一定程度上體現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移的情況。

由于本研究選取的乳腺癌患者在治療前進(jìn)行TAP檢測(cè)的病例數(shù)較少,對(duì)于治療是否影響TAP含量仍需進(jìn)一步證實(shí),但是根據(jù)觀察到的1例乳腺癌患者治療前后TAP含量的變化可以看到TAP凝聚物面積由治療前的178.8 μm2降低至治療后的130.529 μm2,說(shuō)明手術(shù)及化療后TAP含量有下降的趨勢(shì)。劉麗燕等[16]在非小細(xì)胞肺癌的研究中也發(fā)現(xiàn)手術(shù)并化療治療后的非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)的TAP含量較治療前顯著降低。這些結(jié)果說(shuō)明TAP含量在一定程度上反映了體內(nèi)腫瘤負(fù)荷的情況。

本研究中樣本量偏少,要更科學(xué)地評(píng)估TAP檢測(cè)在乳腺癌患者預(yù)后判斷中的意義需增大樣本量,可在后續(xù)研究中深入探索。

綜上所述,乳腺癌患者的TAP表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系,TAP檢測(cè)結(jié)果可以作為乳腺癌患者預(yù)后判斷的一種參考指標(biāo)。