蘇婧婧，李慶林

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)科研實(shí)驗(yàn)中心，新安醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230038)

衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》對(duì)疲勞的定義是機(jī)體過(guò)用而引起的功能降低并出現(xiàn)機(jī)體不適的狀態(tài)[1]，主要表現(xiàn)為四肢無(wú)力、腰酸腿軟、氣力不足[2]。疲勞的產(chǎn)生主要生理本質(zhì)是由于代謝產(chǎn)物蓄積，包括乳酸、肝糖原、氮的代謝產(chǎn)物、自由基等[3-4]。中醫(yī)認(rèn)為，疲勞現(xiàn)象的出現(xiàn)與五臟的失調(diào)有密切的關(guān)系，四肢無(wú)力多與脾胃有關(guān)，腰酸腿軟多與腎臟有關(guān)，氣力不足多與肺臟有關(guān)，頭腦不清多與心臟有關(guān)[5-6]。人參味甘、微苦，性微溫，為多年生草本植物，具有滋陰補(bǔ)腎、扶正固本的作用，含多種皂苷和多糖類成分，適用于調(diào)整血壓、恢復(fù)心臟功能、神經(jīng)衰弱及身體虛脫等癥[7]。靈芝味甘，性平，具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘、滋補(bǔ)強(qiáng)身的功效，含氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、三萜類、多糖類等，常組方用于神經(jīng)衰弱、利尿益腎、虛勞咳喘、改善免疫等癥狀[7]。該研究旨在探討人參、靈芝2種原料配伍制成膠囊劑緩解體力疲勞的作用。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)樣品。人參靈芝膠囊(自制)，由人參、靈芝水提、濃縮、干燥后加輔料制備而成，0.45 g/粒，每日食用4粒，相當(dāng)于人體每日食用人參2 g、靈芝2 g。

1.1.2動(dòng)物分組。 SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，體重(20±2)g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物質(zhì)量合格證：No.34000200000691，許可證號(hào)：SCXK(皖)2011-002。試驗(yàn)選用健康小鼠160只，分為4個(gè)試驗(yàn)組，各試驗(yàn)組動(dòng)物再分為4組(高、中、低3個(gè)劑量組及陰性對(duì)照組)，每組10只。經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.1.3主要儀器。ML303電子分析天平、DS-671電子秤、恒溫游泳箱、3K15冷凍離心機(jī)、TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、AU400全自動(dòng)生化儀、BHW2恒溫水浴鍋。

1.1.4主要試劑。尿素(UREA)測(cè)定試劑盒(紫外-谷氨酸脫氫酶法)，購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；肝糖原測(cè)試盒、全血乳酸測(cè)試盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1劑量選擇、受試樣品給予方式和時(shí)間。以人體推薦量的20倍換算為小鼠中劑量組，另設(shè)高、低劑量組。受試樣品連續(xù)灌胃30 d，每天1次，每次灌胃體積以20 mL/kg。高劑量組0.9 g/kg(人用劑量30倍)、中劑量組0.6 g/kg(人用劑量20倍)、低劑量組0.3 g/kg(人用劑量10倍)。每周根據(jù)小鼠體重調(diào)整灌胃劑量。

1.2.2負(fù)重游泳試驗(yàn)。最后一次灌胃給藥30 min后，用手術(shù)線和膠布在小鼠尾部固定5%體重的鉛皮，各給藥組隨機(jī)抽取一只置于水深40 cm、水溫(25±2)℃的恒溫游泳箱中游泳，分別記錄各組小鼠自游泳開(kāi)始至完全沒(méi)入水中10 s的時(shí)間。

1.2.3運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量測(cè)定。最后一次灌胃給藥30 min后，將小鼠置于30 ℃的恒溫游泳箱中，進(jìn)行90 min不負(fù)重游泳，休息60 min后摘眼球采全血約0.5 mL，分離血清2 000 r/min離心15 min，按照試劑盒的操作步驟，全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清中尿素含量。

1.2.4肝糖原含量測(cè)定。最后一次灌胃給藥30 min后，小鼠頸椎脫臼處死后，解剖取出肝臟，剪碎后稱取肝臟(90～100 mg)，按試劑盒的操作步驟，加入堿液沸水浴20 min，取一定量的檢測(cè)液加入顯色劑，沸水浴5 min，620 nm波長(zhǎng)，1 cm光徑，比色測(cè)定各管吸光度，計(jì)算肝糖原含量。

1.2.5血乳酸含量測(cè)定。最后一次給藥30 min后，從小鼠內(nèi)眥取血50 μL，將小鼠置于30 ℃的恒溫游泳箱中，游泳10 min，游泳結(jié)束后休息0、20 min后各取血50 μL，按照試劑盒操作說(shuō)明，530 nm波長(zhǎng)，1 cm光徑，比色測(cè)定各管吸光度，計(jì)算血乳酸含量及曲線下面積。

2 結(jié)果與分析

2.1人參靈芝膠囊對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響由表1可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，人參靈芝膠囊高、中劑量組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)，并呈一定的劑量依賴性。

表1 人參靈芝膠囊對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量和肝糖原含量的影響

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

2.2人參靈芝膠囊對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素含量的影響由表1可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，人參靈芝膠囊各劑量組均可降低小鼠游泳后的血清尿素含量(P<0.05)，以中劑量組作用最為明顯。表明人參靈芝膠囊可減少或抑制疲勞小鼠血清尿素的產(chǎn)生。

2.3人參靈芝膠囊對(duì)小鼠肝糖原含量的影響由表1可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，人參靈芝膠囊高、中、低各劑量組小鼠的肝糖原含量顯著升高(P<0.01)。表明人參靈芝膠囊具有促進(jìn)小鼠肝糖原儲(chǔ)備的作用。

2.4人參靈芝膠囊對(duì)小鼠血乳酸曲線下面積的影響由表2可見(jiàn)，與陰性對(duì)照組比較，人參靈芝膠囊各劑量組小鼠游泳前血乳酸值、游泳后0 min血乳酸值均無(wú)顯著性影響(P>0.05)；中劑量組可明顯降低小鼠游泳后20 min血乳酸值(P<0.05)；中劑量組小鼠血乳酸曲線下面積顯著降低(P<0.01)。表明人參靈芝膠囊具有減少小鼠運(yùn)動(dòng)后乳酸生成的作用。

表2 人參靈芝膠囊對(duì)小鼠血乳酸值及曲線下面積的影響

注：與陰性對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01

Note：Compared with the negative control group，*P<0.05，**P<0.01

3 結(jié)論與討論

體力疲勞又稱運(yùn)動(dòng)性疲勞，是由于機(jī)體進(jìn)行重體力勞動(dòng)、大運(yùn)動(dòng)量活動(dòng)，由于時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，肌肉過(guò)度緊張，生物能源消耗過(guò)多。疲勞直接的表現(xiàn)主要是運(yùn)動(dòng)耐力下降，力竭游泳時(shí)間是反映運(yùn)動(dòng)耐力的重要指標(biāo)[8]。負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組比較，人參靈芝膠囊高劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，人參靈芝膠囊能夠提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力，提高機(jī)體抗疲勞的功能，延長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)時(shí)間。

尿素是哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物，隨著運(yùn)動(dòng)的進(jìn)行，氨基酸分解代謝增強(qiáng)，血清尿素含量反映的是機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)后代謝產(chǎn)物的分解能力，人參靈芝膠囊高、中、低3個(gè)劑量組均能降低運(yùn)動(dòng)后小鼠血清尿素的含量(P<0.05)，表明人參靈芝膠囊能夠加速機(jī)體代謝產(chǎn)物的清除，加速疲勞的消解。在長(zhǎng)時(shí)間游泳后，蛋白質(zhì)和含氮化學(xué)物的分解代謝，體內(nèi)尿素含量增加，機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷能力降低。

在劇烈運(yùn)動(dòng)消耗大量血糖時(shí)，肌糖原分解供能，為維持血糖水平，機(jī)體啟用肝糖原，肝糖原的儲(chǔ)備量是反映抗疲勞程度的敏感指標(biāo)[9]。試驗(yàn)結(jié)果表明，人參靈芝膠囊高劑量組能顯著提高小鼠肝糖原含量(P<0.01)，為機(jī)體提供較好的能量?jī)?chǔ)備，延緩疲勞的產(chǎn)生，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力。

人參是傳統(tǒng)的珍貴滋補(bǔ)中藥，靈芝更具“仙草”的美譽(yù)，具有很高的藥用價(jià)值。該研究從現(xiàn)代藥理研究角度闡釋人參靈芝抗疲勞的作用。人參發(fā)揮抗疲勞作用的主要活性物質(zhì)是人參皂苷[10]、人參多糖和人參蛋白。靈芝活性成分復(fù)雜，靈芝多糖是其發(fā)揮抗疲勞作用的主要活性物質(zhì)。由于人參和靈芝幾乎無(wú)毒副作用，且臨床效果顯著，已開(kāi)發(fā)成多種保健食品。

綜上所述，人參靈芝膠囊能明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，降低運(yùn)動(dòng)后血清中尿素和乳酸含量，增加肝糖原的儲(chǔ)備，具有緩解體力疲勞的作用。