馬英玲，羅麗蟬

(1.廣西生態(tài)工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西柳州 545004；2.廣西高峰林場，廣西南寧 545004)

油茶(Camelliaoleifer)是世界四大木本油料之一，其所產(chǎn)的茶籽油不飽和脂肪酸含量達(dá)90%以上，不含對人體有害的芥酸，能降低血清膽固醇含量，可預(yù)防高血壓和常見的心血管疾病，具有很好的保健作用，被人們稱為長壽油。2009年10月，廣西區(qū)政府出臺了《廣西壯族自治區(qū)人民政府辦公廳關(guān)于加快油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的意見》，提出了廣西油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的目標(biāo)[1]。隨著油茶種植面積的不斷增加，油茶病蟲害發(fā)生越來越多[2]。油茶根腐病是近年來危害油茶的一種毀滅性病害。為了有效抑制該病害的發(fā)生和蔓延，筆者對油茶根腐病致病菌的分離、檢測與防治藥劑的篩選進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1油茶根腐病病原菌分離

1.1.1試驗(yàn)材料。油茶根腐病病株采自廣西柳州、南寧的油茶林地。

1.1.2試驗(yàn)方法。洗凈供試油茶病根，以75%乙醇擦涂表面，并用滅菌解剖刀將油茶組織切成約4 mm2的小方塊(取病健組織)；將小方塊依次放入75%乙醇約50 s、0.1%升汞1 min，無菌水沖洗3次，每次浸泡時(shí)間2 min，然后移置于PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯)上。將其放置25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)5 d，長出菌絲后，挑取尖端菌絲進(jìn)行純化培養(yǎng)[3]。

1.2油茶根腐病病原菌致病性檢測[4](人工誘發(fā)試驗(yàn))

1.2.1試驗(yàn)材料。人工誘發(fā)試驗(yàn)接種用的菌株，均分離自自然感病的病變組織獲得的純菌株，供試寄主為當(dāng)年油茶嫁接苗。

1.2.2試驗(yàn)方法。以有傷和無傷2種方法進(jìn)行人工接種，用菌絲體和病原菌的孢子懸浮液分別對健康供試油茶植株進(jìn)行刺傷接種和非刺傷接種2種方法[5]。有傷接種是用滅菌的大頭針，在健康油茶植株根莖消過毒的接種處扎幾個(gè)小孔，然后取直徑5 mm的菌種反貼于植株表面；或用滅菌的蒸餾水將菌種制成孢子懸浮液，將分生孢子懸浮液接種于植株接種處。無傷接種是在健康油茶植株根莖消過毒的接種處，將直徑5 mm的菌絲塊反貼于表面；或?qū)⒎稚咦討腋∫航臃N于植株接種處，接種處表面未被刺傷。2組試驗(yàn)均分別以不帶菌的培養(yǎng)基和無菌水做對照試驗(yàn)。定期觀察發(fā)病情況，并記錄。

1.3油茶根腐病田間防治試驗(yàn)

1.3.1試驗(yàn)材料。供試藥劑：50%完美WP，石家莊市綠豐化工有限公司生產(chǎn)；50%退菌特，天津市興果農(nóng)藥廠生產(chǎn)；70%白色甲托(甲硫福美雙)WP，陜西湯普森生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.3.2試驗(yàn)方法。試驗(yàn)地點(diǎn)設(shè)在油茶根腐病發(fā)生的廣西柳州油茶育苗場。試驗(yàn)在病害發(fā)生初期的5月進(jìn)行。每種藥劑設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)處理250株苗木，設(shè)12個(gè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積約1 m2。在每個(gè)小區(qū)內(nèi)，隨機(jī)選擇供試藥劑，對油茶嫁接苗淋藥處理，7 d后再淋1次藥，對照用清水處理，重復(fù)3次，藥效檢查時(shí)間在最后一次噴藥后10 d進(jìn)行。并根據(jù)病級統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)[6]和防治效果。發(fā)病分級標(biāo)準(zhǔn)[5]見表1。

表1 油茶根腐病發(fā)病分級標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

2.1油茶根腐病致病菌分離結(jié)果共分離15個(gè)樣本，分離到鐮孢屬(Fusarium)真菌純菌株15株，在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)6 d的菌落見圖1。PDA培養(yǎng)基上長滿氣生菌絲，白色棉絮狀，菌落圓形，菌落底部培養(yǎng)基初期不變色，后期變色。挑取適量菌絲在顯微鏡下鏡檢，其病原菌特征見圖2。菌絲體有格分枝，病原菌產(chǎn)生大小2種孢子，大型孢子長橢圓形或橢圓形，有3～5個(gè)隔膜，稍彎曲，向兩端漸細(xì)；小型分生孢子橢圓形或臘腸型，少數(shù)稍彎曲，1～2個(gè)隔膜或無隔膜。

圖1 病原菌在PDA上的菌落形態(tài)Fig.1 Colony morphology of pathogens on PDA

圖2 顯微鏡下的病原菌特征Fig.2 Microscopic characteristics of pathogens under microscope

2.2油茶根腐病原菌致病性檢測結(jié)果以有傷和無傷2種方法進(jìn)行人工接種，第3、6、9、12天分別記錄發(fā)病情況，結(jié)果見表2、圖3～6。

從接種誘發(fā)的病苗中，取離接種點(diǎn)有一定距離的病組織分離培養(yǎng)[7]，獲得鐮孢屬(Fusarium)真菌純菌株，在顯微鏡下觀察大小2種孢子，大型孢子長橢圓形或橢圓形，有3～5個(gè)隔膜，稍彎曲，向兩端漸細(xì)；小型分生孢子橢圓形或臘腸型，少數(shù)稍彎曲，1～2個(gè)隔膜或無隔膜。鐮孢屬(Fusarium)真菌是油茶根腐病的主要致病菌(圖7)。

表2 油茶根腐病誘發(fā)試驗(yàn)

圖3 接種第3天部分油茶幼苗 Fig.3 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 3 days

圖4 接種第6天部分油茶幼苗Fig.4 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 6 days

圖5 接種第9天部分油茶幼苗Fig.5 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 9 days

圖6 接種第12天部分油茶幼苗Fig.6 Parts of Camellia oleifera seedlings inoculated 12 days

圖7 油茶根腐病誘發(fā)試驗(yàn)再分離培養(yǎng)的病原菌Fig.7 Isolation and cultivation of pathogenic bacteria from root rot of Camellia oleifera

2.3油茶根腐病田間防治結(jié)果在室內(nèi)藥劑抑菌試驗(yàn)[8]中，選取3種對油茶根腐病菌抑菌效果較好的藥劑，進(jìn)行田間防治試驗(yàn)，結(jié)果表明，70%白色甲托WP防治效果可達(dá)79.3%，其次是50%完美WP，防治效果為68.8%，防治效果較差的是50%退菌特WP，其防治效果為56.7%(表3)。

為檢驗(yàn)不同藥劑田間對油茶根腐病的防治效果差異性，將試驗(yàn)數(shù)據(jù)錄入SPSS軟件進(jìn)行藥劑與防治效果的Spearman相關(guān)分析和藥劑對防治效果的單因素方差分析，結(jié)果表明，F(xiàn)=55.158，Sig.=0.000<0.01，表明這3種藥劑在田間的防治效果差異極顯著。

表3油茶根腐病田間防治試驗(yàn)病情指數(shù)

Table3DiseaseindexofrootrotofCamelliaoleiferainfieldcontrolexperiment

藥劑Drug施藥前病情指數(shù)Disease indexbefore application第3次淋藥10 d后10 days after the third drenching病情指數(shù)Disease index平均防治效果Average control effect∥%50%完美800倍液50% Wanmei 800 times liquid25.817.868.870%白色甲托800倍液70% white methyl tobuzin 800 times liquid26.211.979.350%退菌特 800倍液50% bacteri-ostatic 800 times liquid24.724.8 56.7清水對照Water control25.457.3—

3 結(jié)論與討論

油茶根腐病在廣西從4月開始發(fā)病，7、8月為病發(fā)高峰期。感病油茶當(dāng)年抽出的春梢和秋梢減少，葉片慢慢褪綠、無光澤，后期葉片枯黃并大量脫落，樹冠稀疏，花蕾量減少，7—8 月是重病樹的死亡期。通過病原菌的組織分離和人工誘發(fā)試驗(yàn)，結(jié)果表明，油茶根腐病的致病菌為鐮孢屬(Fusarium)真菌，該病菌是土壤習(xí)居菌，腐生為主，致病力強(qiáng)[9]。侵入寄主后，潛育期短，短期內(nèi)病害發(fā)生嚴(yán)重且傳染速度快。通過用多種殺菌劑對致病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力抑菌試驗(yàn)，選擇抑菌效果較好的3種藥劑進(jìn)行田間防治試驗(yàn)，結(jié)果表明，75%白色甲托的田間防治效果最好，防治效果達(dá)79.3%；其次為50%完美WP，防治效果為68.8%；最后是50%退菌特WP，防治效果為56.7%。這些藥劑在市場上易買到，可在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。