王曉雯，張 蓉，朱建亞，劉麗麗，馬國(guó)慶，朱 華

（北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所/漁業(yè)生物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100068）

鱘魚(yú)屬于硬骨魚(yú)綱、輻鰭亞綱、鱘形目，是我國(guó)重要的淡水經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，在20多個(gè)省市均有養(yǎng)殖[1]。西伯利亞鱘（Acipenser baeri）是最重要的鱘魚(yú)養(yǎng)殖品種之一，為亞冷水性魚(yú)類(lèi)，適宜的生長(zhǎng)溫度為16.7～24.7℃[2]。魚(yú)類(lèi)作為變溫動(dòng)物，水體溫度是其生長(zhǎng)發(fā)育最重要的環(huán)境因子之一，不但可直接影響魚(yú)類(lèi)的攝食、生長(zhǎng)、免疫和生殖等活動(dòng)，而且水溫改變可間接對(duì)魚(yú)類(lèi)產(chǎn)生影響。超出魚(yú)類(lèi)生理適應(yīng)范圍的溫度都會(huì)引起魚(yú)類(lèi)的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致其生理失衡和免疫力下降[3-5]。近年來(lái)，全球氣候變暖對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來(lái)的影響逐漸引起人們的關(guān)注。隨著鱘魚(yú)養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，養(yǎng)殖水體負(fù)載越來(lái)越大，夏季長(zhǎng)時(shí)間的高溫超過(guò)魚(yú)類(lèi)的適應(yīng)范圍，引起魚(yú)類(lèi)的應(yīng)激反應(yīng)、甚至病害頻發(fā)，給鱘魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大損失[6-7]。

魚(yú)類(lèi)通過(guò)內(nèi)分泌和生理功能的改變來(lái)應(yīng)對(duì)環(huán)境的變化，有學(xué)者研究表明高溫對(duì)魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)[7-9]、抗氧化酶活[8-11]、消化酶活[11-12]、代謝和非特異性免疫指標(biāo)[13-14]等方面均有不同程度影響前期，王靜波等[6]和田照輝等[15]學(xué)者們對(duì)鱘魚(yú)響應(yīng)熱應(yīng)激的研究集中于血清抗氧化指標(biāo)、非特異性免疫指標(biāo)和鰓組織熱休克蛋白70基因（hsp70）的表達(dá)變化。然而肝臟作為魚(yú)類(lèi)消化系統(tǒng)的一部分，是魚(yú)類(lèi)最主要的消化腺，在魚(yú)類(lèi)的物質(zhì)代謝、解毒和防御生命活動(dòng)中扮演著極為重要的角色，高溫應(yīng)激下鱘魚(yú)的肝臟是否能應(yīng)對(duì)脅迫免受損傷值得研究。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）是動(dòng)物體內(nèi)的兩種重要氨基轉(zhuǎn)移酶，在平衡機(jī)體氨基酸以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)與糖類(lèi)間物質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用[16]。健康狀況下，ALT和AST主要存在于肝臟中，只有少量被釋放到血液中，因此是檢測(cè)肝臟功能是否正常的重要指標(biāo)[12]。血液中蛋白含量高低是衡量魚(yú)體的生理狀態(tài)的指標(biāo)之一，相對(duì)穩(wěn)定的蛋白濃度表明魚(yú)體生理狀態(tài)平穩(wěn)[17]，血清蛋白質(zhì)主要也是在肝臟合成并釋放到血液中，故血清蛋白含量也可反應(yīng)機(jī)體肝臟的健康程度。熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）是一類(lèi)在生物進(jìn)化中最保守的應(yīng)激蛋白，很多學(xué)者發(fā)現(xiàn)其在環(huán)境脅迫因子（高溫、重金屬和微生物感染等）刺激下表達(dá)量顯著升高[18-21]，D.Parsell、D.A.Picard等[22-23]的研究表明HSP70和HSP90均可通過(guò)降解異常蛋白促進(jìn)蛋白的正確重折疊而在應(yīng)對(duì)熱脅迫時(shí)發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。

本研究將從西伯利亞鱘血清的肝功指標(biāo)和肝臟hsp70和hsp90β的表達(dá)變化這兩方面重點(diǎn)探究西伯利亞鱘的肝臟對(duì)熱應(yīng)激的響應(yīng)。本研究結(jié)果擬為鱘魚(yú)抗高溫應(yīng)激調(diào)控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，將有助于鱘魚(yú)生產(chǎn)者理解熱應(yīng)激的生理變化、評(píng)估熱應(yīng)激的不利影響并做好熱應(yīng)激預(yù)防。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú)及飼養(yǎng)

西伯利亞鱘幼魚(yú)來(lái)自北京市十渡鱘魚(yú)繁殖基地，體重為（34.905±3.761）g，挑選規(guī)格統(tǒng)一的健康西伯利亞鱘進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)前在循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)7 d，水溫（23±1）℃。養(yǎng)殖容器為圓柱形PP水槽，內(nèi)徑約1 m，水深0.5 m；試驗(yàn)用水為曝氣后的自來(lái)水。試驗(yàn)期控制水溫（23±1）℃，日投餌量為魚(yú)體質(zhì)量的1%，每天分3次投喂；定期排污。取樣前24 h內(nèi)停止投喂。

1.2 半致死高溫的確定

將120尾23℃暫養(yǎng)的試驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)轉(zhuǎn)入30℃、31℃和32℃和33℃的水體（60 cm×40 cm×40 cm），每個(gè)溫度組設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)平行10尾魚(yú)。充入足夠的空氣，觀察96 h內(nèi)鱘魚(yú)的死亡情況，及時(shí)撈出死魚(yú)，計(jì)算累計(jì)死亡率。

1.3 高溫脅迫試驗(yàn)

根據(jù)半致死高溫試驗(yàn)結(jié)果，選擇30℃作為急性熱應(yīng)激的水溫。23℃暫養(yǎng)7 d后，采集6尾魚(yú)作為0 h樣品，其余60尾西伯利亞鱘迅速轉(zhuǎn)入30℃的水體，并設(shè)置3個(gè)水槽，作為平行組，進(jìn)行熱應(yīng)激試驗(yàn)。分別在熱應(yīng)激后3、6、12、24、48和96 h，每組隨機(jī)選取6尾鱘魚(yú)，MS-222麻醉后尾靜脈取血，采集肝臟樣品，液氮速凍后轉(zhuǎn)至-80℃保存，用于提取RNA。采集的血液室溫放置2 h，4℃靜置16 h，3 000 r/min離心10 min，取上清，制得血清，用于測(cè)定血清的肝功指標(biāo)。

1.4 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力和總蛋白濃度的測(cè)定

谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力（AST）測(cè)定采用微量酶標(biāo)法。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力以卡門(mén)氏單位表示，定義為1 mL液體，反應(yīng)液總?cè)萘? mL，波長(zhǎng)340 nm，1 cm光徑，25℃，1 min內(nèi)與底物L(fēng)-丙氨酸和α-酮戊二酸所生成的丙酮酸，使還原態(tài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化成氧化態(tài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸而引起吸光度每下降0.001為一個(gè)單位（1卡門(mén)氏單位=0.482 IU/L，25℃）。

谷草轉(zhuǎn)氨酶活力以卡門(mén)氏單位表示，定義為1 mL液體，反應(yīng)液總?cè)萘? mL，波長(zhǎng)340 nm，1 cm光徑，25℃，1 min內(nèi)與底物L(fēng)-天門(mén)冬氨酸和α-酮戊二酸所生成的草酰乙酸，使還原態(tài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化成氧化態(tài)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸而引起吸光度每下降0.001為一個(gè)單位（1卡門(mén)氏單位=0.482 IU/L，25℃）

血清總蛋白濃度的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法，使用考馬斯亮藍(lán)測(cè)定試劑盒測(cè)定。

白蛋白濃度采用溴甲酚綠比色法。有非離子型表面活性劑存在時(shí)，溴甲酚綠可與白蛋白形成藍(lán)綠色復(fù)合物，顏色的深度與樣本中白蛋白濃度成正比。以上測(cè)定均使用測(cè)試試劑盒（南京建成生物工程研究所），在Econ全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（BioTek）上進(jìn)行測(cè)定。

1.5 西伯利亞鱘肝臟組織RNA的提取和cDNA的合成

取大約3 mg肝臟組織加入800μL TRIzol（Takara），按照該試劑附的操作方法采用氯仿抽提法提取總RNA，1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

以提取的總RNA（濃度為300 ng/μL）為模板，采用TransScript First-Strand cDNA Synthesis Super Mix試劑盒（Takara），以O(shè)ligo（dT）為反轉(zhuǎn)錄引物，按試劑盒操作手冊(cè)合成cDNA。根據(jù)NCBI上已有的hsp70（HM348777.1）和hsp90β（JX477807.1）cDNA序列，使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量引物，分別為hsp70-F，hsp70-R，hsp90β-F，hsp90β-R，引物序列見(jiàn)表1，并由北京擎科新業(yè)生物技術(shù)有限公司合成。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:對(duì)部分樣品cDNA進(jìn)行混合，進(jìn)行4倍梯度稀釋?zhuān)韵♂尯蟮腸DNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，每個(gè)模板設(shè)3個(gè)重復(fù)。熒光定量PCR反應(yīng)體系（20μL）:SYBR Premix ExTaq10μL，上下游引物各0.4μL，模板1μL，ddH2O 8μL，ROX II 0.2μL。反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性5 min，95℃15 s，59.6℃30 s，40個(gè)循環(huán)。實(shí)時(shí)連續(xù)測(cè)定擴(kuò)增過(guò)程中的熒光值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以西伯利亞鱘18S rDNA（引物設(shè)計(jì)為18S-F，18S-R）作為內(nèi)參，使用ABI7500熒光定量PCR儀，對(duì)熱應(yīng)激后所有肝臟cDNA樣品進(jìn)行分析，反應(yīng)體系及反應(yīng)條件與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立一致，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。設(shè)定0 h樣品該基因的表達(dá)量為“1”，結(jié)果采用2-ΔΔCt法計(jì)算。

表1 試驗(yàn)中用到的引物序列Table 1 Primers used in the experiment

圖1 不同溫度應(yīng)激下西伯利亞鱘幼魚(yú)的累計(jì)死亡率Figure 1 The accumulative total mortality of Acipenser baeriunder different water temperature

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。利用SPSS17.0軟件的ANOVA單因素方差分析，對(duì)不同組織間均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，如果ANOVA分析有意，再用Duncan進(jìn)行兩兩比較。顯著性水平設(shè)為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 西伯利亞鱘幼魚(yú)的半致死高溫

96 h內(nèi)不同高溫應(yīng)激下西伯利亞鱘的死亡情況，見(jiàn)圖1。試驗(yàn)結(jié)果表明，西伯利亞鱘幼魚(yú)（34.905±3.761）g的半致死高溫為31℃。30℃應(yīng)激下，鱘魚(yú)沒(méi)有發(fā)生死亡，考慮到急性熱應(yīng)激試驗(yàn)選擇一個(gè)溫度高但不發(fā)生死亡的溫度，所以選擇30℃作為本試驗(yàn)的急性熱應(yīng)激溫度。

2.2 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力的影響

在熱應(yīng)激后（見(jiàn)圖2），西伯利亞鱘血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力逐步升高，48 h時(shí)達(dá)到峰值，顯著高于0時(shí)刻（P＜0.05）。然而在96 h時(shí)，其谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力迅速降低至0時(shí)刻水平。

圖2 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力的影響Figure 2 Effects of heat stress on the activity of serum ALT in Acipenser baeri

在熱應(yīng)激6 h，西伯利亞鱘血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活力開(kāi)始緩慢升高，48 h較24h迅速升高，并達(dá)到峰值（圖3）。96 h時(shí)，西伯利亞鱘谷草轉(zhuǎn)氨酶活力有所下降，但仍顯著高于0時(shí)刻的酶活力（P＜0.05）。

圖3 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘血清谷草轉(zhuǎn)氨酶活力的影響Figure 3 Effects of heat stress on the activity of serum AST in Acipenser baeri

2.3 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘血清蛋白濃度的影響

如圖4所示，熱應(yīng)激后3～12 h，西伯利亞鱘幼魚(yú)的血清總蛋白濃度緩慢上升，于12 h達(dá)到一個(gè)較高點(diǎn)，至24和48 h血清總蛋白濃度有所下降，96 h達(dá)到0時(shí)刻水平?？梢?jiàn)，血清總蛋白濃度整體維持恒定，魚(yú)體生理狀態(tài)平穩(wěn)。

圖4 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘總蛋白濃度的影響Figure 4 Effects of heat stress on the serum total protein concentrations in Acipenser baeri

西伯利亞鱘幼魚(yú)血清白蛋白濃度除24 h外，在熱應(yīng)激后不同時(shí)間點(diǎn)，均顯著低于0時(shí)刻，但各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)顯著差異（見(jiàn)圖5）?？梢?jiàn)，高溫刺激后，西伯利亞鱘幼魚(yú)肝臟的功能受到影響，白蛋白合成量有所減少。

圖5 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘白蛋白濃度的影響Figure 5 Effects of heat stress on the serum albumin concentrations in Acipenser baeri

2.1 熱應(yīng)激下西伯利亞鱘肝臟hsp70和hsp90β的表達(dá)情況

應(yīng)用Applied Biosystems7500熒光定量PCR儀自帶軟件程序設(shè)置生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。以CT值作為縱坐標(biāo)，基因相對(duì)拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)作為為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表2所示。3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值均大于0.99，具有良好的線性關(guān)系，擴(kuò)增效率E值均位于96.25%～110%之間，說(shuō)明這3對(duì)熒光定量引物可用于后續(xù)試驗(yàn)。

表2 3對(duì)引物的擴(kuò)增效率及擬合度Table 2 Amplification efficiency and degree of fitting of three pairs of primers

熱應(yīng)激下西伯利亞鱘肝臟hsp70和hsp90βmRNA的相對(duì)表達(dá)量均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)（圖6，7），二者表達(dá)量在6 h達(dá)到峰值（P＜0.05），hsp70mRNA的轉(zhuǎn)錄水平達(dá)到0時(shí)刻的15.61倍，hsp90βmRNA的轉(zhuǎn)錄水平達(dá)到0時(shí)刻的15.55倍。西伯利亞鱘肝臟hsp90β對(duì)熱應(yīng)激的反應(yīng)更敏感，3 h時(shí)其相對(duì)表達(dá)量即升高到0時(shí)刻的7.43倍，高于hsp70mRNA的相對(duì)表達(dá)量（4.66倍）。48 h，hsp70mRNA和hsp90βmRNA的轉(zhuǎn)錄水平均迅速降低，于熱應(yīng)激96 h時(shí)恢復(fù)到0時(shí)刻水平。

圖6 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘肝臟hsp70 mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響Figure 6 Effects of heat stress on the expression levels of hsp70 mRNA in Acipenser baeri liver

圖7 熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘肝臟hsp90βmRNA相對(duì)表達(dá)量的影響Figure 7 Effects of heat stress on the expression levels of hsp90βmRNA in Acipenser baeri liver

3 討論與結(jié)論

水溫是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的環(huán)境因子之一，與魚(yú)類(lèi)的代謝相關(guān)，影響魚(yú)類(lèi)生理生化，當(dāng)水溫超過(guò)魚(yú)體耐受極限將導(dǎo)致魚(yú)體代謝紊亂，甚至發(fā)生死亡[24]。研究西伯利亞鱘幼魚(yú)的致死溫度有利于了解其耐高溫能力，為鱘魚(yú)的養(yǎng)殖提供參考數(shù)據(jù)。本研究采用急性應(yīng)激的方法，得到西伯利亞鱘幼魚(yú)從23℃的養(yǎng)殖水溫中直接升到31℃可引起死亡。李文龍等[24]在3種鱘科魚(yú)類(lèi)臨界水體溫試驗(yàn)中（7.6±0.3）g的小體鱘、史氏鱘和俄羅斯鱘的存活最高溫度分別為32℃、33℃和33℃，較本研究中西伯利亞鱘的致死溫度略高，這是由于李文龍等的研究是采取梯度升溫的方式，魚(yú)體已逐漸產(chǎn)生耐受性，所以耐受的溫度比急性升溫的耐受溫度要高。

魚(yú)類(lèi)的血清酶主要來(lái)自特定的組織器官，其活性的高低與相應(yīng)組織器官的代謝水平和健康程度有關(guān)，血清酶活的變化反映了組織器官功能的變化。ALT和AST是機(jī)體最重要的反映物質(zhì)轉(zhuǎn)化的代謝酶，由肝臟分泌表達(dá)，在魚(yú)體健康狀況下，釋放到血液中的含量較少。因此ALT和AST的酶活變化是反應(yīng)機(jī)體肝臟功能的重要指標(biāo)。管標(biāo)等[12]在虹鱒（Oncorhynchus mykiss）受到熱應(yīng)激后，血清ALT和AST活性均在恢復(fù)時(shí)有顯著升高，肝臟受到破壞作用。李佳凱等[25]的研究顯示大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）幼魚(yú)從25℃到32℃維持7 d的高溫脅迫后血清ALT和AST活力極顯著高于對(duì)照組。在本研究中，西伯利亞鱘幼魚(yú)在急性熱應(yīng)激下血清ALT和AST酶活力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，均在熱應(yīng)激后48 h達(dá)到峰值，顯著高于0時(shí)刻（P＜0.05），表明鱘魚(yú)受到熱應(yīng)激48 h內(nèi)肝臟功能受到影響，并在96 h逐步恢復(fù)。血清蛋白主要在肝臟合成，肝功能的損傷程度影響著蛋白的合成，血清總蛋白及白蛋白含量檢測(cè)可及時(shí)反映肝臟的蛋白合成能力。半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）在受到高溫脅迫后，血清白蛋白持續(xù)下降[26]。高溫和低溫急性脅迫均會(huì)使期許氏平鮋（Sebastes schlegelii）血清總蛋白和白蛋白水平著降低[27]。大黃魚(yú)在高溫脅迫7 d時(shí)，血清總蛋白含量同樣顯著低于對(duì)照組[25]。本研究中，急性熱應(yīng)激后，西伯利亞鱘幼魚(yú)的血清總蛋白含量總體維持穩(wěn)定，在脅迫24 h和48 h其含量略有降低，而白蛋白含量在脅迫3～96 h除24 h外均顯著低于0時(shí)刻（P＜0.05）。說(shuō)明高溫脅迫后，西伯利亞鱘幼魚(yú)的肝臟損傷不是特別嚴(yán)重，血清蛋白能基本維持穩(wěn)態(tài)，這與他人的研究結(jié)果不同，可能高溫脅迫對(duì)不同魚(yú)類(lèi)血清蛋白的影響各有不同。而白蛋白作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的載體，為機(jī)體提供能量，參與維持血漿滲透壓，急性熱應(yīng)激后，機(jī)體大量消耗白蛋白，以滿足機(jī)體較高的能量需求。

熱休克蛋白（HSP）是一類(lèi)保守的，參與生物體應(yīng)對(duì)多種應(yīng)激過(guò)程的蛋白質(zhì)，如應(yīng)對(duì)熱應(yīng)激、清除體內(nèi)氧自由基、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和加強(qiáng)免疫反應(yīng)[28]。HSP70和HSP90是這個(gè)家族中分別為70 kDa和90 kDa大小的蛋白質(zhì)家族[29]。本研究中，西伯利亞鱘幼魚(yú)肝臟的hsp70和hsp90β均在急性熱應(yīng)激后出現(xiàn)顯著性上調(diào)表達(dá)，表明肝臟存在一定的損傷，熱休克蛋白可能通過(guò)上調(diào)表達(dá)而發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用。這與Rendell J.L.等[30]研究發(fā)現(xiàn)hsp90在O.mykiss的肝臟組織中有顯著的上調(diào)表達(dá)，Wu C.X.等[31]在高溫應(yīng)激下得到草魚(yú)（Ctenopharyngodon idella）hsp90表達(dá)量上調(diào)最顯著的組織是肝臟，以及Wang Y.等[32]在鯉魚(yú)（Cyprinus carpio）肝臟中hsp70的顯著上調(diào)表達(dá)相一致。眾多研究表明HSP70可快速并顯著地上調(diào)表達(dá)以適應(yīng)多種環(huán)境應(yīng)激，被廣泛地作為一個(gè)生物標(biāo)志[33]。本研究也證實(shí)了西伯利亞鱘肝臟hsp70出現(xiàn)顯著上調(diào)反應(yīng)以應(yīng)對(duì)熱應(yīng)激，補(bǔ)充了田照輝等[15]的關(guān)于西伯利亞鱘受到急性熱應(yīng)激并維持僅3 h的研究，得到hsp70在熱脅迫后表達(dá)量達(dá)到峰值的時(shí)間是6 h。HSP90也是真核細(xì)胞中一類(lèi)可與超過(guò)400種蛋白結(jié)合的伴侶蛋白，在機(jī)體受到多種應(yīng)激條件下，如熱應(yīng)激或冷應(yīng)激，均能上調(diào)其表達(dá)[34]。櫛孔扇貝（Chlamys farreri）受到熱刺激后，hsp90mRNA表達(dá)量顯著上調(diào)[35]，泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）在高溫應(yīng)激下，hsp70、hsp90α和hsp90βmRNA表達(dá)量均迅速升高[36]。并且，Wu C.X.等對(duì)草魚(yú)的研究顯示熱應(yīng)激和冷應(yīng)激均會(huì)顯著上調(diào)多種組織HSP90基因的表達(dá)量[31]，這些均與本研究結(jié)果相一致。

綜上所述，本文對(duì)一種軟骨硬鱗魚(yú)類(lèi)-西伯利亞鱘幼魚(yú)肝臟組織在受到急性熱應(yīng)激下的血清肝功指標(biāo)及肝臟熱休克蛋白70和90的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果提示我們:西伯利亞鱘幼魚(yú)的肝臟功能在急性熱應(yīng)激下受到一定影響，但是在應(yīng)激96 h后均恢復(fù)到正常水平；肝臟中hsp70和hsp90β均上調(diào)表達(dá)，參與生理調(diào)節(jié)，以應(yīng)對(duì)高溫對(duì)肝臟細(xì)胞的損傷。