黎煒烘

(廣州科的信醫(yī)藥技術(shù)有限公司，廣州 510260)

富馬酸酮替芬(ketotifen fumarate)為口服強效過敏遞質(zhì)阻釋劑，為抗變態(tài)反應(yīng)類藥物，臨床用于變應(yīng)性鼻炎和過敏性支氣管哮喘的預(yù)防和治療。富馬酸酮替芬為高溶解高滲透性藥物，半衰期3～5 h，口服經(jīng)胃腸道可迅速完全吸收，生物利用度3%～4%，生物制劑學(xué)研究表明其適于被開發(fā)成緩釋制劑[1-2]。目前，國外只有富馬酸酮替芬緩釋片上市，沒有緩釋微丸制劑上市，國內(nèi)只有普通制劑批準(zhǔn)上市，暫時沒有緩釋制劑上市和注冊申報。開發(fā)緩釋微丸制劑可以滿足臨床用藥需求。緩釋微丸為多單元型給藥系統(tǒng)，較緩釋片具有局部刺激性小、體內(nèi)分布面積大、生物利用度高、受食物和胃排空影響小、不易出現(xiàn)突釋、易分劑量等優(yōu)點，臨床應(yīng)用優(yōu)于緩釋片，已逐漸成為目前緩控釋制劑的研究熱點之一[3]。筆者在市售緩釋片的基礎(chǔ)上，制備1天1次、24 h釋放的富馬酸酮替芬緩釋微丸制劑，并對其體外釋放度進(jìn)行評價，以期為富馬酸酮替芬緩釋制型的進(jìn)一步開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 MINI250型多功能擠出滾圓包衣機(深圳市信宜特科技有限公司)；G20多功能濕法混合制粒機(深圳市信宜特科技有限公司)；ZRS-8G型智能溶出實驗儀(天津海益達(dá)科技有限公司)；Waters2695高效液相色譜儀(沃特世公司)；T6紫外-可見分光光度儀(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；BSA124S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，感量：0.01 mg)。

1.2試藥 富馬酸酮替芬原料藥(浙江蘇泊爾制藥有限公司，批號：022-120604，含量：99.8%)，富馬酸酮替芬對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100230-200602，含量：100%)，Zaditen?L.P.緩釋片(Novartis Pharma S.P.A，規(guī)格：2 mg，批號：004，006，015)，微晶纖維素(臺灣明臺化工股份有限公司，批號：C1306070)，乳糖(Meggle Group，批號：L1315)，Aquacoat ECD(乙基纖維素水分散體，F(xiàn)MC Corporation，批號：J8617)，EudragitNE30D(丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物水分散體，Evonik Industries AG，批號：B140712095)；Surelease(乙基纖維素混懸液，上?？房蛋录夹g(shù)有限公司，批號：IN526253)，乙基纖維素(上?？房蛋录夹g(shù)有限公司，批號：KI10533T12)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1緩釋膠囊的制備 稱取處方量主藥和輔料，過篩孔內(nèi)徑150 μm(100目篩)混合均勻，加適量黏合劑溶液制成軟材，擠出滾圓機制得濕微丸，置烘箱中干燥，篩取篩孔內(nèi)徑590～710 μm(24～30目)含藥丸芯。按處方量配制緩釋包衣溶液，將含藥丸芯置流化床包衣機中，調(diào)節(jié)參數(shù)使丸芯處于最佳流化狀態(tài)，待丸芯預(yù)熱溫度達(dá)物料溫度高定值后，將包衣溶液用噴槍進(jìn)行包衣，包衣結(jié)束后取出緩釋微丸置烘箱中熟化24 h。將熟化后的緩釋微丸根據(jù)含量規(guī)格(每粒2 mg)，灌裝于2號空心膠囊。

2.2含量測定方法 取樣品20粒，精密稱定，計算平均裝量，取內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量(相當(dāng)于酮替芬1 mg)，置100 mL量瓶，加水適量，振搖使富馬酸酮替芬溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則 0401)，在301 nm波長處測定吸光度；另取富馬酸酮替芬對照品，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每毫升約含14 μg的溶液，同法測定，計算，并將結(jié)果乘以0.7272，即得[4]。

2.3釋放度測定及方法學(xué)驗證

2.3.2溶出介質(zhì)溶解度測定 分別用介質(zhì)1、介質(zhì)2、介質(zhì)3和介質(zhì)4配制成37 ℃富馬酸酮替芬過飽和溶液，測得其溶解度分別為46.88，27.39，24.30和20.25 mg·mL-1，均能滿足漏槽條件。

2.3.3檢測波長的選擇 分別取用上述4種介質(zhì)配制的對照品溶液、自研樣品溶液和市售緩釋片溶液，在190～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，均測得λmax為301 nm，所以選擇301 nm作為檢測波長。

2.3.4干擾實驗 分別取用上述4種介質(zhì)配制的空白輔料溶液和空心膠囊溶液，在301 nm波長處測定吸光度，結(jié)果顯示均無吸收，不干擾測定。分別取對照品溶液、自研樣品溶液和緩釋片溶液，用孔徑0.45 μm濾膜濾過5 mL后，取續(xù)濾液和原液在301 nm波長處測定吸光度，濾過前后吸光度無變化，濾膜不產(chǎn)生吸附干擾影響。

2.3.5線性關(guān)系考察 取對照品適量，分別用上述4種介質(zhì)，配制成1.0，2.5，5，7.5，10，12.5 μg·mL-1線性實驗溶液，在301 nm波長處測定吸光度。以濃度-吸光度進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程分別如下，介質(zhì)1C=23.64A+5.82(r=0.999 3)、介質(zhì)2C=24.66A+3.22(r=0.999 8)、介質(zhì)3C=24.50A+1.97(r=0.999 4)、介質(zhì)4C=25.75A+2.87(r=0.999 2)。

2.3.6重復(fù)性實驗 取用上述4種介質(zhì)配制5 μg·mL-1供試品溶液各6份，在301 nm波長處測定吸光度，計算得介質(zhì)1 RSD=0.84%(n=6)、介質(zhì)2 RSD=0.92%(n=6)、介質(zhì)3 RSD=1.03%(n=6)、介質(zhì)4 RSD=0.98%(n=6)。

2.3.7加樣回收率實驗 取已知含量的供試品5份，分別用上述4種介質(zhì)，配制供試品溶液，精密加入1 μg·mL-1對照品貯備液1 mL，在301 nm波長處測定吸光度，計算平均回收率：介質(zhì)1為99.3%(RSD=1.12%，n=5)、介質(zhì)2為98.9%(RSD=0.99%，n=5)、介質(zhì)3為100.5%(RSD=1.07%，n=5)、介質(zhì)4為99.6%(RSD=1.18%，n=5)。

2.3.8溶液穩(wěn)定性實驗 取“2.3.6”項供試品溶液，置37 ℃水浴中放置36 h，分別于0，2，4，6，8，10，12，24，36 h取樣，在301 nm波長處測定吸光度，計算得介質(zhì)1 RSD=1.53%(n=9)、介質(zhì)2 RSD=1.77%(n=9)、介質(zhì)3 RSD=1.36%(n=9)、介質(zhì)4 RSD=1.29%(n=9)。4種介質(zhì)9個時間點的RSD均<2.0%，表明供試品在36 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9非模型依賴相似因子計算方法及判斷 相似因子(f2)是衡量兩條溶出釋放曲線相似度的參數(shù)，計算公式如下。

其中n為取樣時間點個數(shù)，Rt為參比樣品在t時刻的溶出度值，Tt為自制樣品在t時刻的溶出度值。相似因子的具體測定步驟如下：①分別取自制樣品和參比樣品各12片(粒)，測定其溶出曲線；②取兩條曲線上各時間點的平均溶出度值，根據(jù)上述公式計算f2；③f2值越接近100，則認(rèn)為兩條曲線相似。一般情況下，f2值高于50，可認(rèn)為兩條曲線具有相似性，自制樣品與參比樣品具有等效性[6]。

2.4緩釋微丸包衣的影響因素考察

2.4.1包衣材料及包衣增重 分別考察AquacoatECD、EudragitNE30D、 Surelease和乙基纖維素4種緩釋包衣材料及包衣增重對釋放性能的效果，并與Zaditen?L.P.緩釋片進(jìn)行比較。參照《中華人民共和國藥典》2015年版富馬酸酮替芬膠囊溶出度項下的小杯法，以水200 mL為介質(zhì)，轉(zhuǎn)速75 r·min-1，分別測定試制樣品的釋放曲線，結(jié)果見圖1-4。結(jié)果表明，用Surelease包衣增重6%的釋放曲線最接近緩釋片。

圖1 AquacoatECD包衣增重對釋放度的影響

Fig.1EffectsofAquacoatECDcoatingweightonreleasingrate

圖2 EudragitNE30D包衣增重對釋放度的影響

Fig.2EffectsofEudragitNE30Dcoatingweightonreleasingrate

2.4.2致孔劑用量及包衣增重 以Surelease為包衣材料，添加3%和5%致孔劑，考察不同包衣增重對釋放性能的效果，并與Zaditen?L.P.緩釋片進(jìn)行對比。按“2.4.1”項溶出方法分別測定試制樣品釋放曲線，結(jié)果見圖5和圖6。結(jié)果表明，加入3%致孔劑包衣增重8%的釋放曲線與緩釋片比較的f2值達(dá)到83，加入5%致孔劑包衣增重10%的f2值為70，篩選出最佳包衣處方為Surelease+3%致孔劑包衣增重8%。

圖3 Surelease包衣增重對釋放度的影響

Fig.3EffectsofSureleasecoatingweightonreleasingrate

圖4 EC-10cps包衣增重對釋放度的影響

Fig.4EffectsofEC-10cpscoatingweightonreleasingrate

圖5Surelease+3%致孔劑包衣增重對釋放度的影響

Fig.5EffectsofSurelease+3%porogencoatingweightonreleasingrate

圖6Surelease+5%致孔劑包衣增重對釋放度的影響

Fig.6EffectsofSurelease+5%porogencoatingweightonreleasingrate

2.5體外釋放度及均一性實驗 取3批Zaditen?L.P.緩釋片和3批緩釋膠囊中試樣品，分別測定在pH值1.2鹽酸、pH值4.5磷酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸

鹽緩沖液和水中的釋放曲線，并將結(jié)果與市售緩釋片平均釋放度進(jìn)行f2值擬合，計算f2值和批內(nèi)批間RSD。結(jié)果，3批緩釋膠囊在4種介質(zhì)中的釋放曲線與緩釋片平均釋放曲線相似因子f2值均>50，兩者體外具有一致性[5-8]，緩釋膠囊批內(nèi)批間RSD值均小于市售緩釋片。實驗結(jié)果見表1～4。

3 討論

富馬酸酮替芬為非難溶性藥物，制劑規(guī)格較低，較適合采用擠出滾圓法制備含藥丸芯。微晶纖維素是一種成丸促進(jìn)劑，具有非常好的吸水性能和成丸性能，加入一定量乳糖可以使含藥丸芯表面更加完整和光滑，有利于后續(xù)包衣[9]。以一定濃度的粘合劑溶液作為潤濕劑制備軟材，可以提高丸芯硬度和收率，有利于包衣。Surelease是乙基纖維素水分散體，所含成分包括有乙基纖維素、中碳鏈甘油酯、油酸、濃氨溶液和水，固體含量為25%，使用時無需加入增塑劑，常作為片劑和小丸的疏水性緩釋包衣材料，應(yīng)用時可用水稀釋至8%～15%進(jìn)行包衣，通常加入致孔劑以調(diào)節(jié)膜的溶解性以此達(dá)到調(diào)節(jié)藥物的釋放[9]。

表1pH值1.2鹽酸溶液釋放度及均一性實驗結(jié)果

劑型與批號1 h累積釋放百分率RSD2 h累積釋放百分率RSD3 h累積釋放百分率RSD4 h累積釋放百分率RSDf2值緩釋片 00411.83±2.0517.3119.64±2.3712.0724.45±2.148.7532.16±1.976.1264 00613.45±0.886.5222.03±0.813.6929.30±1.083.6835.17±1.283.6491 01515.12±1.5410.1924.22±1.024.2131.06±1.635.2537.53±1.905.0673 平均13.47±1.349.9721.96±1.878.5228.27±2.809.8934.95±2.206.29緩釋膠囊 KF15100115.91±0.311.9225.28±0.250.9829.43±0.391.3436.42±0.381.0380 KF15100215.38±0.301.9524.65±0.411.6829.23±0.230.7735.63±0.260.7485 KF15100316.47±0.291.7826.21±0.331.2730.41±0.250.8137.29±0.140.3876 平均15.92±0.442.7725.38±0.642.5229.69±0.511.7336.45±0.681.86

表2pH值4.5磷酸鹽緩沖液釋放度及均一性實驗結(jié)果

劑型與批號1 h累積釋放百分率RSD2 h累積釋放百分率RSD3 h累積釋放百分率RSD4 h累積釋放百分率RSD6 h累積釋放百分率RSD緩釋片 00413.68±1.4410.5321.87±1.727.8428.44±2.007.0233.83±2.146.3143.24±2.816.50 00616.42±1.257.5826.40±1.947.3734.24±2.407.0140.93±2.897.0651.62±3.807.36 01517.47±1.227.0128.17±1.605.6935.83±2.326.4642.50±2.886.7853.00±3.857.26 平均15.86±1.9612.3325.48±3.2512.7532.84±3.8911.8439.09±4.6211.8249.29±5.2810.72緩釋膠囊 KF15100113.08±0.302.2723.47±0.451.9231.12±0.391.2635.35±0.150.4345.03±0.982.17 KF15100213.79±0.533.8423.32±0.662.8129.79±0.501.6834.80±0.371.0544.73±0.430.95 KF15100313.25±0.302.2923.07±0.451.9430.08±0.461.5435.08±0.411.1645.29±1.022.24 平均13.37±0.302.2523.29±0.160.7130.33 ±0.571.8935.07±0.230.6445.02±0.240.51

續(xù)表2pH值4.5磷酸鹽緩沖液釋放度及均一性實驗結(jié)果

劑型與批號8 h累積釋放百分率RSD10 h累積釋放百分率RSD12 h累積釋放百分率RSD16 h累積釋放百分率RSD24 h累積釋放百分率RSDf2值緩釋片 00451.45±3.246.3058.24±3.536.4064.58±3.735.4771.00±4.125.8089.03±6.437.2364 00660.62±4.617.6067.89±4.997.3674.38±5.307.1383.82±6.457.6993.38±3.253.4880 01562.17±4.547.2969.50±4.646.6775.67±4.035.3385.67±6.197.2294.17±2.642.8072 平均58.08±5.799.9865.21±6.099.3471.54±6.068.4780.16±7.999.9792.19±2.773.00緩釋膠囊 KF15100155.25±0.901.6361.03±0.821.3467.00±1.291.9379.09±1.101.3992.70±0.370.4085 KF15100255.04±0.581.0660.85±1.462.3967.86±0.811.1981.17±1.642.0292.61±1.601.7384 KF15100354.93±1.091.9961.07±0.651.0767.86±1.341.9880.16±1.051.3191.81±0.660.7285 平均55.07±0.130.240.99±0.100.1667.57±0.410.6080.14±0.851.0692.37±0.400.43

表3pH值6.8磷酸鹽緩沖液釋放度及均一性實驗結(jié)果

劑型與批號1 h累積釋放百分率RSD2 h累積釋放百分率RSD3 h累積釋放百分率RSD4 h累積釋放百分率RSD6 h累積釋放百分率RSD緩釋片 00413.46±1.279.4622.02±1.607.2528.76±1.635.6634.69±2.065.9443.83±2.495.68 00616.69±1.237.3427.22±1.876.8635.10±2.316.5941.78±2.816.7353.09±3.686.93 01518.17±1.337.3228.83±1.946.7336.17±2.486.8743.83±3.317.5554.67±2.945.39 平均16.11±2.4114.9426.03±3.5613.6833.34±4.0012.0140.10±4.8011.9650.53±5.8511.58緩釋膠囊 KF15100114.18±0.312.1824.03±0.532.2130.68±0.431.3937.21±0.381.0350.21±1.092.17 KF15100214.24±0.483.3924.19±0.532.1731.36±0.381.2337.38±0.962.5649.11±0.460.95 KF15100314.28±0.584.0824.18±0.672.7831.78±0.762.3937.06±0.591.5849.07±0.621.26 平均14.23±0.040.2724.13±0.080.3131.27±0.451.4437.22±0.130.3549.46±0.531.07劑型與批號8 h累積釋放百分率RSD10 h累積釋放百分率RSD12 h累積釋放百分率RSD16 h累積釋放百分率RSD24 h累積釋放百分率RSDf2值緩釋片 00451.15±3.336.5158.84±3.425.8164.57±4.066.2973.63±4.105.5786.51±4.044.6761 00661.96±4.397.0869.06±4.857.0274.62±4.726.3382.55±5.406.5590.97±4.354.7982 01563.67±4.276.7170.67±4.896.9176.50±4.235.5384.67±4.935.8293.00±2.532.7270 平均58.93±6.7911.5266.19±6.429.7071.90±6.418.9280.28±5.867.3090.16±3.323.68緩釋膠囊 KF15100158.64±0.621.0565.53±1.322.0171.91±1.431.9982.17±0.871.0592.17±0.690.7585 KF15100258.48±0.881.5065.51±0.761.1673.04±1.261.7382.54±1.191.4592.37±0.740.8084 KF15100358.51±0.811.3965.63±0.490.7573.67±0.710.9682.03±1.471.8092.17±0.900.9785 平均58.54±0.070.1265.56±0.050.0872.88±0.731.0082.25±0.210.2692.23±0.100.10

Zaditen?L.P.緩釋片是采用水不溶性蠟質(zhì)骨架材料制成的緩釋片，規(guī)格為2 mg，屬于小劑量制劑，其制備過程中物料的混合均勻度對釋藥行為影響比較大，且骨架片制備時局部的缺陷易引起整個片劑的突釋。而緩釋微丸的釋藥行為是由組成一個劑量的各單個微丸釋藥行為的總和，個別微丸在制備上的失誤或缺陷不致對整個制劑的釋藥行為產(chǎn)生較大影響，因此在釋藥規(guī)律的重現(xiàn)性、一致性方面優(yōu)于骨架型緩釋片。富馬酸酮替芬緩釋膠囊是緩釋微丸制劑，是在Zaditen?L.P.緩釋片基礎(chǔ)上的改良型新藥，是對緩釋片的劑型和處方工藝進(jìn)行優(yōu)化且具有明顯臨床優(yōu)勢的藥品。通過CMC以及體外多種介質(zhì)釋放曲線的研究，在保證與緩釋片體外釋放曲線一致(f2>50)的前提下，緩釋膠囊的批內(nèi)批間RSD值小于緩釋片，初步證明緩釋膠囊的處方工藝比原劑型更優(yōu)。臨床方面的優(yōu)勢需要進(jìn)行體內(nèi)釋放評價和大樣本臨床實驗來進(jìn)一步驗證。

表4水釋放度及均一性實驗結(jié)果

劑型與批號1 h累積釋放百分率RSD2 h累積釋放百分率RSD3 h累積釋放百分率RSD4 h累積釋放百分率RSD6 h累積釋放百分率RSD緩釋片 00411.00±1.109.9620.17±1.336.5927.33±1.635.9732.83±2.146.5143.00±2.375.50 00613.22±1.3510.2420.85±1.406.7329.73±1.735.8334.10±2.035.9543.48±2.646.07 01514.67±1.379.3222.67±1.215.3431.67±1.976.2135.67±2.075.7945.50±2.435.34 平均12.96±1.8514.2521.23±1.296.0929.58±2.177.3434.20±1.424.1543.99±1.333.02緩釋膠囊 KF15100111.47±0.292.5620.55±0.552.6628.21±0.341.2032.56±0.461.4142.29±0.370.87 KF15100212.15±0.362.9621.12±0.401.9028.45±0.582.0532.11±0.451.4142.43±0.461.10 KF15100311.58±0.443.7620.13±0.582.8927.96±0.622.2231.85±0.431.3542.21±0.852.01 平均11.73±0.302.5620.60±0.411.9928.20±0.200.7232.18±0.290.9142.31±0.090.21批號8 h累積釋放百分率RSD10 h累積釋放百分率RSD12 h累積釋放百分率RSD16 h累積釋放百分率RSD24 h累積釋放百分率RSDf2值緩釋片 00450.17±2.324.6259.17±3.666.1866.50±1.221.8474.17±2.403.2487.50±4.094.6783 00653.96±3.837.0962.79±2.564.0868.38±3.765.5075.64±5.677.4987.74±5.255.9892 01555.83±3.927.0264.67±2.163.3470.33±3.444.9078.17±5.156.5989.50±4.515.0381 平均53.32±2.895.4262.21±2.804.4968.40±1.922.8075.99±2.022.6688.25±1.091.24緩釋膠囊 KF15100152.00±1.001.9360.68±0.701.1566.25±0.931.4074.88±0.781.0490.79±0.630.6986 KF15100251.31±1.102.1560.15±1.151.9265.99±0.981.4875.25±0.440.5892.09±1.271.3883 KF15100351.25±0.741.4460.21±0.430.7166.40±0.570.8574.93±0.590.7691.04±0.360.6584 平均51.52±0.340.6660.34±0.240.4066.21±0.170.2675.02±0.160.2291.31±0.560.62