王 樂(lè) 賈宗平 趙文成 楊亞飛

(1.南京森林警察學(xué)院，南京 210023；2.甘肅政法學(xué)院，蘭州 737100；3.青海民族大學(xué)，西寧 810000；4.甘肅警察職業(yè)學(xué)院，蘭州 730046)

一、引言

咖啡因(Caffeine)，C8H10N4O2，1，3，7-三甲基黃嘌呤，屬生物堿性化合物。主要分布于茶葉、咖啡豆等植物的幼嫩組織部位，純品味苦，白色粉狀物質(zhì)?？Х纫蚣缺粡V泛用于藥物中，也常見(jiàn)于食品中，如紅牛等功能性飲料及茶葉、咖啡等飲品中都含有咖啡因成分?？Х纫蜃鳛榫窕钚晕镔|(zhì)在全世界范圍內(nèi)被廣泛使用，其作用于人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使機(jī)體產(chǎn)生興奮作用。咖啡因作為國(guó)家管制的精神藥品物質(zhì)，其管制力度遠(yuǎn)低于其他濫用藥物，具有安全范圍較大、不良反應(yīng)輕微的特性。適量攝入有益于運(yùn)動(dòng)和神經(jīng)功能，可緩解疲勞，醒腦提神。但若使用過(guò)量(>400mg)，則出現(xiàn)緊張、多尿、失眠、煩躁、血壓升高、呼吸加快、心率過(guò)快等癥狀。長(zhǎng)期或大量使用會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生以下危害：一是作用于人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)并造成不同程度的損害；二是可能會(huì)引發(fā)心臟病和高血壓等慢性疾?。蝗蔷哂谐砂a性，一旦停用可表現(xiàn)短期或數(shù)日頭痛或不適，渾身乏力疲憊，精神萎靡等各種戒斷癥狀，攝入中毒劑量可引起陣攣性驚厥，嚴(yán)重者可致死亡，長(zhǎng)期大量攝入則產(chǎn)生重度成癮性注楊洪國(guó).GC/MS法測(cè)定毛發(fā)中咖啡因及其代謝物[D].甘肅政法學(xué)院，2013.。

近些年，因咖啡因攝入過(guò)量而造成的急診搶救、死亡案例逐漸增多，國(guó)內(nèi)外也出現(xiàn)咖啡因中毒案件的報(bào)道。尤其是使用者在與乙醇混用后，產(chǎn)生后果更為嚴(yán)重的中毒癥狀。因此，咖啡因的中毒機(jī)理及檢測(cè)方法逐步成為國(guó)內(nèi)外的研究重點(diǎn)，尤其是咖啡因的檢測(cè)方法的研究在食品安全及法醫(yī)鑒定中均具有重要的意義。

生物堿的傳統(tǒng)檢測(cè)方法有碘量法、紙層析法、重量法等?？Х纫蜓芯孔钤绮捎玫臋z測(cè)方法是碘量滴定法，在待測(cè)液中加入定量標(biāo)定的碘液，利用氧化性和還原性，酸性條件下咖啡因與碘生成不溶性過(guò)碘化物用硫代酸鈉滴定剩余的碘后換算分析。傳統(tǒng)方法操作復(fù)雜、誤差大、準(zhǔn)確性較低。在儀器分析快速發(fā)展的背景下，以操作簡(jiǎn)便、精確度高、檢測(cè)限低等為目標(biāo)的儀器分析手段也逐步用于咖啡因的檢測(cè)研究，主要方法包括光譜法、色譜法、聯(lián)用技術(shù)及毛細(xì)管電泳技術(shù)等。

二、光譜法

光譜法是通過(guò)對(duì)物質(zhì)內(nèi)部量子化的能級(jí)因躍遷而產(chǎn)生的散射、輻射、發(fā)射及吸收的強(qiáng)度和波長(zhǎng)進(jìn)行分析的方法[注]吳性良，朱萬(wàn)森.儀器分析實(shí)驗(yàn)[M].復(fù)旦大學(xué)出版社，2008年。。根據(jù)咖啡因的物質(zhì)性質(zhì)，適用于其檢測(cè)的光譜法主要是紫外光譜法、紅外光譜法等。

(一)紫外光譜法

紫外光譜法應(yīng)用于生物堿的測(cè)定較早，其利用含有共軛雙鍵的化合物在紫外光區(qū)吸收紫外光后，易于被激發(fā)產(chǎn)生躍遷的特性，對(duì)物質(zhì)分子價(jià)電子從低能級(jí)向高能級(jí)躍遷的過(guò)程中在紫外光區(qū)形成不同特征性的特征峰而進(jìn)行物質(zhì)分析[注]曹文靜.茶鮮葉主要茶用物質(zhì)的初步研究[D].揚(yáng)州大學(xué)，2014年。。由于紫外光譜法具有因人員操作不同影響準(zhǔn)確度等弊端，其使用范圍有較大的局限性，用于檢測(cè)制劑中咖啡因含量的研究也相對(duì)較少。

孫延春等[注]孫延春，張英.紫外光譜法測(cè)定飲料中的咖啡因含量[J].化學(xué)研究，2011，22(01).將市售的咖啡因類飲料，先進(jìn)行超聲脫氣5min，后加入三氯甲烷，振蕩、離心，去上層有機(jī)層清液，進(jìn)行紫外可見(jiàn)光譜分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)此種方法在市售飲料中咖啡因的濃度范圍內(nèi)線性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于4%，回收率在94%-112%之間。丁明珍[注]丁明珍，于海燕，王丹.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定可樂(lè)飲料中咖啡因含量[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè))，2015，51(12).通過(guò)微型化及背景校正對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，用紫外光譜分析方法，首次在儀器分析樣品制備過(guò)程中使用大相比離心萃取方法，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定可靠，萃取率大大提高，本法檢測(cè)限為0.001mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.97%，回收率在96.6%-106.1%之間。李楠等[注]李楠，孫晶晶，楊靜，張俊穩(wěn).微波提取茶葉中咖啡因工藝的研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2007，(10).利用756MC分光光度計(jì)測(cè)定茶葉中咖啡因的含量，實(shí)驗(yàn)采用微波功率500W、溫度設(shè)定180℃，乙醇提取，提取率3.82%。2017年張薇[注]張薇.紫外分光光度法測(cè)定飲料制品中的咖啡因含量[J].山東化工，2017，46(14).采用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定飲料制品中咖啡因的含量，結(jié)果表明，在0-20mg/L范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為R2=0.99911，檢出限為0.13mg/L，回收率97%，實(shí)驗(yàn)證明，該法重復(fù)性好，靈敏度高，其準(zhǔn)確度、精密度均能滿足工業(yè)生產(chǎn)的分析要求。谷苗苗[注]谷苗苗，王尉嘉，王迪，周愛(ài)東.紫外分光光度法測(cè)定可樂(lè)中咖啡因含量樣品前處理方法探討[J].實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理，2015，32(06).對(duì)測(cè)定可樂(lè)中咖啡因含量樣品前處理的方法探討，采用紫外分光光度法，檢測(cè)結(jié)果為在200-400nm范圍內(nèi)掃描，得到咖啡因最大吸收波長(zhǎng)為276.1nm，咖啡因吸光度A-質(zhì)量濃度C標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=0.0456x+0.028，相關(guān)系數(shù)R=0.9999，表明咖啡因在1.0-40.0mg/L范圍內(nèi)咖啡因吸光度-濃度呈良好的線性關(guān)系，同時(shí)，對(duì)比了4種前處理方法的相對(duì)誤差：離心、靜置、干燥和靜置后離心，結(jié)果顯示，樣品前處理的最佳方式是離心分離，其可減少水滴散射帶來(lái)的誤差，快速達(dá)到靜置的效果并節(jié)約時(shí)間。武開(kāi)業(yè)[注]武開(kāi)業(yè).紫外分光光度法測(cè)定可樂(lè)中咖啡因的含量[J].科技視界，2014，(27).測(cè)定茶葉中咖啡因的方法，采用紫外分光光度法，茶葉經(jīng)前處理后，選取三氯甲烷為萃取液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為276.5nm，結(jié)果表明，0-30ug/mL的范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系呈現(xiàn)良好，線性回歸方程為Y=0.456X-0.0019，相關(guān)系數(shù)為0.9998，方法檢出限為5mg/100g，回收率為96.9%-99.8%，結(jié)論：紫外分光光度法測(cè)定茶葉中的咖啡因快速、準(zhǔn)確，能夠滿足茶葉中咖啡因含量檢測(cè)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。高玲等[注]高玲，胡克勤，高志華.分光光度法測(cè)定溴咖合劑中咖啡因含量[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，(04).測(cè)定溴咖合劑中咖啡因的含量，選用紫外分光光度計(jì)法，有機(jī)溶劑為氯仿，提取溴咖合劑中待測(cè)組分咖啡因，276.1nm為波長(zhǎng)最大吸收，實(shí)驗(yàn)結(jié)果，回收率為99.08%，RSD=0.86%，結(jié)果表明該方法結(jié)果可靠，簡(jiǎn)便易行，可在該制劑的質(zhì)量控制中應(yīng)用于基層醫(yī)院藥房。2011年孫愛(ài)霞[注]孫愛(ài)霞.可樂(lè)型飲料中咖啡因的測(cè)定[J].職業(yè)與康，2011，(16).測(cè)定可樂(lè)型飲料中咖啡因的含量，采用紫外分光光度法，實(shí)驗(yàn)中探索出最佳的測(cè)定條件為：20ml×4三氯甲烷萃取，萃取溫度以20-40℃為宜，采用5g無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾脫水，在276.5nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度值，紫外分光光度法的回收率為96.3%-105.9%，變異系數(shù)為3.2%，萃取溫度以20-40℃為宜，最大吸收峰在276.5nm處，實(shí)驗(yàn)表明，簡(jiǎn)單迅速，適合一般實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。林澤平[注]林澤平，吳煜波，張樂(lè)城，李粉玲.不同地域高度的鳳凰茶中咖啡因含量的測(cè)定[J].中國(guó)釀造，2012，(04).采用紫外分光光度法對(duì)不同地域高度的鳳凰茶中咖啡因含量的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)以測(cè)定不同地域高度、不同制作條件的鳳凰茶的咖啡因含量為目的，選用波長(zhǎng)條件為λ=276.5nm，測(cè)定結(jié)論得出，茶葉種植的高度的不同、制取茶葉的發(fā)酵時(shí)間和溫度的不同對(duì)茶葉中咖啡因的含量都具有一定的影響。2012年楊言言[注]楊言言，張鐵銘.紫外分光光度法測(cè)定安徽羅漢尖老茶中咖啡因含量[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，(03).測(cè)定安徽羅漢尖老茶中咖啡因含量，選用紫外分光光度法，測(cè)定波長(zhǎng)為272-274nm，以濃度對(duì)吸光度的回歸方程為A=0.048c+0.028，R=0.998，線性范圍為10-30ug/mL，平均回收率為97.7%，結(jié)果顯示，該法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，可用于茶樹(shù)老葉和粗老茶中咖啡因的含量測(cè)定。

(二)紅外光譜法

紅外光譜法通過(guò)對(duì)化合物的紅外光譜分析條件下進(jìn)行有機(jī)官能團(tuán)的鑒定，是經(jīng)典的有機(jī)結(jié)構(gòu)分析方法之一，其研究對(duì)象樣品可由化合物轉(zhuǎn)為復(fù)雜混合物[注]張雪娟.普洱茶中咖啡因含量的紅外光譜法快速判別[J].玉溪師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，(12).。紅外光譜法應(yīng)用于毒物與毒品的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)最早可以追溯于九十年代，具有無(wú)損檢驗(yàn)、樣品無(wú)須前處理、所需檢材量小、分析速度快、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)[注]王繼芬.紅外光譜法快速分析氯胺酮中的淀粉、葡萄糖和咖啡因.中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)、中國(guó)化學(xué)會(huì).第十六屆全國(guó)分子光譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C].中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)、中國(guó)化學(xué)會(huì):中國(guó)光學(xué)學(xué)會(huì)光譜專業(yè)委員會(huì)，2010，(2).，但其對(duì)于咖啡因物質(zhì)的檢測(cè)效果不佳等因素，被應(yīng)用于該領(lǐng)域的研究熱度不高。

2005年蘆永軍等[注]蘆永軍.茶多酚中咖啡因的近紅外光譜分析[J].光譜學(xué)與光譜分析，2005，(08).對(duì)茶多酚中咖啡因進(jìn)行光譜及定量分析，選用近紅外光譜分析技術(shù)，對(duì)樣品的漫反射原始吸光度光譜進(jìn)行導(dǎo)數(shù)、散射校正及相關(guān)分析，結(jié)果咖啡因在近紅外光譜波段的光譜特性清晰有效，建立了快速穩(wěn)健定標(biāo)模型的條件，該技術(shù)在近紅外波段中用于分析咖啡因中各主要基團(tuán)的吸收特性，結(jié)合定標(biāo)法定量，快速檢測(cè)咖啡因在茶多酚中的含量，定標(biāo)分析結(jié)果顯示線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)R=0. 993，標(biāo)準(zhǔn)差SEC=0.49%，結(jié)果表明，近紅外光譜分析技術(shù)可用于快速分析茶多酚中咖啡因含量，且方法可行性及優(yōu)越性較佳。2009年趙曉輝等[注]趙曉輝.茶葉及其組份的紅外光譜研究[J].光學(xué)學(xué)報(bào)，2009，(02).研究四種茶葉及其四種主要組分的光譜特征，在800-3800cm中紅外“指紋”區(qū)，采集決定茶葉品質(zhì)主要成份的咖啡因、谷氨酸和表兒茶素和花青素類物質(zhì)的中紅外光譜，以不同產(chǎn)地的碧螺春和鐵觀音為對(duì)比，以各特征光譜進(jìn)行主成分析建立模型擬合分析茶葉品種、產(chǎn)地差異與各主要成份含量的關(guān)系。2009年楊捷[注]楊捷，宋繼梅，方芳.紅外光譜法測(cè)定咖啡因的含量[J].安徽大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，(01).內(nèi)標(biāo)物選用鐵氰化鉀，稱取定量咖啡因?qū)φ掌罚謩e加入相同量的鐵氰化鉀和溴化鉀，充分研磨并混合均勻，配制成標(biāo)準(zhǔn)系列，選擇咖啡因中不受干擾的特征吸收峰羰基峰和鐵氰化鉀中的特征吸收峰氰基峰，測(cè)定吸收光譜，線性回歸分析咖啡因特征峰吸光度與鐵氰化鉀特征峰的吸光度的峰高之比與其對(duì)應(yīng)濃度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再以相同方法測(cè)定咖啡因待測(cè)樣品，標(biāo)準(zhǔn)曲線得待測(cè)咖啡因的濃度，線性范圍10-250mg/g，相關(guān)系數(shù)R=0.9953；采用該方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果與HPLC方法比較得到較滿意的結(jié)果，平均回收率為98.0%-100.5%，該方法準(zhǔn)確、可靠，可快速定量分析咖啡因及其他固體物質(zhì)。

三、色譜法

色譜法是利用各組分在性質(zhì)及結(jié)構(gòu)上的差異，以色譜體系中的固定相發(fā)生作用力的大小、強(qiáng)弱進(jìn)行區(qū)分，在同一力的推動(dòng)作用下，不同組分在固定相中的滯留時(shí)間長(zhǎng)短，以先后順序從固定相中流出，從而使各組分得到分離的分析方法[注]劉冬嫻，姚慧芳，徐遠(yuǎn)清.微量物證與毒物毒品分析[M].中國(guó)人民公安大學(xué)出版社，2013年。。用于咖啡因的檢測(cè)的色譜法主要分為液相色譜法和氣相色譜法。

(一)液相色譜法

液相色譜法運(yùn)用于咖啡因的檢測(cè)，國(guó)內(nèi)最早見(jiàn)于20世紀(jì)80年代。液相色譜法的流動(dòng)相為液體，具有檢測(cè)限低、分離效果佳、定量準(zhǔn)確性好、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。因此，液相色譜法檢測(cè)咖啡因的研究受到廣泛關(guān)注，并呈逐年上升趨勢(shì)，2006年左右達(dá)到研究高峰。目前，液相色譜法測(cè)定咖啡因的含量在國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較為廣泛，既是國(guó)際通用方法，同時(shí)也為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)釆用。同時(shí)，檢測(cè)目標(biāo)物也從藥物中的咖啡因檢測(cè)逐漸轉(zhuǎn)化為飲料或食品中的咖啡因檢測(cè)，可見(jiàn)，對(duì)咖啡因的認(rèn)識(shí)和關(guān)注得到了更為廣泛的重視。

1986年鄧浩博[注]鄧浩博.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方感冒寧片有效成分的含量[J].中成藥研究，1986，(08).利用反相高效液相色譜法分離測(cè)定了復(fù)方感冒寧片中的撲熱息痛和咖啡因含量，分析條件為色譜柱為YWG-C18；流動(dòng)相為甲醇∶0.05M磷酸液(40∶60，v/v，磷酸液先用40%NaOH調(diào)pH2.5)，流速為0.7ml/min，柱前壓78kg/cm2，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，內(nèi)標(biāo)物為乙酞苯胺，該法方法靈敏、快速、較準(zhǔn)確，適用于定性定量分析。1994年陳繼慈[注]陳繼慈.反相高效液相色譜法測(cè)定人血清中茶堿、咖啡因濃度[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1994，(03).用反相高效液相色諳法瀏定了人血清中茶堿、咖啡因濃度，色譜柱：Hyoprsll-ODS(200×2.1)，流動(dòng)相：醋酸-醋酸鈉緩沖(pH=4.5)，甲醇(70∶30v/v)，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，本文方法簡(jiǎn)便、快速。2002年沈其元[注]沈其元.高效液相色譜法測(cè)定飲料中的咖啡因[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2002，(05).測(cè)定飲料中的咖啡因，選用高效液相色譜法，色譜柱C18，流動(dòng)相為甲醇/0.02mol/L醋酸銨(pH4.5)25∶75，柱溫，室溫，量程0.01 AUFS，外標(biāo)法定量，咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(0.0-150.0μg/ml)—峰面積經(jīng)線性回歸分析得直線回歸方程式y(tǒng)=88530+17468xr=0.9980，經(jīng)改變?nèi)軇┖?，咖啡因在流?dòng)相中的出峰時(shí)間保持一致，咖啡因在溶劑甲醇中的保留時(shí)間為3.42 min，在氯仿中保留時(shí)間為3.26 min。黃靜[注]黃靜，余佳文，王琳，岳廷哲.高效液相色譜法測(cè)定太極通天口服液中咖啡因含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2002，(03).用HPLC法測(cè)定太極通天口服液中咖啡因含量，采用C18柱，以甲醇-乙腈-水(25∶5∶70)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，咖啡因濃度在0.107-0.968μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，R=0.9998，回收率為99.54%，結(jié)果表明HPLC法可以用來(lái)測(cè)定太極通天口服液中咖啡因含量。2013年凌愛(ài)霞[注]凌愛(ài)霞，李淑玲.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚含量[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，(04).測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中咖啡因和對(duì)乙酰氨基酚的含量，采用高效液相色譜法C18色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)273nm，水-甲醇(60∶40)為流動(dòng)相，流速1.0ml/min，進(jìn)樣量20μl，柱溫為室溫，結(jié)果，待測(cè)物質(zhì)分離效果較好，咖啡因在0.0151-0.0755mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9996)，平均加樣回收率99.7%，RSD=0.65%；對(duì)乙酰氨基酚在0.2499-1.2495mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R=0.9995)，平均加樣回收率99.7%，RSD=1.6%，經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，為測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中對(duì)乙酰氨基酚與咖啡因含量的較好方法，可作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。禤學(xué)怡[注]禤學(xué)怡.pH/溶劑雙梯度反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氨酚曲麻片中5種有效成分[J].色譜，2013，(02).建立pH/溶劑雙梯度反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定氨酚曲麻片中咖啡因等5種有效成分，通過(guò)對(duì)溶劑梯度和pH/溶劑雙梯度體系的優(yōu)化，最佳分離5種成分，C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇、0.05mol/L醋酸銨水溶液和0.08mol/L醋酸水溶液組成三元流動(dòng)相體系，pH/溶劑雙梯度洗脫，流速1.0mL/min，柱溫為30℃，分段變波長(zhǎng)檢測(cè)，25.5min內(nèi)5種成分達(dá)到基線分離，咖啡因的線性范圍分別0.007-0.129g/L，相關(guān)系數(shù)R>0.9990，檢出限為0.02mg/L，回收率為97.9%-102.8%，該方法實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)同時(shí)分離酸性、中性和堿性化合物，提高柱效，減少半峰寬和拖尾，可應(yīng)用于氨酚曲麻片中5種成分的含量分析。2014年李蔚[注]李蔚，李鳳華，趙秀香.高效液相色譜法測(cè)定飲品中的咖啡因[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，(19).不同飲品中的咖啡因含量檢測(cè)，使用高效液相色譜法，用水提取可樂(lè)型飲料、含乳及不含乳的咖啡及茶葉液體制品、咖啡、茶葉及其固體制品等樣品，經(jīng)不同前處理凈化，以Sym-metryShieldC18反相色譜柱(3.9mm×150 mm×5μm) 分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量分析，咖啡因在220ng/ml-439μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(R=0.9998)，檢出限0.7ng(S/N=3)，平均回收率為90.2%-107% ，RSD=0.37%-3.8%(n=6)，方法靈敏度高、準(zhǔn)確性好、重現(xiàn)性佳，科學(xué)性、操作性好，可用于測(cè)定不同飲品中咖啡因的含量。武開(kāi)業(yè)[注]武開(kāi)業(yè).反相高效液相色譜法測(cè)定茶葉中咖啡因的含量[J].化學(xué)工程與裝備，2010，(05).測(cè)定可樂(lè)中咖啡因，以反相高效液相色譜法(HPLC)法，樣品經(jīng)前處理后，用DiomonsilC185u色譜柱分離，流動(dòng)相為甲醇和水混合液，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)286 nm，10-150ug/mL范圍內(nèi)咖啡因的線性關(guān)系良好，回收率為96.8%-101.8%，該方法對(duì)測(cè)定可樂(lè)飲料中的咖啡因有效，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、快速，具備食品安全檢測(cè)要求。張明月[注]張明月，夏義平.茶飲料中咖啡因檢測(cè)存在問(wèn)題的探討和研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2014，(11).測(cè)定茶飲料中咖啡因含量的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，用高效液相色譜法，Waters600E-2996高效液相色譜儀，Hypersil250 mm×4.6 mm×5μmODS柱，PDA檢測(cè)器，外標(biāo)法定量，流動(dòng)相為甲醇∶乙酸鈉(15∶85)，流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)272nm，以水作為溶劑與以甲醇作為溶劑同時(shí)溶解咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液，相同濃度下峰面積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)=1479.576，以水溶解的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法測(cè)定茶飲料中的咖啡因含量結(jié)果準(zhǔn)確；GB/T5009.139-2003中以甲醇溶解的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法測(cè)定茶飲料中的咖啡因含量結(jié)果偏高，與水溶解的咖啡因標(biāo)準(zhǔn)相比較，其絕對(duì)差值為算術(shù)平均值的8.51%，不符合GB/T5009.139-2003中的精密度5%的要求，結(jié)論建議統(tǒng)一國(guó)標(biāo)中咖啡因含量的計(jì)量單位，同時(shí)，GB/T5009.139-2003增加相關(guān)的咖啡因鑒別實(shí)驗(yàn)。蔡榮華[注]蔡榮華.UPLC法測(cè)定咖啡豆中綠原酸和咖啡因的含量[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2015，(18).建立同時(shí)測(cè)定綠咖啡豆提取物中綠原酸和咖啡因含量的方法，利用超高效液相色譜-紫外法，C18色譜柱，波長(zhǎng)274nm，流動(dòng)相為0.6%乙酸水-乙腈(90/10，v/v)，流速0.5mL/min，結(jié)果表明，6.06-101mg/L濃度范圍內(nèi)綠原酸線性關(guān)系良好(R=0.9998)，檢出限0.30mg/L；8.58-143mg/L濃度范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系良好(R=0.9999)，檢出限0.04mg/L，回收率99%-101% ，方法靈敏、有效、準(zhǔn)確、穩(wěn)定。陳健[注]陳健.枸櫞酸咖啡因與氨茶堿治療早產(chǎn)兒呼吸暫停療效對(duì)比分析[J].吉林醫(yī)學(xué)，2015，(12).測(cè)定復(fù)方氨酚烷胺片中種組分對(duì)乙酞氨基酚、鹽酸金剛烷胺、咖啡因和馬酸氯苯那敏含量，色譜柱為C18，柱溫為30℃，流動(dòng)相為甲醇(0.01mol/L)-乙酸銨溶液(13∶87，pH=3.0)，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量20μl，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，5.1-102.0μg/ml線性范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系良好，該方法方便、高效，準(zhǔn)確度、靈敏度、穩(wěn)定性、回收率值均符合分析測(cè)定要求。2015年張媛媛[注]張媛媛.超高效液相色譜法測(cè)定去痛片中4種成分的含量[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，(19).檢測(cè)去痛片中氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥，采用UPLC分析方法，流動(dòng)相超聲提取樣品，Waters ACQUITY UPLC BEHC18色譜柱(2.1mm×100mm，1.7μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm，柱溫為30 ℃，流動(dòng)相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇( 55∶45，V/V)，流速0.2ml/min，進(jìn)樣量5μl，外標(biāo)法定量，在0.6μg/ml-210μg/ml線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R=0.9992-0.9995，檢出限為0.0126ng-0.0357ng，平均回收率97.0%-100.3%，RSD=1.15%-1.55%，方法適用于去痛片中4種成分的含量測(cè)定且快速、分離效果好、靈敏度高，準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性好，日常檢測(cè)中可縮短檢測(cè)周期，降低檢測(cè)成本。于玲[注]于玲.超聲輔助分散液相微萃取-高效液相色譜法測(cè)定蜂蜜中的咖啡因[J].理化檢驗(yàn)，2015，(07).高效液相色譜法測(cè)定蜂蜜中的咖啡因，結(jié)合超聲輔助分散液相微萃取技術(shù)，以水為溶劑配制成100g/L樣品溶液，取7.5mL加入甲醇1.5mL和三氯甲烷120μL混勻，超聲5min，離心，吸取沉積相5μL，WondsilTMC18色譜柱分離，流動(dòng)相為甲醇，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)274nm，結(jié)果顯示，線性范圍10.0-500μg/L的咖啡因檢出限為9μg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%-4.1%，回收率96.6%-104%。黃現(xiàn)青[注]黃現(xiàn)青.高效液相色譜法測(cè)定茶飲料中的咖啡因[J].飲料工業(yè)，2015，(01).以高效液相色譜法測(cè)定茶飲料中的咖啡因，研究最佳波長(zhǎng)、流動(dòng)相、柱溫、流速等條件，結(jié)果最佳檢測(cè)條件為：柱溫20℃，波長(zhǎng)273nm，流動(dòng)相乙腈∶水(20∶80)，流速1mL/min，0-200μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為 99.69%，建立的方法可用于測(cè)定茶飲料中的咖啡因含量。2016李聰[注]李聰，邱啟東.高效液相色譜法測(cè)定火鍋湯底中的咖啡因[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2016，(12).測(cè)定火鍋湯底中咖啡因含量，采用高效液相色譜法，樣品在堿性條件下經(jīng)三氯甲烷提取，采用PhenomenexC18色譜柱，柱溫為40℃，流動(dòng)相為甲醇∶水∶乙酸(10∶89∶1)，流速為1.0 mL/min，采二極管陣列檢測(cè)器，286nm波長(zhǎng)，外標(biāo)法定量，結(jié)果在1-100 mg/kg濃度范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系良好，R=0.9990，檢出限為2.00×10-3mg/kg，該方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，能夠測(cè)定火鍋湯底中的咖啡因。王麗瓊[注]王麗瓊，趙雪，劉明容，魏長(zhǎng)勇，吳曉燕.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方酚咖偽麻膠囊5種組分的含量[J].藥物分析雜志，2016，(08).RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方酚咖偽麻膠囊中5種組分含量，XTerraRRP18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm，流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為0.02moL/L磷酸二氫鉀溶液-三乙胺(100∶0.02)，流速1.0mL/min，結(jié)果表明，復(fù)方酚咖偽麻膠囊中咖啡因的線性范圍12.62-126.20μg/mL(R=0.9999)，平均回收率(n=9)100.3%，檢測(cè)限0.03μg/mL，RSD(n=7)0.5%，方法重復(fù)性好，可用于評(píng)價(jià)復(fù)方酚咖偽麻膠囊的質(zhì)量。2016年劉圓圓[注]劉圓圓.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸異丙嗪咖啡因片含量及溶出度[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2016，(02).高效液相色譜法測(cè)定鹽酸異丙嗪咖啡因片的含量及溶出度，色譜柱為Agilent TCC18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為250和272nm，流動(dòng)相為甲醇-三乙胺水溶液(濃度為3‰，磷酸調(diào)至pH2.3)=(50∶50)，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣量20μl(溶出度測(cè)定時(shí)進(jìn)樣量為10μl)，溫度37℃，分別以900mlpH1.2鹽酸、pH4.5醋酸緩沖液、pH6.8磷酸緩沖液及水為溶出介質(zhì)，溶出條件的篩選為50、75 r/min，4.0-400μg/ml范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系良好Y=51.33X+68.88(R=0.9999)，咖啡因檢測(cè)限為2ng/ml，定量限為10ng/ml，平均回收率99.42%±1.07，供試溶液在12h保持穩(wěn)定，溶出介質(zhì)為鹽酸(900ml，pH=1.2)，槳法轉(zhuǎn)速為50r/min，溶出時(shí)間30min，15min內(nèi)制劑在4種溶出介質(zhì)中溶出度均達(dá)85%以上，溶出不受pH影響，條件適用于鹽酸異丙嗪咖啡因片的溶出測(cè)定，所建方法快速簡(jiǎn)便、靈敏有效、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于同時(shí)對(duì)鹽酸異丙嗪及咖啡因進(jìn)行含量及溶出度分析。2017年李國(guó)定[注]李國(guó)定，陳舒香，譚景遙.高效液相色譜法測(cè)定保健食品和SD大鼠血清中咖啡因的濃度[J].現(xiàn)代食品，2017，(02).高效液相色譜法測(cè)定咖啡因，安捷倫ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱，柱溫 30℃，流動(dòng)相乙腈和0.05mol/L 磷酸二氫鉀(23∶77)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，進(jìn)樣量50μL，0-99.898μg/mL的濃度范圍內(nèi)咖啡因線性關(guān)系良好，最低檢出限0.1μg/mL，回收率為(100.5±0.5)%，本方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，可作為保健食品及血清中咖啡因的測(cè)定。2018年王麗瓊[注]王麗瓊.反相高效液相色譜法測(cè)定酚氨咖敏片的含量及其均勻度[J].中國(guó)藥業(yè)，2018，(04).考察咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量均勻度，建立HPLC法同時(shí)測(cè)定酚氨咖敏片4種組分含量，色譜柱采用XTerraRP18柱( 250 mm×4.6 mm，5μm) ，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm，甲醇為流動(dòng)相A，0.02 mol /L磷酸二氫鉀溶液-三乙胺(100∶0.02)為流動(dòng)相B，梯度洗脫，流速為1.0m L/min，結(jié)果表明，酚氨咖敏片中氨基比林、對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏的分離度均符合要求，咖啡因的質(zhì)量濃度線性范圍為29.98-299.80μg/mL(R=0.9998)，平均加樣回收率為99.38%，RSD為1.27%(n=6)，該方法準(zhǔn)確，快速簡(jiǎn)便，利于樣品質(zhì)量控制用于酚氨咖敏片的含量及其均勻度測(cè)定。李澤夏瓊[注]李澤夏瓊，石春梅.UPLC-MS法測(cè)定減肥茶中的咖啡因[J].食品安全導(dǎo)刊，2018，(21).采用高效液相色譜法，以4種常見(jiàn)茶葉以及減肥茶中咖啡因的含量對(duì)比，建立測(cè)定方法，提供減肥茶中咖啡因是否非法添加以及限值規(guī)定的依據(jù)，二極管陣列檢測(cè)器，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm，流動(dòng)相為甲醇-水(1ml/min)，0.2058-4.116μg范圍內(nèi)咖啡因與峰面積呈良好線性關(guān)系(R=0.9999)，平均回收率100.5%，RSD=0.78%(n=9)，方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，快速簡(jiǎn)捷，可用于測(cè)定茶葉中咖啡因的含量，有效監(jiān)控減肥茶中咖啡因的含量。

(二)氣相色譜法

氣相色分析法是流動(dòng)相為氣體的色譜分析方法，其具有高靈敏性和選擇性、取樣量少、分析快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，但其對(duì)樣本進(jìn)樣的條件較為嚴(yán)格，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期發(fā)展氣相色譜逐步成為毒品及微量檢測(cè)重要方法之一。

2002年許慶琴[注]許慶琴.氣相色譜法直接測(cè)定茶葉中的咖啡因和茶堿[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2002，(06).采用氣相色譜法測(cè)定茶葉中的咖啡因和茶堿，超聲提取，大口徑毛細(xì)管，實(shí)驗(yàn)考察HP-1，HP-5，HP-1701，HP-20M等不同極性的大口徑毛細(xì)管對(duì)咖啡因的檢測(cè)效果，結(jié)果表明，咖啡因和茶堿在極性和中極性大口徑毛細(xì)管柱上的響應(yīng)值不高，峰形拖尾，而在非極性的固定相上，不僅響應(yīng)值高且出峰速度快，最終檢測(cè)出的咖啡因的檢出限2.00 mg/L，平均回收率96.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.0%。2004年陳春曉[注]陳春曉，仲岳桐，康莉，張紅宇.飲料中咖啡因的氣相色譜快速測(cè)定法[J].職業(yè)與健康，2004，(06).氣相色譜法測(cè)定飲料中的咖啡因，結(jié)果顯示，濃度范圍0-1000μg/ml咖啡因呈線性關(guān)系，R=0.9998，最低檢出限1mg/kg(以2倍噪聲計(jì))，經(jīng)檢測(cè)，含有咖啡因的飲料樣品中多數(shù)含量為0.10g/kg-0.25g/kg，以可樂(lè)型飲料及功能型飲料為主，且飲料中的其他成分對(duì)本實(shí)驗(yàn)均無(wú)干擾，同一產(chǎn)品的咖啡因含量監(jiān)測(cè)多年的結(jié)果基本穩(wěn)定，但不同產(chǎn)地的同一品牌飲料檢測(cè)結(jié)果有較明顯的差異。2007年姚如心[注]姚如心.大口徑毛細(xì)管氣相色譜法直接測(cè)定復(fù)方阿司匹林制劑[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007，(03).同時(shí)測(cè)定復(fù)方阿司匹林制劑中阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因及降解產(chǎn)物水楊酸，采用大口徑毛細(xì)管氣相色譜法，分別考察了不同極性的填充柱、石英毛細(xì)管柱和530μm大口徑毛細(xì)管對(duì)阿司匹林、對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因和水楊酸的色譜效度，結(jié)果表明，大口徑毛細(xì)管柱均好于填充柱和毛細(xì)管柱，且分析時(shí)間僅為同等長(zhǎng)度填充柱的五分之一，柱長(zhǎng)較短的非極性大口徑毛細(xì)管柱不僅靈敏度高，而且出峰速度快、分離效果好。趙志強(qiáng)[注]趙志強(qiáng).血液中對(duì)乙酰氨基酚復(fù)方制劑的氣相色譜測(cè)定法[J].職業(yè)與健康，2008，(11).用氣相色譜法建立對(duì)乙酰氨基酚中毒患者血液中復(fù)方制劑成分定性、定量分析，9790型氣相色譜儀，SE-54毛細(xì)管柱，氫火焰檢測(cè)器測(cè)定，X-5富集柱萃取，內(nèi)標(biāo)為苯巴比妥，結(jié)果表明，在0.03-0.24mg/ml的范圍內(nèi)咖啡因，平均回收率咖啡因92.48%(n=6)，RSD=1.36%，該方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，可快速準(zhǔn)確地為臨床提供診斷依據(jù)。2009年郭琦[注]郭琦.毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定酚氨咖敏顆粒中的4個(gè)組分含量[J].藥物分析雜志，2009，(12).同時(shí)測(cè)定酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、咖啡因和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量，毛細(xì)管氣相色譜法，SE-30大口徑毛細(xì)管色譜柱(30m×0.53mm，1.0μm)，F(xiàn)ID檢測(cè)器，溶劑為無(wú)水乙醇，直接進(jìn)樣，內(nèi)標(biāo)為鹽酸麻黃堿，結(jié)果表明，10-500μg/mL的線性范圍內(nèi)咖啡因平均回收率為98.9%-101.2%，RSD<2%，結(jié)果表明，此法精密度及準(zhǔn)確度良好，快速簡(jiǎn)便、有效準(zhǔn)確，可用于測(cè)定酚氨咖敏顆粒中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林和馬來(lái)酸氯苯那敏的含量。

四、聯(lián)用技術(shù)

聯(lián)用技術(shù)分析方法具有分離分析效能高、速度快及靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、成本相對(duì)低等特點(diǎn)，使其在很多領(lǐng)域得以應(yīng)用和推廣[注]林炳承.毛細(xì)管電泳導(dǎo)論[M].科學(xué)出版社，1996年。。聯(lián)用技術(shù)分析方法運(yùn)用于茶葉、藥物中咖啡因的檢測(cè)，具有較好的效果，能夠快速、準(zhǔn)確的測(cè)定咖啡因的含量。

丁明珍[注]丁明珍.飲料中咖啡因的紫外光譜和氣質(zhì)聯(lián)用分析方法研究[D].浙江大學(xué)，2008年。建立自發(fā)溶劑微萃取的樣品與氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析飲料中咖啡因含量的分析方法，使用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，樣品經(jīng)自發(fā)混合萃取后取下層萃取液進(jìn)樣分析，咖啡因的線性范圍0.001-20mg/L，R=0.9999，RSD<2%，檢測(cè)限0.0001mg/L，回收率為99.0%-104.8%，該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，樣品機(jī)溶劑消耗少，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)，可用于批量測(cè)定咖啡因在飲料中的含量。Kelly等[注]A.R.Kelly，N.H.William，M.P.Raimund，A.G.Carlos，L.K.Kent，D.N.Sidney，J.Chromatogr.B708(1998).在低于毫微摩爾的含量級(jí)別上的咖啡因體外代謝物，以穩(wěn)定的同位素稀釋氣質(zhì)聯(lián)用分析法進(jìn)行測(cè)定，該方法的定量檢測(cè)限低于毫微摩爾。Hawthorne[注]S.B.Hawthorne，D.J.Miller，J.Chromatogr.603(1992).等用固相為萃取氣質(zhì)聯(lián)用法分析可樂(lè)型飲料中的咖啡因的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)研究出無(wú)溶劑消耗的分析方法。王麗艷[注]王麗艷.氣質(zhì)聯(lián)用儀在槐花等分析中的應(yīng)用[D].遼寧師范大學(xué)，2008年。利用GC/MS聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)茶飲料中咖啡因，外標(biāo)法定量，選擇離子掃描選取m/z為 67、82、109、194 四種離子，結(jié)果表明，定性結(jié)果準(zhǔn)確，定量方法可行，回收率、精密度均在限定范圍內(nèi)。Tsuda[注]T.Tsuda，M.Bonerz，T.Schmidt，J.Chromatogr.A938(2001).等運(yùn)用氣質(zhì)聯(lián)用方法檢測(cè)人體汗液中的咖啡因，方法以采集人體拇指上的汗液為樣本進(jìn)行分析，乙醇為萃取液，經(jīng)過(guò)處理制得樣品進(jìn)行分析。Nishitani[注]E.Nishitani，Y.M.Sagesaka，J.Food Compos.Anal.17(2004).等運(yùn)用新的分析方法在40min內(nèi)對(duì)茶中的八種兒茶酚、咖啡因以及八種其他的酚類化合物進(jìn)行了連續(xù)的分析。柴龍龍[注]柴龍龍.基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的新復(fù)方大青葉片藥代動(dòng)力學(xué)研究[D].山東大學(xué)，2016年。建立大鼠血漿中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、異戊巴比妥的LC-MS/MS檢測(cè)方法，并應(yīng)用于新復(fù)方大青葉片在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究，其中咖啡因的線性范圍0.01-10μg/mL，檢測(cè)限為0.01μg/mL，精密度和準(zhǔn)確度在15%以內(nèi)。Casal[注]S.Casal，M.Beatriz Oliveria，M.A.Ferreira，F(xiàn)ood chem.68(2000).等以反相一光電二極管陣列檢測(cè)的方法連續(xù)分析咖啡中的茶堿、尼克酸以及咖啡因，分析結(jié)果中分離效果較好。

五、電泳法

毛細(xì)管電泳技術(shù)發(fā)展于20世紀(jì)80年代后期，于20世紀(jì)90年代成為最重要的現(xiàn)代分離分析方法之一，其是利用毛細(xì)管為分離通道，驅(qū)動(dòng)力是高壓直流電場(chǎng)的液相分離技術(shù)，具有分離效率高、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，已被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、分子生物學(xué)、材料學(xué)及食品、環(huán)保、化工等各個(gè)領(lǐng)域[注]曹琦.毛細(xì)管電泳法測(cè)定飲料中食品添加劑[D].復(fù)旦大學(xué)，2013年。。

衷明華[注]衷明華，嚴(yán)贊開(kāi)，林燕如.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定茶葉中咖啡因、茶氨酸、表兒茶素和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯[J].食品科學(xué)，2012，33(24).測(cè)定茶葉中咖啡因含量的分析方法，選用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，電壓25kV，柱溫25℃，電泳介質(zhì)為含有20mmol/L硼砂和磷酸鹽(pH=9.5)，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，結(jié)果表明，8min內(nèi)可將待測(cè)組分分離，質(zhì)量濃度與峰面積線性關(guān)系良好，R=0.9944-0.9995，檢測(cè)限0.001-0.01μg/mL，回收率89.98%-102.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差<9.11%，方法用于茶葉中咖啡因的檢測(cè)具有滿意的結(jié)果。韓雙艷等[注]韓雙艷，崔堂兵，林小瓊，吳虹.毛細(xì)管電泳在食品添加劑檢測(cè)中的應(yīng)用[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，(8).用硼酸鹽緩沖體系來(lái)分離測(cè)定汽水中咖啡因、苯甲酸、山梨酸、糖精，結(jié)果可在12min內(nèi)使各組分發(fā)生分離。孫保國(guó)[注]孫保國(guó)，侯鵬亮，林雁飛，張平.膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳同時(shí)測(cè)定飲料中的多種添加劑[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，1999，(02).建立了膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法(MECC)檢測(cè)飲料中山梨酸、苯甲酸、10-羥基癸烯酸、咖啡因和糖精鈉五種添加劑，對(duì)電壓、緩沖溶液濃度和pH值、膠束濃度與分析結(jié)果的影響進(jìn)行研究，結(jié)果表明，遷移時(shí)間和測(cè)定回收率的變異系數(shù)分別小于1.5%和5% ，檢測(cè)限分別為10，10，5，10，20μg/kg。徐芳[注]徐芳，陳波，姚守拙.膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法分離6種生物堿基[J].藥物分析雜志，2008，(05).采用膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳法對(duì)咖啡因等6種生物堿進(jìn)行檢測(cè)，在35mmol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)-10mmol/L硼砂(pH9.0)運(yùn)行緩沖液中進(jìn)行電泳分離，20℃，18kv電壓，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，6種堿基8min內(nèi)實(shí)現(xiàn)基線分離，10-500mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R=0.9995-0.9999，檢出限12.5-100ug/L，回收率為96.1%-105.2%，方法靈敏度高，快速簡(jiǎn)便，可用于分析和測(cè)定藥物和飲料中的生物堿。

六、研究展望

咖啡因的檢測(cè)方法各有優(yōu)劣，從早期采用傳統(tǒng)檢測(cè)碘量法、紙層析法、重量法等檢測(cè)方法到光譜分析法再發(fā)展到現(xiàn)代的色譜法及聯(lián)用技術(shù)的測(cè)定，技術(shù)層面上分析方法的結(jié)果準(zhǔn)確性得到了很大的提高，靈敏度也有大幅度的提升。但同時(shí)，現(xiàn)代分析方法具有前期處理?xiàng)l件較為嚴(yán)格，分析過(guò)程復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)及分析費(fèi)用相對(duì)較高等特點(diǎn)。因此，在分析方法發(fā)展迅速的背景下，在原有檢測(cè)方法基礎(chǔ)上，綜合各方法的優(yōu)勢(shì)并加以利用，發(fā)展一種高速、有效、操作簡(jiǎn)單且便于檢測(cè)及監(jiān)管的分析方法，是咖啡因檢測(cè)方法的發(fā)展重點(diǎn)。