大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院/云南省昆蟲生物醫(yī)藥研發(fā)重點實驗室，云南 大理 671000

傣藥黑螞蟻屬昆蟲綱膜翅目蟻科昆蟲雙齒多刺蟻(PolyrhachisdivesSmith)，又稱擬黑多刺蟻、鼎突多刺蟻，主要產(chǎn)自云南、廣西、廣東等省，在我國為食藥兩用昆蟲?！侗静菥V目》記載螞蟻為“玄駒”，并有“獨腳蟻治療腫疽毒，搗涂之”。傣藥稱之為“摸郎”，有扶正固本、補腎壯陽、祛瘀通絡(luò)之功效[1]。因富含氨基酸，鋅、鈣、鎂、鐵、錳等多種微量元素，D、B2、B12、C、E等多種維生素，及大量的糖類物質(zhì)和高能物質(zhì)三磷酸腺苷，民間常將黑蟻制成蟻粉或蟻酒服用，以健身防病[2-3]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)黑蟻的醇提物有抗風(fēng)濕、抗炎、抗抑郁、增強性功能、調(diào)節(jié)人體免疫功能、調(diào)節(jié)血糖和血脂、抗衰老和護肝等藥理作用[3-5]。臨床上以黑蟻為主藥，治療風(fēng)濕、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、糖尿病、肝炎、失眠、陽痿等疾病[2-3]。筆者在前人研究基礎(chǔ)上，采用GC-MS法研究分析黑蟻的物質(zhì)基礎(chǔ)，探討黑蟻脂溶性成分及揮發(fā)油的成分和組成，為科學(xué)合理利用傣藥黑蟻提供實驗依據(jù)。

1 材料

黑螞蟻購自大理金貝藥材市場，經(jīng)大理大學(xué)楊自忠教授鑒定為昆蟲綱膜翅目蟻科雙齒多刺蟻(PolyrhachisdivesSmith)。HP7890A/5975C型GC-MS聯(lián)用儀(Agilent公司)。試劑均為國產(chǎn)AR。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的制備 稱取100 g黑螞蟻粉末(過2號篩)于圓底燒瓶中，加蒸餾水500 mL，參照《中國藥典》(2015年版/四部)“通則2204”揮發(fā)油測定法甲法提取[6]，至揮發(fā)油體積不再增加，冷卻分層后分離揮發(fā)油，并用無水Na2SO4干燥[7]，得淺黃色油狀物，冷藏備用。

2.2 脂溶性成分的制備 稱取黑螞蟻粉末20 g，用95%乙醇索式提取1 h，將提取液減壓濃縮至小體積，用石油醚萃取3次，萃取液濃縮干，得淺黃色油狀提取物，冷藏備用。

2.3 脂溶性成分GC-MS分析條件 氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細(xì)管柱(30 m × 250 μm × 0.25 μm)，高純氦為載氣，1 mL/min恒流，分流比10∶1，進樣量1 μL，進樣口溫度250 ℃；柱升溫程序為起始80 ℃，按10 ℃/min升溫至190 ℃，再以5 ℃·min-1升溫至290 ℃，保留6 min。質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV，溶劑延遲3 min，質(zhì)量掃描范圍m/z12～550。

2.4 揮發(fā)油GC-MS分析條件 氣相色譜條件：同2.3項下；柱升溫程序為起始120 ℃，按10 ℃/min升溫至200 ℃，再以5 ℃/min升溫至220 ℃，保留5 min，后以2.5 ℃/min升溫至290 ℃，保留10 min。質(zhì)譜條件：同2.3項下。

2.5 黑螞蟻脂溶性成分和揮發(fā)油分析結(jié)果 黑螞蟻脂溶性成分和揮發(fā)油分別按上述檢測條件進行GC-MS分析，得總離子流圖，如圖1所示。經(jīng)NIST11.L質(zhì)譜庫檢索，取相似度90%以上成分，采用面積歸一化法計算相對含量。從黑螞蟻脂溶性成分中分離出51個色譜峰，檢測鑒定出39個化合物，相對含量占總量85.16%，結(jié)果見表1；從揮發(fā)油中分離出59個色譜峰，并鑒定出41個化合物，占總量61.11%。結(jié)果見表2。

表1 黑螞蟻脂溶性成分分析

序號保留時間/min化合物名稱 分子式 相對含量/%15.03辛酸octanoic acidC8H16O20.5825.34十五烷pentadecaneC15H320.1239.232,4-二叔丁基苯酚2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-phenolC14H22O0.0349.84月桂酸dodecanoic acidC12H24O20.09510.18鯨蠟烷hexadecaneC16H340.07611.011,11-十二碳二烯1,11-dodecadieneC12H220.12711.33十七烷heptadecaneC17H361.16812.11肉豆蔻酸myristic acidC14H28O20.16912.32棕櫚酸甲酯hexadecanoic acid, methyl esterC17H34O20.151012.85順-10-十六碳烯酸cis-10-hexadecenoic acidC16H30O30.141113.161-十九碳烯1-nonadeceneC19H380.021213.47十八烷octadecaneC18H380.981314.48棕櫚油酸palmitoleic acidC16H30O21.951414.81棕櫚酸palmitic acidC16H32O27.761515.71油酸甲酯9-octadecenoic acid, methyl esterC19H36O20.661616.89油酸 oleic acidC18H34O225.11717.12順-13-十八碳烯酸cis-13-octadecenoic acidC18H34O21.17

續(xù)表1

表1 黑螞蟻脂溶性成分分析

3 討論

研究從黑螞蟻脂溶性成分中鑒定39個化合物，相對含量占總量85.16%，主要成分類型有脂肪酸，烷烴，甾類和脂肪醇。不飽和脂肪酸含量最高，占47.03%，僅油酸和6-十八碳烯酸各占25.1%，17.93%；烷烴檢出數(shù)目最多，有12個，占15.42%，其中二十七烷(2.51%)，9-甲基十九烷(3.67%)，三十一烷(3.44%)含量較高；另外檢出膽固醇(3.72%)，膽甾-3,5-二烯(0.15%)，膽甾-4-烯-3-酮(0.26%)和β-谷甾醇(0.36%)4個甾類成分；還檢出少量鹵代烴1-氯二十烷(0.86%)和1-氯二十七烷(1.61%)。從揮發(fā)油中鑒定41個成分，相對含量占總量61.11%，主要成分類型為烷烴，烯烴，脂肪醇和鹵代烴。共檢出烷烴19個，其數(shù)目和含量均最高，占38.3%，其中十七烷(3.67%)，二十五烷(5.85%)，二十六烷(5.05%)，二十三烷(3.8%)，二十八烷(3.03%)二十四烷(4.93%)，二十九烷(2.62%)含量較高；檢出10個烯烴，占4.35%；另外檢出油酸(6.15%)，2個鹵代烴成分1-碘代十八烷(4.93%)和1-氯二十七烷(1.73%)。本研究首次從黑蟻中發(fā)現(xiàn)膽甾-4-烯-3-酮、1-氯二十烷、1-氯二十七烷、1-碘代十八烷及多個烴類成分。

表2 黑螞蟻揮發(fā)油成分分析

續(xù)表2

表2 黑螞蟻揮發(fā)油成分分析

脂溶性成分和揮發(fā)油中檢出18個共有成分，主要為烷烴，脂肪醇，脂肪酸及其酯，其中烷烴數(shù)目較多有10個，但含量差異大；均檢出棕櫚酸甲酯、棕櫚酸和油酸，以棕櫚酸和油酸在脂溶性成分中含量較高；均檢出1-氯二十七烷，其含量相當(dāng)。黑蟻的脂溶性成分以脂肪酸類為主，并發(fā)現(xiàn)4個甾體類成分；而揮發(fā)油則以烴類物質(zhì)為主。油酸(OA)和棕櫚酸(PA)是最常見的膳食脂肪酸。OA刺激肝癌HepG2細(xì)胞可引起自噬并促進凋亡[8]；PA則刺激引起自噬抗凋亡，提示這兩種膳食脂肪酸引起的自噬所發(fā)揮的生物學(xué)作用可能不同[9]。烴類化學(xué)成分是昆蟲信息素的活性成分，對昆蟲的行為活動起作用[10-11]。

多位學(xué)者對黑蟻化學(xué)成分進行了研究報道。沈立榮等[12]采用超臨界CO2萃取蟻油經(jīng)GC-MS分析出24個化合物，包含脂肪酸、烴類、甾體、硫醇等類型，主要成分為9-十八碳烯酸、油酸、亞油酸及其酯、膽甾醇和3,5-膽甾二烯等物質(zhì)；韋桂寧等[13]從黑蟻石油醚部位甲酯化產(chǎn)物中鑒定出13個脂肪酸，其中棕櫚酸和油酸含量較高；鄭巍等[14]用系統(tǒng)分離方法從黑蟻氯仿部位分離到7個化合物；王婧等[15]發(fā)現(xiàn)黑蟻的水提液風(fēng)味物質(zhì)主要為胺類、雜環(huán)、醇、醛、酮等大極性物質(zhì)。本研究的黑蟻脂溶性成分與文獻(xiàn)[12]均檢出油酸、棕櫚酸、9-甲基十九烷、二十二碳烯、膽甾醇和3,5-膽甾二烯；與文獻(xiàn)[13]有6個相同成分，為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸和油酸，其含量均為油酸較高；與文獻(xiàn)[14]有棕櫚酸、硬脂酸、油酸和β-谷甾醇4個共有成分?？梢娪退?、棕櫚酸、棕櫚油酸、硬脂酸、膽甾醇和3,5-膽甾二烯等為黑蟻藥材中穩(wěn)定存在的特征性成分。