葉筱穎

江西省上饒市人民醫(yī)院 （江西上饒 334000）

原發(fā)性胃腸道淋巴瘤（primary gastrointestinal lymphoma，PGIL）屬于結(jié)外淋巴瘤，惡性程度差異較大，免疫表型在淋巴瘤惡性程度的判斷中較為常用，但是一些患者雖然具有相同的免疫表型，預(yù)后卻不同[1]。研究表明，基因檢測(cè)在淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評(píng)價(jià)中發(fā)揮極為重要的作用[2-5]。本研究探討P53基因檢測(cè)在原發(fā)性胃腸道淋巴瘤患者預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2018年6月江西省上饒市人民醫(yī)院收治的原發(fā)性胃腸道淋巴瘤患者25例作為試驗(yàn)組，其中男15例，女10例；年齡6～81歲，平均（46.4±7.5）歲；病程1周至33年，平均（16.3±2.6）年；胃淋巴瘤15例，腸淋巴瘤10例；胃黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）淋巴瘤15例，非胃MALT淋巴瘤10例；B細(xì)胞淋巴瘤23例，非B細(xì)胞淋巴瘤2例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期7例；臨床癥狀，腹痛18例，消化道出血14例，貧血14例，腹部包塊6例，低蛋白血癥10例，腸梗阻2例，非特異性消化道癥狀8例，體重顯著降低7例，發(fā)熱2例，腹瀉2例，消化道穿孔1例，便秘1例，吞咽困難1例。25例患者中，行單純手術(shù)治療10例，其中5例為胃部分切除術(shù)，3例為腸部分切除術(shù)，1例為全胃切除術(shù)，1例為姑息手術(shù)；行手術(shù)+化療11例，其中10例為腫瘤切除術(shù)+CHOP方案化療，1例為CHOP方案化療+腫瘤切除術(shù)；行非手術(shù)治療4例，其中2例為單純CHOP方案化療，2例為對(duì)癥支持治療。另選取同期江西省上饒市人民醫(yī)院收治的淋巴結(jié)反應(yīng)性增生患者30例作為對(duì)照組。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）試驗(yàn)組均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為原發(fā)性胃腸道淋巴瘤；（2）試驗(yàn)組均為非霍奇金淋巴瘤；（3）患者均知情同意研究?jī)?nèi)容，且已簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）缺乏完整病例資料的患者；（2）無(wú)法有效配合研究的患者。

1.2 方法

兩組標(biāo)本均用石蠟包埋起來(lái)，連續(xù)切片，厚度為3 μm；購(gòu)買(mǎi)Sigma公司生產(chǎn)的20 mg/ml蛋白酶K儲(chǔ)存液，北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的P53基因探針（綠色熒光信號(hào)）。

試驗(yàn)組運(yùn)用改良熒光標(biāo)記原位雜交（FISH）技術(shù)檢測(cè)P53，由于檢測(cè)原發(fā)性胃腸道淋巴瘤石蠟切片P53的目的細(xì)胞為淋巴細(xì)胞（淋巴惡性增殖區(qū)域，胃腸組織），因此依據(jù)組織細(xì)胞常規(guī)FISH方法對(duì)FISH檢測(cè)方案進(jìn)行改良，包括于65℃的溫度下烘烤過(guò)夜，室溫下于二甲苯中脫蠟，于梯度乙醇中復(fù)水，于沸水中煮切片15～25 min，于37℃蛋白酶K工作液中浸入4～8 min，室溫下漂洗、脫水，在此過(guò)程中充分利用2×SSC溶液、梯度乙醇，在丙酮中浸入2 min，于56℃的溫度下進(jìn)行1 h的烤片。

對(duì)照組則對(duì)患者的外周血淋巴細(xì)胞滴片，建立閾值，在此過(guò)程中運(yùn)用常規(guī)滴片血細(xì)胞FISH方法。

1.3 臨床評(píng)價(jià)

依據(jù)HE染色的病理組織切片對(duì)淋巴瘤細(xì)胞分布位置進(jìn)行判定并詳細(xì)記錄，在該區(qū)域中分析該組織切片的探針信號(hào)，對(duì)間期細(xì)胞中每種探針的信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，確定結(jié)果：有2個(gè)綠色熒光信號(hào)出現(xiàn)在每個(gè)細(xì)胞中評(píng)定為P53正常，有0個(gè)或1個(gè)綠色熒光信號(hào)出現(xiàn)在每個(gè)細(xì)胞中評(píng)定為P53異常[6]。選取具有均勻信號(hào)的雜交區(qū)域并計(jì)數(shù)；將陰性對(duì)照設(shè)定為正常人外周淋巴細(xì)胞，將陽(yáng)性對(duì)照設(shè)定為既往已知陽(yáng)性病理切片。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

試驗(yàn)組中，P53基因缺失10例（40.0%），生存期8～12個(gè)月，平均（10.2±1.7）個(gè)月；胃淋巴瘤6例，腸淋巴瘤4例；非MALT淋巴瘤5例，MALT淋巴瘤5例；B細(xì)胞淋巴瘤9例，非B細(xì)胞淋巴瘤1例；病理分期Ⅰ～Ⅱ期6例，Ⅲ～Ⅳ期4例。試驗(yàn)組中，P53基因正常13例（52.0%），生存期30～34個(gè)月，平均（32.0±5.6）個(gè)月。試驗(yàn)組P53基因正?；颊叩纳嫫陂L(zhǎng)于P53基因缺失患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組中，P53基因缺失2例（6.7%）。試驗(yàn)組P53基因缺失率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

原發(fā)性胃腸道淋巴瘤起源于胃腸壁淋巴組織內(nèi)，多為非霍奇金淋巴瘤，臨床表現(xiàn)缺乏特異性，基因檢測(cè)在淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評(píng)價(jià)中發(fā)揮極為重要的作用。

研究表明，如果原發(fā)性胃腸道淋巴瘤患者P53基因缺失，則其具有較高的惡性程度，與單基因改變或無(wú)基因改變患者比較具有較短的平均生存期[7-12]。本研究探討P53基因檢測(cè)在原發(fā)性胃腸道淋巴瘤患者預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值，結(jié)果顯示，試驗(yàn)組P53基因正?；颊叩纳嫫陂L(zhǎng)于P53基因缺失患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組P53基因缺失率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

總之，P53基因檢測(cè)在原發(fā)性胃腸道淋巴瘤預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值較高。