趙 樂

南陽市中心醫(yī)院 (河南 南陽 473000)

胸腹水是臨床疾病常見的體征，其形成原因較為復雜。常規(guī)細胞學檢查時依據(jù)腫瘤細胞形態(tài)學特征進行判斷。[1]由于腫瘤細胞在積液中沒有組織及器官構(gòu)架的約束而呈自由漂浮和增生狀態(tài)，甚至經(jīng)歷數(shù)代繁殖失去了原來組織特征，同時受到刺激脫落的反應(yīng)性間皮細胞也有惡性細胞的一些特征，細胞病理診斷醫(yī)師很難對腺癌細胞和增生間皮細胞鑒別。[13]常規(guī)細胞學檢查的敏感度不理想，將胸腹水內(nèi)細胞進行薄層液基制片行免疫組織化學染色方法進行鑒別診斷很有臨床應(yīng)用價值[16]。我們用免疫細胞化學檢測CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1，在胸腹水中腺癌細胞及增生間皮細胞的表達情況，探討該組合在腺癌及增生間皮細胞鑒別診斷中的價值。

1 材料與方法

1.1研究對象 選取南陽市中心醫(yī)院病理科2015年-2017年胸腹水標本100例。其中腺癌72例(肺癌34例、乳腺癌12例、胃癌18例、卵巢癌8例)，反應(yīng)性增生間皮細胞28例(炎性病變22例、結(jié)核6例)。本研究是按照南陽市中心醫(yī)院倫理委員會規(guī)定進行的，并獲得所有患者的知情同意。

1.2液基細胞制片 取新鮮胸腹水標本200 ml，2 000 r/min離心，棄上清液，加入MonoGene細胞清洗液250 ml，500 r/min振蕩5 min,2000 r/min離心5 min，棄上清液，沉渣倒入有細胞保存液的標本瓶中，靜置15 min，使用邁威制片機制片7張，95%乙醇固定，1張用于HE染色用于常規(guī)細胞學檢查，另6張用于細胞免疫化學染色，先存于-20℃冰箱備用。

1.3試劑及染色方法 所用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1單克隆抗體及試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。采用鏈霉菌抗生物素過氧化酶(SP)法，磷酸緩沖液代替一抗作為空白對照，DAB顯色，蘇木精復染，脫水透明后封片。

1.4結(jié)果判定 CR表達間皮部位為胞質(zhì)和胞核。HMBE-1表達部位是胞膜周邊，WT1表達部位為胞核，CDX2表達為胞核，E-cadherin表達為胞膜，GLUT1表達部位為胞質(zhì)和胞膜。

1.5統(tǒng)計學分析 采用χ2檢驗，以P<0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1CR、HMBE-1及WT1在胸腹水中的表達 神經(jīng)特異性鈣結(jié)合蛋白(calretinin,CR)在間皮細胞中表達，胞核與胞質(zhì)均著色，呈棕黃色顆粒狀外觀，[6]28例良性胸腹水見CR呈陰性表達(25/28，93%)，在腺癌中無表達。間皮抗原(HMBE-1)在間皮細胞中表達胞膜周邊呈毛刺狀改變，呈棕黃色顆粒。在增生間皮細胞中表達(24/28，85%)，72例腺癌胸腹水中僅有2例表達陽性(2/72,2%)，Wilms抑癌基因1(WT1)在間皮細胞中表達胞核著色，呈棕黃色顆粒外觀，在增生間皮細胞中表達(23/28，82%)在腺癌中無表達。

2.2CDX2、E-Cadherin及GULT11在胸腹水中的表達 尾型同源框基因2(CDX2)在腺癌細胞中表達胞核著色，呈棕黃色顆粒外觀，在腺癌細胞中表達(49/72,68%)在增生間皮細胞中無表達。上皮型鈣粘附蛋白(E-cadherin)在腺癌細胞表達部位胞膜著色，呈棕黃色顆粒，在腺癌細胞中表達(63/72,88%)，在增生間皮細胞中無表達，葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(GLUT1)在腺癌細胞中表達明顯，胞膜或胞質(zhì)著色，呈棕黃色顆粒外觀，在腺癌細胞中表達(65/72,90%)，在增生間皮細胞只有3例表達陽性(3/72,4%)

3 討論

常規(guī)細胞學檢查通常對間皮細胞與腺癌細胞不難鑒別，但增生間皮細胞呈團排列、雙核、多核、核增大、核漿比增大等表現(xiàn)與高分化腺癌細胞難以鑒別，[8]對診斷造成困擾，需免疫組織化學染色進一步檢查才能明確。[9]在日常診斷工作中，只根據(jù)一種抗體染色陽性而確定某種腫瘤經(jīng)常導致錯誤，采用幾種抗體進行標記是非常重要的。最好選用液基細胞制片來進行免疫細胞化學實驗。液基制片的優(yōu)點表現(xiàn)為制成的薄片背景清晰，[15]無背景干擾，便于結(jié)果的判斷，且同一標本可制作多張涂片，便于抗體組合應(yīng)用[14]。

本研究采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六種抗體組合應(yīng)用于胸腹水中腺癌細胞及增生間皮細胞的診斷與鑒別診斷。CR是一種鈣結(jié)合蛋白，在間皮細胞中表達與胞核和胞質(zhì)，敏感性93%，特異性96.9%，是日常較常用的間皮標志物。HMBE-1是間皮細胞的分子標記，該抗體與間皮細胞表面的抗原反應(yīng),[12]表達為胞膜著色，敏感性85%，特異性95.8%。WT1是與腎母細胞瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的基因，在上皮型間皮瘤中也有表達，在增生間皮細胞中表達胞核著色，敏感性82%，特異性100%。CDX2是一個在胃腸道發(fā)育中參與早期分化再生的轉(zhuǎn)錄因子,[3]在腺癌細胞中表達胞核著色，敏感性68%，特異性100%。E-cadherin是一種依賴性的跨膜蛋白，對上皮細胞間相互粘附和維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定有重要作用，[4]在腺癌細胞中表達胞膜著色，敏感性88%，特異性93.3%。GLUT1是一種調(diào)節(jié)跨膜糖轉(zhuǎn)運的糖蛋白，其表達與細胞代謝及增殖水平量正相關(guān),[3]在腺癌細胞中表達胞膜或胞質(zhì)著色，敏感性90%，特異性95.9%。選擇一組至少兩種以上相互支持的抗體，同時再選反面否定的抗體，同時獲得雙重互補，正反兩方面的證實。[2]CR、HMBE-1、WT1中一種或幾種抗體在胸腹水中的異型增生細胞中表達陽性，而CDX2、E-cadherin、GLUT1表達陰性，即可表明是增生間皮細胞。反之，CDX2、E-cadherin、GLUT1中的一種或幾種抗體表達陽性，而CR、HMBE-1、WT1表達陰性，則表明是腺癌細胞。

我們通過研究發(fā)現(xiàn)采用CR、HMBE-1、WT1、CDX2、E-cadherin、GLUT1六種抗體組合應(yīng)用對細胞學胸腹水中腺癌細胞與增生間皮細胞鑒別診斷具有較大的幫助作用。各抗體在腺癌細胞與增生間皮中表達差異均有統(tǒng)計學意義。[17]各種抗體敏感性和特異性均有不同程度的局限性，而聯(lián)合檢測可雙重互補，提高診斷的準確性，具有重要的臨床價值。