周 俊，徐 艷，臧銀善

(宿遷市第一人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，江蘇 宿遷 223800)

雷公藤作為我國常見中藥，具有祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、解毒殺蟲、消腫止痛的功效。雷公藤多苷是從雷公藤的去皮根部提取的總苷，主要有效成分包括二萜類(雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯酮等)、三萜類(雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯甲等)及生物堿類(雷公藤晉堿、雷公藤次堿等)，其被證明是一種強(qiáng)大的抗炎和免疫調(diào)節(jié)藥物[1]。雷公藤多苷在我國被廣泛運(yùn)用于多種炎癥性疾病的治療，并取得了一定成功。研究證實(shí)，雷公藤提取物已被批準(zhǔn)用于克羅恩病[2]、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[3]和潰瘍性結(jié)腸炎[4]等自身免疫性和炎癥性疾病的常規(guī)治療。雖然部分患者使用雷公藤及其提取物后存在一定的生殖毒性、胃腸道反應(yīng)、肝毒性等不良反應(yīng)，但合理的治療和管理策略有助于提高患者對其的耐受性[5]。目前，雷公藤及其提取物在臨床廣泛應(yīng)用于腎病[6]、淋巴瘤[7]、乳腺癌[8]等疾病。雖然越來越多的臨床試驗(yàn)研究了雷公藤及其提取物的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用，但其發(fā)揮抗炎抗免疫作用的具體機(jī)制尚未完全明確?，F(xiàn)就雷公藤的抗炎抗免疫作用研究進(jìn)展予以綜述。

1 對免疫細(xì)胞的作用

免疫細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答的主體，在免疫系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。研究表明,雷公藤的抗炎抗免疫作用與免疫細(xì)胞有密切聯(lián)系[9-10]。許多研究證實(shí)，雷公藤及其提取物通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞而發(fā)揮抗免疫作用，其中的作用機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜[11-13]。一項(xiàng)回顧性研究發(fā)現(xiàn)，感染人類免疫缺陷病毒的患者使用雷公藤提取物后，體內(nèi)T細(xì)胞活化水平降低，CD4細(xì)胞恢復(fù)加快，且具有良好的安全性[9]。Abdin和Hasby[10]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤提取物可通過調(diào)節(jié)輔助性T細(xì)胞(helper T cell，Th)1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)譜及CD3+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)而調(diào)節(jié)多發(fā)性硬化癥的免疫反應(yīng)。研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎的黏膜組織中Foxp3+亞群和白細(xì)胞介素(interleukin，IL)10高表達(dá)，雷公藤提取物可通過調(diào)節(jié)IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β等炎癥因子而減輕潰瘍性結(jié)腸炎的炎癥反應(yīng)，其機(jī)制可能與Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上調(diào)有關(guān)[11]。余先球等[12]發(fā)現(xiàn)，雷公藤和IL-11聯(lián)合治療特發(fā)性血小板減少癥，可提高治療效果，減少不良反應(yīng)，其機(jī)制可能與雷公藤參與T淋巴細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)有關(guān)。調(diào)節(jié)T細(xì)胞可抑制強(qiáng)直性脊柱炎患者的免疫反應(yīng)，其缺失可能是強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病的原因之一。一項(xiàng)對照研究表明，經(jīng)雷公藤多苷治療后強(qiáng)直性脊柱炎患者體內(nèi)的CD4+CD25+CD127low調(diào)節(jié)T細(xì)胞表達(dá)水平明顯升高[13]。這表明，雷公藤多苷治療強(qiáng)直性脊柱炎的機(jī)制可能與外周血中CD4+CD25+CD127low調(diào)節(jié)T細(xì)胞的表達(dá)水平升高有關(guān)[13]。

彭桉平等[14]研究證實(shí)，雷公藤可通過抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞中的環(huán)加氧酶2和前列腺素E2分泌而抑制淋巴細(xì)胞的分化，但其具體機(jī)制需進(jìn)一步探索。一項(xiàng)關(guān)于小鼠急性粒-單核白血病細(xì)胞系WEHI-3的體外研究表明，雷公藤甲素顯著降低了白血病小鼠中的T細(xì)胞(CD3)、B細(xì)胞(CD19)、單核細(xì)胞(CD11b)和巨噬細(xì)胞(Mac-3)數(shù)量，增強(qiáng)了外周血單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用[15]。同時(shí)，雷公藤內(nèi)酯促進(jìn)了T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖，而對自然殺傷細(xì)胞在體內(nèi)的活性沒有顯著影響[15]。有研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素可抑制EB病毒陽性B淋巴細(xì)胞的活性，減少EB病毒編碼的潛伏膜蛋白質(zhì)1的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，而過表達(dá)潛伏膜蛋白質(zhì)1可減弱雷公藤甲素的這種抑制作用[16]。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察到，雷公藤甲素能顯著抑制EB病毒陽性B細(xì)胞淋巴瘤裸鼠體內(nèi)淋巴瘤細(xì)胞的生長[16]。這提示，雷公藤甲素可能通過下調(diào)潛伏膜蛋白質(zhì)1的表達(dá)而減少EB病毒誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖。在IgA腎病大鼠模型中，學(xué)者通過檢測尿蛋白水平、尿中紅細(xì)胞數(shù)量、腎組織IgA沉積情況、IL-17水平及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷通過調(diào)節(jié)Th17和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而減少IgA在腎組織中的沉積[17]。在體內(nèi)研究中，雷公藤甲素顯著抑制了小鼠脾細(xì)胞和純化CD4+T細(xì)胞中Th17細(xì)胞的生成，且其可以抑制IL-17基因的轉(zhuǎn)錄、IL-6誘導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3的磷酸化，其中轉(zhuǎn)錄激活因子3是參與Th17細(xì)胞發(fā)育的關(guān)鍵信號分子[18]。Wang等[19]證實(shí)，雷公藤提取物通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活，抑制T細(xì)胞功能及核因子κB (nuclear factor-κB，NF-κB)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用，其可能為自身免疫性腦脊髓炎的治療提供新方向。Liu等[20]通過研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素抑制了樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞的趨化作用。且雷公藤甲素可阻礙巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α、巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β、單核細(xì)胞趨化蛋白1等趨化因子發(fā)揮作用，其具體機(jī)制為通過抑制NF-κB的激活和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3磷酸化而調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞的趨化作用，這為雷公藤甲素在免疫藥理學(xué)方面的研究提供新依據(jù)[20]。在銀屑病小鼠模型中，Zhao等[21]證實(shí)雷公藤多苷可在一定程度上減輕小鼠發(fā)生的銀屑病樣病變，這種保護(hù)作用主要通過調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞，而不是Th1、Th2細(xì)胞或調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。此外，研究者還發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷主要通過抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3磷酸化而抑制Th17細(xì)胞的功能，進(jìn)而下調(diào)IL-17A、IL-17F和IL-22水平，從而發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)[21]。

2 對炎癥介質(zhì)的作用

炎癥是疾病的基本病理過程，炎癥介質(zhì)在炎癥的發(fā)生過程中起主導(dǎo)作用。研究證實(shí)，雷公藤通過參與調(diào)節(jié)多種炎癥介質(zhì)而發(fā)揮抗炎作用[4，22]。彭桉平等[14]研究表明，雷公藤甲素通過阻斷環(huán)加氧酶2的上調(diào)抑制多種人體細(xì)胞中前列腺素E2的產(chǎn)生，從而起到抗炎止痛作用。在潰瘍性結(jié)腸炎的研究中，硫酸右旋糖酐鈉鹽誘導(dǎo)的IL-6表達(dá)可被雷公藤的主要提取物雷公藤甲素抑制[4]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞中，雷公藤多苷可通過抑制腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)誘導(dǎo)IL-1β、IL-6的表達(dá)而發(fā)揮抗炎作用[22]。研究表明，雷公藤甲素通過抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而下調(diào)TNF-α、IL-1β和單核細(xì)胞趨化蛋白1的表達(dá)，從而抑制膜性腎小球腎炎大鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)[23]。一項(xiàng)隨機(jī)對照研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷可通過抑制強(qiáng)直性脊柱炎患者體內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)3、前列腺素E2、血管內(nèi)皮生長因子、IL-17的表達(dá)，從而達(dá)到減輕疾病炎癥反應(yīng)的目的[24]。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，慢性腎小球腎炎患者體內(nèi)的TNF-α及IL-6表達(dá)水平升高，而雷公藤甲素可改善慢性腎小球腎炎患者的腎功能及臨床癥狀，相關(guān)機(jī)制可能與其抑制TNF-α和IL-6的分泌有關(guān)[25]。Wu等[26]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷在不影響血糖的情況下，通過抗微炎作用而減輕糖尿病腎病大鼠的腎小球硬化，包括減少巨噬細(xì)胞在腎小球的浸潤，抑制TNF-α、IL-1β、轉(zhuǎn)化生長因子-β1在腎臟的表達(dá)及p38促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和NF-κB活化，從而減輕炎癥反應(yīng)。以上研究表明，雷公藤及其提取物可通過影響多種炎癥因子而發(fā)揮抗炎作用。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種慢性自身免疫性疾病，其以炎癥細(xì)胞浸潤關(guān)節(jié)和軟骨破壞為特征，而中性粒細(xì)胞作為重要的炎癥細(xì)胞，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制中起著至關(guān)重要的作用。Huang等[3]通過構(gòu)建類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型，研究雷公藤甲素對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀和中性粒細(xì)胞功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素可緩解關(guān)節(jié)炎癥狀，其主要通過減少中性粒細(xì)胞招募、抑制IL-6及TNF-α的表達(dá)而發(fā)揮作用；同時(shí)，雷公藤甲素還能降低中性粒細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的水平，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的凋亡，抑制中性粒細(xì)胞的遷移、增殖和自噬?？梢姡坠偌姿赝ㄟ^抑制中性粒細(xì)胞促炎效應(yīng)而減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥反應(yīng)，表明雷公藤甲素是一種治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的有效藥物[3]。

雷公藤通過抑制炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)而發(fā)揮抗炎作用，如IL-1β、IL-6、TNF-α、中性粒細(xì)胞等。然而，其能否調(diào)節(jié)抗炎細(xì)胞因子及其機(jī)制尚不清楚。IL-37是一種新的抗炎細(xì)胞因子，其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中發(fā)揮重要的抗炎作用[27]。Wang等[28]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤多苷可以誘導(dǎo)IL-37的上調(diào)，從而發(fā)揮抗炎作用；同時(shí)，胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2及p38MAPK通路的抑制劑可抑制雷公藤多苷誘導(dǎo)IL-37的表達(dá)，表明雷公藤多苷通過胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2和p38MAPK信號通路上調(diào)抗炎細(xì)胞因子IL-37的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用。這與He等[29]在人髓系白血病單核細(xì)胞中的研究結(jié)論一致。

3 對MMP的作用

MMP是一類結(jié)構(gòu)高度同源的內(nèi)肽酶的總稱，其因含金屬離子(鋅、鈣)而得名。MMP能降解幾乎所有的細(xì)胞外基質(zhì)成分，是維持細(xì)胞活力、增殖和遷移等功能的重要成分，故在胚胎發(fā)生、組織重建、炎癥、腫瘤等過程中起重要作用。研究證實(shí)，雷公藤在抗炎抗免疫過程中與MMP有密切聯(lián)系[30-32]。Yang等[30]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素可通過減少M(fèi)MP-9基因表達(dá)和降低MMP-9基因活性，抑制中性粒細(xì)胞趨化，從而抑制炎癥反應(yīng)和腫瘤細(xì)胞的侵襲。同時(shí)，雷公藤甲素通過下調(diào)MMP-9的表達(dá)誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡、抑制其侵襲，從而抑制免疫反應(yīng)，這在一定程度上控制了腫瘤進(jìn)展，但其具體機(jī)制尚不清楚[8]。此外，雷公藤甲素可抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的活力、增殖和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，減輕腫瘤的炎癥反應(yīng)[31]。Jiang等[31]研究表明，神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)雷公藤甲素處理后，miR-181a表達(dá)上調(diào)，MMP-2和MMP-9表達(dá)減少；而抑制miR-181a可升高M(jìn)MP-2和MMP-9水平，逆轉(zhuǎn)雷公藤甲素對SH-SY5Y細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響。這表明，雷公藤甲素通過上調(diào)miR-181a的表達(dá)降低MMP-2和MMP-9水平，從而抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞的增殖和遷移，減輕腫瘤的炎癥及免疫反應(yīng)[31]。Cai等[32]通過IL-1β誘導(dǎo)炎癥建立類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜rsc-364細(xì)胞系模型，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定IL-32和MMP(MMP-1、MMP-9)的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雷公藤可降低IL-32、MMP-1和MMP-9的表達(dá)水平且降低程度與藥物濃度呈劑量依賴性。這一發(fā)現(xiàn)可能有助于更好地理解雷公藤在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抗感染治療中的作用。

Sylvester等[33]研究表明，在原發(fā)性人類股骨頭骨關(guān)節(jié)炎和正常牛軟骨細(xì)胞中，雷公藤多苷部分或完全抑制TNF-α、IL-1和IL-17誘導(dǎo)的MMP-3和MMP-13的基因和蛋白表達(dá)。且該藥物還能抑制人滑膜成纖維細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子刺激的MMP-3蛋白的表達(dá)，但抑制劑量對軟骨細(xì)胞活力無不良影響。機(jī)制研究表明，雷公藤多苷降低了激活蛋白-1和NF-κB的DNA結(jié)合能力[33]。因此，雷公藤提取物通過抑制激活蛋白-1和NF-κB活性，抑制促炎細(xì)胞因子誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞MMP基因表達(dá)，從而發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)的作用[33]。Liacini等[34]研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素可抑制人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞、牛軟骨細(xì)胞及滑膜成纖維細(xì)胞中MMP-3、MMP-13基因的表達(dá)，從而發(fā)揮抗炎抗免疫作用。

此外，雷公藤甲素能通過阻斷c-Jun氨基端激酶/MAPK通路的激活，抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞的遷移和侵襲，改善關(guān)節(jié)炎小鼠的臨床癥狀和關(guān)節(jié)損傷情況。在重癥聯(lián)合免疫缺陷型小鼠模型中，雷公藤甲素可減弱類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞對軟骨的侵襲；免疫熒光結(jié)果表明，經(jīng)雷公藤甲素處理后的小鼠，其體內(nèi)f-肌動(dòng)蛋白的聚合減少及MMP-9的活化水平降低[35]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，雷公藤甲素抑制了TNF-α誘導(dǎo)的磷酸化，但沒有影響磷酸化p38的表達(dá)[35]。這表明，雷公藤甲素對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療作用可能部分是由于其對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞遷移和侵襲的抑制。

4 小 結(jié)

近年來，雷公藤的各種提取物及有效成分在許多免疫性疾病中得到廣泛應(yīng)用并取得了很好的療效，將雷公藤與其他藥物聯(lián)合使用、改變成分或使用方法可減少其不良反應(yīng)。隨著科研的不斷深入，雷公藤的抗炎抗免疫機(jī)制研究已取得了一定成果。雷公藤及其提取物通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖和活化、T淋巴細(xì)胞亞群比例、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)及多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生等復(fù)雜機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。然而，這些影響的分子機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。未來相信隨著研究的深入，人們對雷公藤抗炎抗免疫機(jī)制的了解將越來越深入，雷公藤會體現(xiàn)出最佳單味中藥的優(yōu)勢，用于更多疾病的治療。