羅漢宇，羅瀅娟**

（1. 吉安市食品藥品檢驗檢測中心，江西 吉安 343000；2. 吉安市疾病預(yù)防控制中心，江西 吉安 343000）

史國公藥酒是歷史悠久且目前仍廣泛使用的著名酒劑成藥[1-2]，收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第九冊，由玉竹、鱉甲、牛膝、桑寄生、防風、川芎等17味中藥組成[3]，具有祛風除濕、活血通絡(luò)的功效，主要用于風寒濕痹、骨節(jié)疼痛、四肢麻木。該制劑處方藥味多，現(xiàn)有標準采用理化鑒別，難以控制產(chǎn)品質(zhì)量，目前文獻雖有對處方中羌活和紅曲化學(xué)成分的研究[4]，但未見對處方中防風化學(xué)成分研究的報道。本文采用高效液相色譜法（HPLC）同時測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷以檢測防風的含量，該方法操作簡便，分離度好，為該品種質(zhì)量標準提高提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Bp211D十萬分之一電子天平（德國Sartorias公司）；密里博DQ5超純水制水機（Merck Millipore公司）。

1.2 試劑

正丁醇（分析純，國藥集團）；甲醇（色譜純，默克公司）；超純水（自制）；升麻素苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111522-201712，含量96.2 %）；5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111523-201610，含量96.1 %）；史國公藥酒（江西藥都樟樹制藥，批號160701，161101，170301）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-2 % 冰醋酸（40:60）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μl。理論塔板數(shù)按升麻素苷計算，不低于6000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 ml中各含60 μg的混合溶液，搖勻。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品25 ml，水浴蒸至約10 ml，移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇提取5次（20，20，10，10，10 ml），合并正丁醇液，加氨試液洗滌5次（20，20，10，10，10 ml），棄去洗液，正丁醇液置水浴蒸干，加甲醇適量溶解并稀釋至5 ml，搖勻，濾過。

圖1 專屬性試驗HPLC色譜圖

2.2.3 陰性對照溶液的制備 取除防風藥材的其他藥材按處方比例，照生產(chǎn)工藝制備空白樣品，按2.2.2項下方法制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按2.1項色譜條件測定。結(jié)果顯示，升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷峰分離良好，陰性對照溶液在升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷處無干擾峰，見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取升麻素苷（609.2 μg/ml）5-O-甲基維斯阿米醇苷（613.6 μg/ml）混合對照品溶液1，1，2，1，2，3 ml，分別置50，25，25，10，10，10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，按2.1項色譜條件測定。以峰面積為縱坐標、進樣量為橫坐標，計算回歸方程。升麻素苷回歸方程為Y=59.841X-54.543，r=0.9989；5-O-甲基維斯阿米醇苷回歸方程為Y=30.21X-48.742，r=0.9983，表明升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在121.84～1827.60 ng、122.72～1840.80 ng范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

取混合對照品溶液，連續(xù)進樣6次，按2.1項色譜條件測定，計算峰面積的RSD，結(jié)果升麻素苷峰面積RSD為0.63 %，5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積RSD為0.52 %，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取樣品（批號160701），按2.2.2項下方法制備，室溫下放置，分別在0，2，4，8，12，16，24 h測定，結(jié)果升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷峰面積的RSD分別為0.90 %，0.87 %，表明樣品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

取樣品（批號160701），按2.2.2項下方法制備6份供試品溶液，按2.1項色譜條件測定，根據(jù)峰面積計算升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，結(jié)果升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷平均含量分別為60.06，52.55 μg/ml，RSD分別為1.13 %，0.98 %，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已測定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量的史國公藥酒（批號161101）25 ml，平行9份，分為3組，分別精密加入混合對照溶液1 ml（升麻素苷濃度分別為48.23，60.16，72.52μg/ml，5-O-甲基維斯阿米醇苷濃度分別為48.12，60.25，72.36 μg/ml），按2.2.2項方法制備供試品溶液，按2.1項色譜條件測定，結(jié)果升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷平均回收率分別為98.12 %，97.56 %，RSD分別為0.95 %，0.98 %。

2.9 樣品測定

取3批次樣品，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項色譜條件測定，計算升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量。結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 測定對象的選擇

史國公藥酒是祛風除濕、活血通絡(luò)的藥品，防風具有祛風解表、勝濕止痛、止痙的功效[5]，是處方中起主要作用的中藥材之一。因此，選擇防風作為該藥酒含量測定的研究對象。

3.2 流動相的選擇

作者曾選擇甲醇-水、乙腈-水和甲醇-乙腈-水系統(tǒng)進行實驗，雖能檢測出成分峰，但峰形拖尾，分離度較低，故將流動相改為甲醇-2 %冰醋酸水溶液（40:60），在此條件下各檢測成分分離度和峰形良好，能獲得滿意的結(jié)果。

3.3 提取方法和溶劑的選擇

史國公藥酒含大量蔗糖，曾使用柱層析試圖去除試樣的糖分，但在去除糖分的同時，也使試樣中的升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷流失。后改用水飽和的正丁醇提取，正丁醇提取液用氨試液洗滌后，蒸干，加甲醇溶解后測定，此方法既可很好地去除藥酒中的糖分和大部分對目標成分測定有干擾的物質(zhì)，又可避免升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷在制備過程中的損失。

3.4 檢測波長的選擇

參照防風藥材項下的含量測定方法[6]并經(jīng)實驗驗證，升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷在254 nm波長處均有最大吸收，因此選擇254 nm作為測定波長。