国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

華支睪吸蟲生活史室內(nèi)微生態(tài)建立

2019-02-19 11:00,,,,,,
中國人獸共患病學(xué)報 2019年1期
關(guān)鍵詞:蟲卵感染率陽性

,,, ,,,

華支睪吸蟲(Clonorchissinensis,肝吸蟲)感染人主要引起肝膽系統(tǒng)長期慢性炎癥反應(yīng),嚴(yán)重可致肝纖維化和膽管癌。WHO國際癌癥研究署于2009年已將華支睪吸蟲確定為膽管細(xì)胞癌明確致癌物[1]。我國是肝吸蟲病主要流行區(qū),而廣西肝吸蟲感染率位居全國第二位[2],近年感染率一直呈上升趨勢[3],肝吸蟲感染已成為影響廣西公共衛(wèi)生健康的重要寄生蟲病。

肝吸蟲生活史復(fù)雜,需要水環(huán)境,人是終宿主,主要保蟲宿主有貓、犬、鼠等,第一中間宿主為淡水螺類,主要有紋沼螺(Parafossarulusstriatulus)、長角涵螺(Alocinmalongicornis)和赤豆螺(Bithyniafuch-sianus);第二中間宿主主要是鯉科魚類。而野生麥穗魚(Pseudorasboraparva)對肝吸蟲有很高易感性,常作為獲取囊蚴的供體。但若完全依靠從流行區(qū)采集麥穗魚和淡水螺來獲取實(shí)驗(yàn)所需囊蚴和尾蚴,不可避免會受到季節(jié)、氣候、人力等儲多因素限制,從而影響工作的時效性和計(jì)劃性,而野外獲得的魚往往還合并感染有其它囊蚴,這又極大地增加了分離鑒定囊蚴的工作量。為滿足科研和教學(xué)工作的需求,有必要建立一個小型室內(nèi)華支睪吸蟲生活史的生態(tài)環(huán)境來解決樣本的來源問題。經(jīng)過三年摸索和改進(jìn),現(xiàn)已成功構(gòu)建了一個能完成肝吸蟲生活史的生態(tài)環(huán)境。該生態(tài)占地面積小,日常維護(hù)所需人力物力少,可行性高,現(xiàn)將方法報道如下。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物來源 紋沼螺、麥穗魚分別采自廣西肝吸蟲流行區(qū)橫縣水庫和溝渠;雌性SD大鼠(SPF級),160~180 g,購自本校實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.2麥穗魚飼養(yǎng)缸和紋沼螺飼養(yǎng)盆的建立和管理 取塘泥曬干備用。玻璃魚缸大小120 cm×60 cm×50 cm,分隔成3個區(qū)間,左、右兩邊寬20 cm,中間寬80 cm,水深40 cm,底部鋪塘泥厚約10 cm,種植水韭草(Valisneriaspiralis);紋沼螺飼養(yǎng)盆為長方形塑料盆,2個,可直接從市場購買,大小66 cm×40 cm×18 cm,塘泥放于盆的短邊端,約占盆長度一半,厚8 cm,同樣種植水韭草,水深16 cm;另訂做一隔網(wǎng),長度與盆寬度等長,寬度等同于盆高度,插在盆的底部無塘泥這端,隔出一空間用于飼養(yǎng)已感染的麥穗魚。24 h充氧和抽水循環(huán),12h全光譜燈光照;在水溫低于20 ℃時,開啟加熱棒,維持水溫在24~25 ℃;每周投喂小魚飼料(市售)2~3次,每2周換水1/2,所用水為自來水,使用前先將自來水接入缸內(nèi)存放3~4 d以去氯后使用。

1.3肝吸蟲蟲卵收集 收集肝吸蟲感染者糞便,采用水洗沉淀法處理后,留取沉渣。

1.4紋沼螺感染及查尾蚴 將上述收集的沉渣倒入直徑15 cm培養(yǎng)皿內(nèi),然后放入紋沼螺963個, 螺與蟲卵比例約1∶50,保持水面沒過螺即可,感染8 h,之后將螺連同皿內(nèi)沉渣一起倒入飼養(yǎng)盆內(nèi),每周重復(fù)1次,連續(xù)3次。查螺時先將30個螺放入直徑6 cm平皿內(nèi),加入清水置燈下光照,查到有尾蚴時,再將螺移入直徑3.5 cm小培養(yǎng)皿內(nèi),一螺一皿,便可將陽性螺鑒定出來。陽性螺移入另一飼養(yǎng)盆內(nèi),與未受染螺分開飼養(yǎng)。

1.5麥穗魚感染 早上8點(diǎn),取陽性螺1螺1皿,加入清水,置燈下光照,下午3點(diǎn),將陽性螺放回池內(nèi)。尾蚴連同皿內(nèi)的水一起倒入2 000 mL燒杯內(nèi),加清水至1 000 mL刻度處,打開氣泵,調(diào)節(jié)氣量適中,放入麥穗魚,加蓋以防魚躍出,過夜。第2 d將魚連同水一起倒入飼養(yǎng)陽性螺的盆內(nèi)隔出的養(yǎng)魚區(qū)間。為避免一次大量感染可能會造成魚死亡,采用單次感染的尾蚴數(shù)量每尾魚不超過3千條,隔天或每天連續(xù)感染,累積感染尾蚴總數(shù)1~2萬條。之后魚可在隔間內(nèi)飼養(yǎng),或移到魚缸小池內(nèi)與未感染魚分開飼養(yǎng),便于使用時撈捕。

1.6囊蚴活力鑒定和大鼠感染 采用人工消化法收集囊蚴。人工消化液配制: 0.9 g NaCl溶于100 mL單蒸水中,再加入1 mL濃鹽酸,混勻,最后加入0.6 g胃蛋白酶,攪拌至完全溶解。取麥穗魚,去除魚鱗、魚鰭和內(nèi)臟,魚肉細(xì)細(xì)剁碎,移入三角燒杯內(nèi),按魚肉與消化液1∶10(g/mL)比例倒入人工消化液,37 ℃,慢搖消化過夜。過濾去渣,濾液倒入沉淀杯內(nèi)進(jìn)行水洗沉淀,反復(fù)3~5次直至上層清澈,倒掉上清液,留取沉渣置平皿內(nèi),鏡下分離囊蚴。隨機(jī)取100個囊蚴,加入0.1%胰酶,鏡下觀察計(jì)數(shù)3 min內(nèi)脫囊數(shù)。用灌胃針經(jīng)口感染10只SD大鼠,每鼠100個囊蚴,感染后第20 d開始取糞便查蟲卵,第50 d殺鼠計(jì)數(shù)膽管內(nèi)成蟲。

2 結(jié) 果

2.1紋紹螺飼養(yǎng)及感染情況 2016年5月建成如圖1所示紋紹螺飼養(yǎng)盆,麥穗魚可飼養(yǎng)在放置抽水泵的這個隔間,便于捕撈,也不影響尾蚴與魚接觸。飼養(yǎng)陰性螺的盆則無需加此隔層。8月放入從流行區(qū)采集的963個紋紹螺,在1個月內(nèi)經(jīng)反復(fù)查螺確認(rèn)無逸肝吸蟲尾蚴后進(jìn)行蟲卵感染螺實(shí)驗(yàn),于12月開始陸續(xù)查到陽性螺,至次年5月共計(jì)47個,感染率約4.9%(47/963)。每次逸出的尾蚴數(shù)量不定,有時多達(dá)數(shù)千條,有時僅數(shù)十條,沒有規(guī)律可循。螺飼養(yǎng)至第2個月即觀察到有少量幼螺,全年都有產(chǎn)卵孵化幼螺行為。

2.2麥穗魚飼養(yǎng)和感染情況 2014年5月先建成魚缸,10月放入麥穗魚48條,開始半年,每月有1~2條魚死亡,之后穩(wěn)定,極少死亡。第2年6月觀察到有小魚出生,魚群數(shù)量維持在40條左右(圖2)。單獨(dú)觀察了3條麥穗魚最后形成的囊蚴數(shù)與用于感染的尾蚴總數(shù)之比,分別是30.93%(928/3 000)、27.95%(1677/6 000)、32.35%(2912/9 000),平均30.65%。麥穗魚體內(nèi)囊蚴數(shù)量達(dá)8千至1萬時,魚仍能正常存活。隨機(jī)取100個囊蚴,加入0.1%胰酶,均能在3分鐘內(nèi)脫囊,顯示囊蚴的活力很好。SD大鼠于感染后第23 d首次查見蟲卵,第28 d全部查到蟲卵,第50 d殺鼠獲得成蟲數(shù)為57.8±17.1條。

圖1 紋沼螺飼養(yǎng)盆Fig.1 Basin for breeding Parafossarulus striatulus

圖2 麥穗魚飼養(yǎng)缸Fig.2 Aquarium for breeding Pseudorasbora parva

3 討 論

麥穗魚體形小,喜淺水,養(yǎng)殖時不需要提供大體積水體,極大節(jié)省空間。該魚雖為野生,但較易訓(xùn)化為室內(nèi)養(yǎng)殖,從目前來看其壽命至少有3年以上,最重要的是對肝吸蟲囊蚴高度易感且耐受性高,囊蚴達(dá)數(shù)千至上萬仍不會致死,極適合用做肝吸蟲生活史生態(tài)池中第二中間宿主的動物模型。我們在橫縣流行區(qū)采集的螺以紋沼螺占大多數(shù),豆螺數(shù)量較少。

曾將幾十個豆螺放在盆內(nèi)飼養(yǎng),養(yǎng)殖條件與紋沼螺相同,但未能繁殖起來。紋沼螺壽命1年半左右,當(dāng)年下半年采集回來的成螺或老螺,養(yǎng)至次年下半年大部分螺包括陽性螺都將陸續(xù)死亡,因此用蟲卵感染螺的工作每年都需要做,用以補(bǔ)充死掉的陽性螺。如果螺的繁殖數(shù)量不夠多,還是需要從野外采集部分回來補(bǔ)充。

梁熾[4]報道的飼養(yǎng)池占地面積大,日常維護(hù)所需工作量也大,不易做成;程榮聯(lián)[5]報道的是一個建于樓頂戶外型飼養(yǎng)池,受季節(jié)影響,不適合冬季時間長,氣溫寒冷地區(qū)。本次建立的生態(tài)環(huán)境為室內(nèi),占地極小,放在實(shí)驗(yàn)室角落即可,日常維護(hù)所需工作量不多,冬季通過加熱棒加溫,可不受季節(jié)影響。

不同于上述梁和程的報道,本模式將螺與魚分開飼養(yǎng),螺另置于一小水體飼養(yǎng),除了便于對螺進(jìn)行觀察和操作外,還能避開魚和螺共養(yǎng)時帶來的魚對螺的攻擊。為提高蟲卵感染紋沼螺和尾蚴感染魚的感染效率,不能完全依賴在飼養(yǎng)環(huán)境中的自然感染,通過一些人為操作來增加螺吞食蟲卵和尾蚴接觸魚的機(jī)會也是需要的。本模式中螺感染率約為4.9%,離我們的預(yù)期還是有一定差距,如何提高螺感染率又不增加其死亡,還需要進(jìn)一步探索。

利益沖突:無

猜你喜歡
蟲卵感染率陽性
食品核酸陽性情況為何突然變多
不同墊料對黑水虻蟲卵孵化的影響
英國:55歲以上更易染疫
和它一起笑
48 353例幽門螺桿菌感染狀況分析
健康女性人乳頭瘤病毒感染的狀況研究
人-人嵌合抗丙肝抗體檢測陽性對照品的研制及應(yīng)用
4 ℃無氧保存時間對綿羊糞便中線蟲卵孵化率的影響
拋開“陽性之筆”:《怕飛》身體敘事評析
幾乎 100% 的大米中都有蟲卵
四子王旗| 温泉县| 化州市| 凤山市| 博野县| 马龙县| 太康县| 诸暨市| 六枝特区| 阜南县| 枝江市| 崇信县| 广丰县| 新龙县| 苏尼特右旗| 彭州市| 四川省| 马龙县| 昆明市| 裕民县| 香港| 文水县| 靖安县| 婺源县| 东乌珠穆沁旗| 固镇县| 平乐县| 和平区| 班玛县| 绵竹市| 奉贤区| 平遥县| 类乌齐县| 沙坪坝区| 进贤县| 阿鲁科尔沁旗| 昆明市| 临潭县| 库尔勒市| 苍南县| 青田县|