魏峰，宋艷華，程斌，于慧娟，張莉莉

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)；3濟(jì)南市中心醫(yī)院)

功能性胃腸病是臨床常見病，研究表明針刺對胃腸運動功能紊亂具有較好的療效[1，2]。夾脊穴具有改善胃腸運動障礙，促進(jìn)胃腸蠕動的作用[3]，目前對其作用機(jī)制的研究多集中于低位中樞神經(jīng)，缺乏對延髓、下丘腦、海馬等高位中樞神經(jīng)的研究。迷走神經(jīng)背核(DMV)是中樞神經(jīng)調(diào)節(jié)胃腸運動的最基本核團(tuán)，在調(diào)節(jié)胃腸運動中發(fā)揮關(guān)鍵作用。DMV通過釋放谷氨酸和γ-氨基丁酸(GABA)等神經(jīng)遞質(zhì)作用于DMV內(nèi)不同受體，實現(xiàn)對胃腸運動功能的調(diào)控。研究表明DMV復(fù)合體微量注射N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)或GABA受體(GABAR)阻斷劑對胃腸運動的調(diào)控作用不同[4，5]?；诖耍?016年10月～2018年6月本研究觀察針刺夾脊穴對胃腸蠕動障礙大鼠模型胃腸運動功能的作用，并考察DMV中的NMDA或GABAR對夾脊穴促進(jìn)胃腸運動功能作用的影響。

1 材料與方法

1.1 動物、試劑及儀器 SD雄性大鼠45只，180～210 g，由山東大學(xué)實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號SCXK(魯)20090001，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食、飲水；室溫18～22 ℃，空氣濕度40%～50%，自然光照明，換氣風(fēng)扇通風(fēng)。硫酸阿托品注射液(天津藥業(yè)集團(tuán))，葡聚糖藍(lán)-2000(上海超研生物科技有限公司)，犬尿烯酸(美國Sigma 公司)、法克羅芬(美國Sigma 公司)、荷苞牡丹堿(美國Selleck公司)、腦立體定位儀立體定位儀(日本Narishige公司)。

1.2 動物分組及模型制備 將大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組，每組9只。禁食12 h，除空白對照組外其余各組皮下注射硫酸阿托品注射液(2 mg/kg)，建立胃腸動力障礙模型?？瞻讓φ战M皮下注射等量生理鹽水。

1.3 DMV微量注射 各組給予葡聚糖藍(lán)-2000(20 mg/mL)1 mL灌胃，20 min后給予20%烏拉坦腹腔注射麻醉，待麻醉穩(wěn)定后將大鼠俯臥位固定于鼠腦立體定位儀上，剪去頭頂部毛發(fā)，于兩耳連線沿正中切開皮膚1.5～2 cm，鈍性分離剝開皮下筋膜和骨膜，露出“十”字縫和“人”字點。移動鼠腦立體定位儀上下標(biāo)尺，調(diào)節(jié)鼠頭部平面，使“十”字縫與“人”字點高水平，即顱骨水平位。核團(tuán)定位根據(jù)Paxinos和watson大鼠腦立體定位圖譜進(jìn)行DMV定位：P 13.24 mm，R 0.7 mm，H 8.15 mm。確定位置后用牙科鉆(鉆頭直徑l mm)鉆破顱骨。玻璃微量移液器將相應(yīng)藥物注入迷走神經(jīng)運動背核。針刺+NMDAR拮抗劑組給予犬尿烯酸5 μL，針刺+GABAR拮抗劑組給予荷苞牡丹堿、法克羅芬5 μL，注射于1 min完成[6]。空白組、模型組和針刺組注射無菌水5 μL。

1.4 針刺方法 DMV微量注射10 min后，針刺組、針刺+NMDAR拮抗劑組、針刺+GABAR拮抗劑組給予夾脊穴針刺。腧穴定位參照中國針灸學(xué)會實驗針灸分會制定的《動物針灸穴位圖譜》和華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》，背部夾脊穴：雙側(cè)T8～12各椎下正中旁開約3 mm，毫針直刺2 mm后，接SDZ-IV型電子針療儀，電壓9 V，疏密波型，混頻20～100 Hz，刺激30 min。

1.5 觀察指標(biāo) 針刺結(jié)束10 min，脫頸椎處死動物，結(jié)扎賁門、幽門及回盲部，取出胃及小腸組織。胃排空率：將胃剪碎，使用去離子水將胃內(nèi)色素殘留物充分清洗，至洗液體積為4 mL，混勻，10 000 r/min離心5 min，取上清液測620 nm處光密度[7]。胃排空率=(1-胃內(nèi)殘留色素吸光度÷標(biāo)準(zhǔn)管色素吸光度)×100%。小腸推進(jìn)率:將小腸平鋪于紙板上，自然拉直，量取幽門括約肌至色素最前端及至回盲部的距離，二者之比×100%為小腸推進(jìn)率。注：標(biāo)準(zhǔn)管色素吸光度為葡聚糖藍(lán)-2000(20 g/L)1 mL稀釋于2 mL蒸餾水后測得620 nm處吸光度值。

2 結(jié)果

2.1 針刺夾脊穴對大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率的影響 與正常組比較，模型組胃排空率、小腸推進(jìn)率低(P均<0.01)；與模型組比較，針刺組胃排空率、小腸推進(jìn)率高(P均<0.05)。見表1。

表1針刺夾脊穴對大鼠胃排空率、小腸推進(jìn)率的影響

2.2 注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對針刺夾脊穴作用的影響 注射GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿(針刺+荷苞牡丹堿組)或法克羅芬(針刺+法克羅芬組)后胃排空率、小腸推進(jìn)率與針刺組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。注射NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸(針刺+犬尿烯酸組)后胃排空率、小腸推進(jìn)率下降，較針刺組低(P均<0.05)。見表2。

表2注射GABA受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑對針刺夾脊穴作用的影響

3 討論

夾脊穴與經(jīng)絡(luò)臟腑存在密切的聯(lián)系，處于督脈和膀胱經(jīng)第一側(cè)線之間。膀胱經(jīng)為十二經(jīng)脈核心，督脈為陽脈之海，總督一身之陽氣。兩經(jīng)均循行背部，其經(jīng)脈在脊柱兩側(cè)深部相互貫通，夾脊穴位于經(jīng)氣外延重迭覆蓋之處，故夾脊穴可以一穴調(diào)兩經(jīng)，具有整合兩經(jīng)經(jīng)氣之作用。夾脊穴是華佗對背俞穴的特殊用法，其本身就具體調(diào)理臟腑功能的作用。從解剖位置而言，脊柱兩旁的交感干神經(jīng)節(jié)借節(jié)間支連接成左右兩條交感干，并通過交通支與脊神經(jīng)聯(lián)系，隨脊神經(jīng)分布到周圍器官或臟器，支配和調(diào)控周圍器官或臟器的功能[8,9]。針刺夾脊穴可刺激脊神經(jīng)前后支、交感神經(jīng)干通過的脊神經(jīng)，在相應(yīng)脊髓節(jié)段內(nèi)，實現(xiàn)經(jīng)內(nèi)臟感覺纖維與內(nèi)臟運動纖維的聯(lián)系。故夾脊穴深層的椎旁交感神經(jīng)干、脊神經(jīng)后支和神經(jīng)纖維末梢被認(rèn)為是其針灸效應(yīng)的神經(jīng)生理學(xué)基礎(chǔ)[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，針刺夾脊穴可明顯提高胃腸運動障礙模型大鼠的胃排空率和小腸推進(jìn)率，說明夾脊穴具有促進(jìn)胃腸運動功能的作用。本研究中所取的夾脊穴與支配胃腸的內(nèi)臟神經(jīng)處于同一脊神經(jīng)階段，針刺刺激可以通過激活相應(yīng)的脊神經(jīng)產(chǎn)生神經(jīng)沖動至中樞神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控胃腸運動。

支配胃的副交感節(jié)前神經(jīng)元主要位于DMV，公認(rèn)其在調(diào)節(jié)胃腸功能活動中發(fā)揮樞紐作用。DMV與中樞和外周神經(jīng)存在廣泛的纖維聯(lián)系，是集內(nèi)臟感覺傳入和傳出于一體的內(nèi)臟副交感節(jié)前中樞。DMV既可接受來自胃腸道的感覺信息，又可接受來自高級中樞的信息，并發(fā)出沖動通過副交感運動神經(jīng)下傳支配胃腸道的運動[11]。既往研究證實，DVC是針刺調(diào)整胃運動和分泌的重要中樞部位[12]。DMV通過其副交感節(jié)前運動神經(jīng)元經(jīng)迷走神經(jīng)傳出釋放乙酰膽堿到節(jié)后神經(jīng)元支配胃腸道運動，其節(jié)后神經(jīng)元部分為膽堿能興奮性神經(jīng)元，部分是為非腎上腺素能非膽堿能抑制性神經(jīng)元，因此迷走神經(jīng)對胃運動具有興奮和抑制兩種效應(yīng)[13]。其中膽堿能纖維是興奮性纖維，末梢釋放乙酰膽堿，通過M受體促進(jìn)胃運動功能；而抑制性纖維是非膽堿能非腎上腺素能纖維，末梢釋放肽類遞質(zhì)，引起胃底部的容受性舒張。因此迷走神經(jīng)對胃運動具有興奮和抑制兩種效應(yīng)。因此DMV對胃腸運動的調(diào)節(jié)效應(yīng)，取決于突觸后GABA受體、NMDA和非NMDA型谷氨酸受體活化。本研究采用GABA受體拮抗劑荷苞牡丹堿、法克羅芬及NMDA受體拮抗劑犬尿烯酸微量注射，觀察二者對夾脊穴促進(jìn)胃腸運動的作用，結(jié)果表明使用荷苞牡丹堿和法克羅芬特異性抑制DMV中GABA受體活化，對夾脊穴促進(jìn)胃腸運動無明顯影響；而微量注射犬尿烯酸后，夾脊穴促進(jìn)胃腸運動的作用被明顯抑制，證實夾脊穴調(diào)控胃腸功能的作用是通過DMV中NMDA受體來介導(dǎo)的。

綜上所述，針刺夾脊穴對胃腸運動障礙模型大鼠的胃腸運動功能具有促進(jìn)作用，這種促進(jìn)作用與DMV中的NMDA受體關(guān)系密切，而DMV中的GABA受體對該作用無明顯影響。這為認(rèn)識夾脊穴調(diào)節(jié)胃腸功能的中樞機(jī)制提供了新的思路。