孫 惠，楊辛欣，張大方，李超英

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

硝基咪唑類(lèi)藥物結(jié)構(gòu)的共同特點(diǎn)是咪唑環(huán)上有硝基取代，根據(jù)咪唑環(huán)上取代基的種類(lèi)和位置的不同分為不同的藥物。硝基咪唑類(lèi)藥物具有抗厭氧菌譜廣、殺菌作用強(qiáng)、價(jià)格較低，且療效顯著等優(yōu)點(diǎn)，與其他抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用于臨床各個(gè)系統(tǒng)的厭氧菌與需氧菌混合感染。目前國(guó)內(nèi)外已上市的硝基咪唑類(lèi)藥物主要有甲硝唑（metronidazole）、替硝唑（tinidazole）、奧硝唑（ornidazole）、塞克硝唑（secnidazole）等。

硝基咪唑類(lèi)藥物療效可靠，不良反應(yīng)較輕，如消化道不良反應(yīng)，惡心、嘔吐、頭痛、腹痛等；長(zhǎng)期大劑量使用此類(lèi)藥物不良反應(yīng)發(fā)生率較高且較為嚴(yán)重，如變態(tài)反應(yīng)、過(guò)敏性休克、泌尿系統(tǒng)損害等[1]。因此，嚴(yán)格控制硝基咪唑類(lèi)藥物含量對(duì)臨床應(yīng)用起著重要作用。目前，此類(lèi)藥物含量測(cè)定方法有滴定法、紫外分光光度計(jì)、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)方法等方法。本文針對(duì)不同方法的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行論述，為硝基咪唑類(lèi)藥物含量測(cè)定提供技術(shù)支撐。

1 分析方法

1.1 滴定法 采用的滴定方法為中和滴定，是以指示劑顏色的變化為指標(biāo)，通過(guò)已知酸堿的含量求出未知酸堿的含量。目前《中國(guó)藥典》（2015年版）[2]、日本藥局方（The Japanese Pharmacopoeia）（JP17）[3]及《國(guó)際 藥 典》（ The International Pharmacopoeia，Seventh Edition）[4]收載甲硝唑原料藥均為中和滴定法，此方法具有快速、方便等優(yōu)點(diǎn)，但也存在誤差較大，重復(fù)性低及靈敏度小等缺點(diǎn)，目前此方法應(yīng)用于常規(guī)分析，如甲硝唑原料藥的一般檢查。

1.2 紫外分光光度法（UV） UV法由于儀器設(shè)備簡(jiǎn)便、成本低，準(zhǔn)確度高及易于操作等優(yōu)點(diǎn)，已成為藥物必備的檢測(cè)設(shè)備之一。施春陽(yáng)等[5]采用雙波長(zhǎng)分光光度法測(cè)定氯硝唑酊中氯霉素和甲硝唑的含量，根據(jù)等吸收點(diǎn)法，確定氯霉素測(cè)定波長(zhǎng)為277 nm，參比波長(zhǎng)為352 nm；甲硝唑測(cè)定波長(zhǎng)為309 nm，參比波長(zhǎng)為243 nm測(cè)定氯霉素平均回收率為99.7%，甲硝唑平均回收率為98.7%。該法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性較好，可不經(jīng)分離檢測(cè)氯硝唑酊中氯霉素和甲硝唑的含量。

目前，UV法主要應(yīng)用于此類(lèi)藥物含量、藥物雜質(zhì)、藥物穩(wěn)定性、藥物釋放度、藥物負(fù)載行為測(cè)定及其物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定等方面，應(yīng)用最多的是用于原料藥及制劑的一般含量測(cè)定。

1.3 高效液相色譜法（HPLC） HPLC法于20世紀(jì)60年代后期引入氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)，是目前常用藥物檢測(cè)手段，具有適用范圍廣、分離效率高、分析速度快和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。

李為等[6]建立HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方奧硝唑貼膜中奧硝唑和地塞米松磷酸鈉含量的方法，對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相的種類(lèi)和比例進(jìn)行篩選，確定色譜條件為ODS柱，流動(dòng)相為甲醇-20 mmol/L磷酸鹽緩沖液，檢測(cè)波長(zhǎng)為242 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫30 ℃；所建立的 HPLC 法專(zhuān)屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，可同時(shí)測(cè)定復(fù)方奧硝唑貼膜中奧硝唑和地塞米松磷酸鈉的含量，適用于該制劑的質(zhì)量控制。

Michael Cohen-Wolkowiez等[7]建立HPLC法測(cè)定干血斑（DBS）中甲硝唑的方法，以DBS為樣品采集工具的新型生物分析方法結(jié)合HPLC法形成一種適合于新生兒樣品的選擇性、靈敏的檢測(cè)方法，首次報(bào)道甲硝唑在新生兒臨床小樣本中的定量方法，為新生兒藥物監(jiān)控提供檢測(cè)手段。辛顯桐等[8]研究甲硝唑經(jīng)口腔給藥的藥代動(dòng)力學(xué)，研究動(dòng)物為SD大鼠，給藥劑量為80 mg/kg，采用結(jié)扎大鼠食管達(dá)到口腔給藥的途徑；實(shí)驗(yàn)表明甲硝唑符合與灌胃大鼠相同劑量的甲硝唑相比所顯示的動(dòng)力學(xué)趨勢(shì)是相似的，均符合一級(jí)吸收一室模型，但達(dá)峰濃度較灌胃給藥低，證實(shí)口腔黏膜吸收也是甲硝唑吸收代謝的有效途徑，此給藥途徑可用于甲硝唑口腔疾病。Junichi Iida等[9]測(cè)定乳腺癌患者使用甲硝唑軟膏后甲硝唑血藥濃度并且進(jìn)行分析研究，是從藥代動(dòng)力學(xué)角度研究局部給藥甲硝唑的安全性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在該患者中的血漿濃度比正常人吸收高30倍。分析血漿濃度較高的可能是由于潰瘍皮膚的角質(zhì)層的皮膚屏障功能比正常皮膚吸收差，藥物的侵入和轉(zhuǎn)移促進(jìn)了表皮附近的血管吸收，影響藥物的吸收。

康現(xiàn)武等[10]研究甲硝唑緩釋微球結(jié)腸溶膠囊在家兔體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，采用雙交叉實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，分別口服結(jié)腸溶膠囊及參比制劑（原料藥），對(duì)比2者的藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程。結(jié)腸溶膠囊組與對(duì)照組的Tmax分別為8.5 h和1 h，Cmax 分別為 4.617 μg/mL 和 13.499 μg/mL，實(shí)驗(yàn)采用HPLC方法研究甲硝唑藥代動(dòng)力學(xué)，且證明甲硝唑緩釋微球結(jié)腸溶膠囊口服給藥可以在結(jié)腸吸收，且具有緩釋、結(jié)腸靶向性等作用。

目前，相比于滴定法和UV法，HPLC法測(cè)定硝基咪唑類(lèi)藥物含量方便，快速、準(zhǔn)確，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于成分復(fù)雜的制劑含量測(cè)定、質(zhì)量控制及體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)等研究。

1.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS） 液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)是在20世紀(jì)90年代迅速發(fā)展的檢測(cè)手段，將高效液相的強(qiáng)分離能力與質(zhì)譜高靈敏度結(jié)合，使其具備高選擇性、高靈敏度和強(qiáng)分離性等優(yōu)點(diǎn)，可根據(jù)質(zhì)譜檢測(cè)器類(lèi)型的不同分為液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀、液相色譜串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀、液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿離子阱質(zhì)譜儀和液相色譜法串聯(lián)傅里葉變換離子回旋共振儀等[11]。目前應(yīng)用在食品、化妝品、動(dòng)物飼料及口腔衛(wèi)生用品中的甲硝唑痕量測(cè)定及多成分的體內(nèi)代謝規(guī)律的研究。

Stephani L.等[12]建立同時(shí)定量人血漿中甲硝唑和2-羥基甲硝唑的含量測(cè)定方法，采用灌胃給予甲硝唑片，通過(guò)親水親脂性平衡固相萃取有效提取血漿中有效成分，采用超高效液相色譜質(zhì)譜（UPLC-MS / MS）方法測(cè)定血漿成分，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，建立的方法具有靈敏度高和高效等優(yōu)點(diǎn)，可以應(yīng)用于健康人口服甲硝唑片的藥代動(dòng)力學(xué)研究。Shampa Das等[13]探究頭孢他啶、阿維巴坦和甲硝唑3種成分在健康受試者中的隨機(jī)藥代動(dòng)力學(xué)和藥物相互作用研究，通過(guò)UPLC-MS測(cè)定受試者的血液與尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，采用雙交叉設(shè)計(jì)考察頭孢他啶-阿維巴坦與甲硝唑合用的藥物相互作用關(guān)系，根據(jù)預(yù)定的時(shí)間內(nèi)曲線下面積與每對(duì)藥物的最大血漿濃度的比率數(shù)據(jù)表明臨床上頭孢他啶-阿維巴坦聯(lián)用與甲硝唑聯(lián)合用藥不僅藥效增強(qiáng)，且無(wú)不良反應(yīng)。

硝基咪唑類(lèi)藥物廣泛應(yīng)用于臨床各個(gè)領(lǐng)域，但該類(lèi)藥具有細(xì)胞誘變性和動(dòng)物致癌毒性。硝基咪唑類(lèi)藥物可以治療和預(yù)防動(dòng)物某些細(xì)菌或原蟲(chóng)疾病，但其在動(dòng)物組織中殘留已對(duì)食品安全構(gòu)成威脅，楊成對(duì)等[14]采用液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀同時(shí)測(cè)定家禽肌肉組織中3種硝基咪唑類(lèi)藥物（甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝唑）殘留量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與其他檢測(cè)方法相比，此方法具有分析物響應(yīng)強(qiáng)、運(yùn)行時(shí)間短、線性范圍寬及檢測(cè)限低等優(yōu)勢(shì)。

近年來(lái)，甲硝唑因療效明顯、價(jià)格低廉，被蜂農(nóng)廣泛應(yīng)用于治療和預(yù)防蜜蜂孢子蟲(chóng)病，但是過(guò)量的使用極易引起蜂蜜中藥物殘留，對(duì)人體健康產(chǎn)生危害。肖國(guó)軍等[15]采用液質(zhì)法同時(shí)測(cè)定蜂蜜中甲硝唑、氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素4種成分殘留，采用固相萃取柱凈化，正離子和負(fù)離子采集模式，增加其測(cè)定的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明液質(zhì)法適用于蜂蜜中4種成分殘留量測(cè)定，為蜂蜜的質(zhì)量控制提供檢測(cè)技術(shù)。

硝基咪唑類(lèi)藥物也是臨床治療疥瘡、痤瘡的處方藥，但因其致癌及致突變等毒性，我國(guó)禁止將其加入化妝品中，但仍有些商家非法加入使其達(dá)到效果，因此應(yīng)建立合理的硝基咪唑類(lèi)藥物的檢測(cè)方法。張?chǎng)析蔚萚16]對(duì)祛痘化妝品中5種硝基咪唑類(lèi)成分（甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝咪唑、羥基甲硝唑和1-甲基-5-硝基-2-羥甲基咪唑）進(jìn)行測(cè)定，采用溶劑萃取和固相萃取柱凈化相結(jié)合的方法處理樣品達(dá)到減小檢測(cè)誤差，并對(duì)其樣品處理及萃取過(guò)程進(jìn)行篩選，實(shí)驗(yàn)證明采用液質(zhì)方法測(cè)定化妝品中硝基咪唑類(lèi)方法可行，達(dá)到現(xiàn)有國(guó)內(nèi)外相關(guān)法規(guī)的樣品檢測(cè)要求。

總之，液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在硝基咪唑類(lèi)藥物質(zhì)量控制、指紋圖譜、結(jié)構(gòu)分析及痕量分析等起著重要的作用。對(duì)評(píng)價(jià)硝基咪唑類(lèi)藥物制劑的質(zhì)量、代謝規(guī)律、藥物相互作用、安全性及非法添加使用的檢出起著重要作用。

1.5 其他檢測(cè)方法 目前，硝基咪唑類(lèi)藥品檢測(cè)方法還有氣相色譜法[17]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用[18]、化學(xué)發(fā)光法（流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法）[19-20]、電化學(xué)方法（銅-金屬有機(jī)框架物修飾電極）[21]等檢測(cè)方法，由于氣相色譜法對(duì)于某些成分需要進(jìn)行衍生化，不適于直接測(cè)定樣品；另外電化學(xué)方法方法復(fù)雜耗時(shí)，故也應(yīng)用較少。

2 展望

藥代動(dòng)力學(xué)是動(dòng)力學(xué)原理用于藥物的一門(mén)邊緣和交叉學(xué)科，對(duì)闡明藥物體內(nèi)作用機(jī)制、藥效或者藥物毒性大小的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究起著重要作用，為硝基咪唑類(lèi)藥物臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。目前有關(guān)硝基咪唑類(lèi)藥物的體內(nèi)外分析方法已經(jīng)取得顯著進(jìn)展，應(yīng)用于結(jié)腸定位片、緩控釋透皮給藥制劑等新劑型，體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)和釋藥規(guī)律研究，使其用藥達(dá)到高效、安全及其質(zhì)量可控目的。本文針對(duì)硝基咪唑類(lèi)藥物各種分析檢測(cè)方法及其應(yīng)用的研究，為開(kāi)展硝基咪唑類(lèi)原料、食品、化妝品的研究與應(yīng)用提供檢測(cè)思路與技術(shù)。尤其是高效液相色譜技術(shù)及液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)廣泛應(yīng)用，彌補(bǔ)滴定法及UV法的不足，提高檢測(cè)范圍、靈敏度及分離能力。而滴定法及UV法多用于硝基咪唑類(lèi)原料藥及其制劑的常規(guī)分析，有著操作簡(jiǎn)單、快捷等優(yōu)點(diǎn)。因此，應(yīng)該注重依據(jù)此類(lèi)藥物具體研究和檢測(cè)目標(biāo)設(shè)計(jì)選擇適宜的分析方法和儀器，才能達(dá)到安全、高效、便捷、低成本的檢測(cè)目的。