(臨沂市中醫(yī)醫(yī)院，山東 臨沂 276000)

目前，免疫熒光法已廣泛應用于各類病毒、細菌的檢測，具有較高的特異性和敏感性，且檢驗速度快?，F(xiàn)將其應用于病毒種類的快速鑒別體會報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 檢測對象為2017年1月-2018年12月本院收治的200名上呼吸道感染患者，其中男130例，女70例；年齡3～78歲，平均(56.3±2.7)歲；感染部位：喉部40例，咽部78例，鼻部95例；并發(fā)癥：急性的心肌炎15例，腎炎12人例。

1.2方法

1.2.1試劑 病毒檢測試劑盒均采用了美國DHI公司產品，涵蓋了熒光標志抗體、單克隆抗體形式的試劑盒，還有針對腺病毒、流感病毒以及副流感病毒等多種病毒的試劑盒，共計7種。

1.2.2檢測方式 標本的收集和處理：首先，借助負壓吸引器對患者鼻、喉、咽等部位的分泌物進行提取，通常2～3 ml便可，置于無菌生理鹽水之中。其次，對提取物進行反復吹打后置于離心管中。第三，以500 r/min離心8 min，棄去上清液，用磷酸鹽緩沖液對沉淀物進行洗滌并混勻，共洗滌3次，用0.5～1 ml、0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖鹽溶液將最后一次離心的沉淀物溶解，并吹打成細胞懸液。將25 μl細胞懸液點入玻片點樣孔中，對點樣孔進行風干，并用冷丙酮進行10 min的固定。

熒光染色：首先，于對照玻片樣孔對應的細胞上滴加1滴相匹配的熒光抗體，約20 μl，并將其置于37℃保濕盒中進行30 min的孵育。將1-7號樣孔中滴加相匹配的熒光標志抗體作為陰性對照；將單克隆抗體作為陽性對照；腺病毒、流感病毒等多種病毒試劑盒作為樣品孔。其次，用洗滌液對細胞進行多次洗滌，然后再用蒸餾水實施洗滌，洗滌時間1 min。第三，待蒸餾水充分風干后，通過玻片孔滴加封閉液，并蓋好蓋玻片，隨后借助熒光顯微鏡進行觀察。

1.3診斷原理和判斷依據(jù) 診斷原理：如果單克隆抗體(已經(jīng)被熒光標志)和對應抗原進行結合，則會構成復合物，借助熒光顯微鏡可以觀察到綠色熒光；若沒有被染色，便會被Evans藍染成紅色。判斷依據(jù)：若出現(xiàn)綠色熒光則表示為陽性，若沒有熒光則表示為陰性；若顯微鏡放大至200倍時，觀察到超過2個熒光細胞便可斷定表針檢測是陽性。

2 結果

200例患者中，175例檢測出病毒，其中呼吸道合胞病毒25例(占14.29%)，腺病毒50例(占28.57%)，副流感病毒1 12例(占6.86%)，副流感病毒2 11例(占6.26%)，副流感病毒3 9例(占5.14%)，流感病毒A 38例(占21.71%)，流感病毒B 30例(占17.14%)。

3 討論

對于微生物的常規(guī)檢驗需要借助多層面綜合指標，部分常規(guī)檢驗能夠依靠生化反應來排除部分非病原性微生物，若此類非病原性微生物在形態(tài)層面與病原微生物較為相似，則容易發(fā)生混淆。因此，必須借助快速分離，同時需要于試驗時添加別的判定指標。

免疫熒光檢測是臨床常用的方法，現(xiàn)已向著自動化、器械化方向發(fā)展，如可借助脈沖激光光源、纖維熒光光度計或者是微型電腦等結合進行檢測[1]。因為熒光抗體并不會使其生長繁殖遭受影響，因此待孵育一段時間后除了要對其特異性進行判定外，還應選出“熒光菌球”來作鑒定試驗[2-3]。此外，借助流式分析分離器(FACS)，能夠快速分離1000～5000個/s，從而為后續(xù)鑒定奠定基礎。但以免疫熒光行定量分析通常較為薄弱，若僅依靠目測對其特異性熒光進行估定并不可取[4]。通常借助熒光顯微鏡可以對免疫熒光標本帶展開自動掃描，速度能夠達到400步/s，距離則是0.25步。同時熒光信息可利用光電倍增管得到放大進而輸入到圖像識別儀當中來進行參數(shù)測定分析，如對微粒周長、圖形或者是熒光光度[5-6]。本研究用免疫熒光法對上呼吸道感染患者的分泌物進行檢測，通過對分泌物提取細胞，讓細胞標本和相匹配的抗體間進行抗原抗體反應，來辨別相應病毒種類，結果十分準確并且較為快速。同時，此方式僅需要在2h內借助熒光顯微鏡、試劑盒等便可對病毒種類等展開快速鑒別，該方式較為簡單并且十分廉價。

總之，推動免疫熒光技術應用至微生物的快速檢驗當中，即便有些操作仍伴有部分問題，但相較于傳統(tǒng)形式而言，該技術優(yōu)勢顯著，隨著其不斷完善發(fā)展，將具備理想的應用價值。