余廣煒 劉青 吳文偉

[摘要] 目的 探討hURAT1（T6092C）基因多態(tài)性對(duì)高血壓心衰合并高尿酸血癥患者服用氯沙坦療效的影響。方法 方便選取2014年1月—2018年8月該院急診科收治的高血壓性心臟病、心功能不全合并高尿酸血癥患者146例為研究對(duì)象，應(yīng)用多聚酶鏈-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）方法檢測(cè)146例患者的hURAT1（T6092C）基因多態(tài)性，同時(shí)觀察不同基因組服用氯沙坦后尿酸值下降幅度的差異。結(jié)果 患者TT、TC、CC 3組基因型服用氯沙坦后尿酸值下降幅度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），TT基因型個(gè)體血尿酸下降幅度為（132.3±62.7）μmol/L，高于TC（7.3±12.4）μmol/L和CC基因型個(gè)體（2.0±13.9）μmol/L。結(jié)論 氯沙坦對(duì)hURAT1（T6092C）基因突變的高血壓性心臟病、心功能不全合并高尿酸血癥患者療效降低，應(yīng)該注意聯(lián)合用藥提高療效。

[關(guān)鍵詞] hURAT1;氯沙坦;療效;高血壓;高尿酸血癥;基因多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R589? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）11（b）-0004-04

[Abstract] Objective To investigate the effect of hURAT1 （T6092C） gene polymorphism on the efficacy of losartan in patients with hypertensive heart failure complicated with hyperuricemia. Methods Convenient selected a total of 146 patients with hypertensive heart disease， cardiac insufficiency and hyperuricemia admitted to the hospital from January 2014 to August 2018 were enrolled in the study. Polymerase-restriction fragment length polymorphism was used. The （PCR-RFLP） method was used to detect the hURAT1 （T6092C） gene polymorphism in 146 patients， and to observe the difference in the decrease in uric acid value after taking losartan in different genomes. Results There was a statistically significant difference in the decrease of uric acid value between patients with TT， TC and CC genotypes after taking losartan （P<0.05）， the decrease of blood uric acid in TT genotype was （132.3±62.7）μmol/L， higher than TC （7.3±12.4）μmol/L and CC genotype （2.0±13.9）μmol/L. Conclusion Losartan is effective in the treatment of hypertensive heart disease， cardiac insufficiency and hyperuricemia with hURAT1 （T6092C） gene mutation. It should be noted that the combination therapy can improve the curative effect.

[Key words] hURAT1; Losartan; Efficacy; Hypertension; Hyperuricemia; Genetic polymorphism

近年來(lái)，較多研究顯示，血尿酸水平的升高是引發(fā)心血管疾病的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素，且其與血脂異常、肥胖癥、高血壓的發(fā)生有關(guān)。高血壓所致高血壓性心臟病及最終發(fā)展至心功能衰竭是許多高血壓患者致死率的主要原因。該文研究了高血壓心衰合并高尿酸患者在基因多態(tài)性層面對(duì)氯沙坦降尿酸療效的影響，指導(dǎo)臨床進(jìn)一步在藥物基因組層面進(jìn)行該類患者尿酸水平的控制。該院方便選取2014年1月—2018年8月該院急診科收治的高血壓性心臟病、心功能不全合并高尿酸血癥患者146例為研究對(duì)象展開(kāi)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 對(duì)象與方法

1.1? 研究對(duì)象

該研究對(duì)象為方便選取該院收的高血壓心臟病、心功能不全合并高尿酸血癥患者，共146例。高血壓心臟病、心功能不全入選標(biāo)準(zhǔn)為根據(jù)中國(guó)高血壓指南及中國(guó)心衰指南要求，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：成人：舒張壓≥95 mmHg，收縮壓≥160 mmHg，臨界高血壓：90 mmHg<舒張壓<95 mmHg，或140 mmHg<收縮壓<160 mmHg，同時(shí)符合心功能不全診斷標(biāo)準(zhǔn)（每例患者均行心臟彩超檢查，（LVEF<40%，NT-proBNP>125 ng/L），并符合高尿酸血癥入選標(biāo)準(zhǔn)。該研究所選病例均經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均曾經(jīng)口服或間斷口服過(guò)該藥物，均知情同意。

1.2? 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

①利用PCR-RFLP方法建立hURAT1（T6092C）基因分型體系。hurat1 T6092C基因引物根據(jù)Jean-Sebastien Hulot等文獻(xiàn)設(shè)計(jì)上游引物：3-CCAGAACGAAAGTCGGTA-5，由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成下游引物：5-ACAGCATCCCAACCACAATC-3。酶切位點(diǎn)應(yīng)用Restrictin Enzyme Site Mapper version 3 軟件查找。酶切后酶切產(chǎn)物在3%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外光下觀察結(jié)果：PCR擴(kuò)增片段總長(zhǎng)度為539 bp，含CC等位基因的突變型純合子凝膠電泳僅539 bp一條帶;含TT等位基因的野生型凝膠電泳顯示357 bp和182 bp兩條帶;而含TC等位基因的突變型雜合子則顯示539 bp、357 bp和182 bp 3條帶。

②測(cè)序驗(yàn)證。選取所分型的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物樣本50 μL送至英駿生物公司（中國(guó)上海）進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

③分組治療。各基因型患者均口服氯沙坦片（50 mg，H20130409）10～14 d（50 mg/d）。

1.3? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)性檢驗(yàn)方法采用K-S檢驗(yàn)法（Kolmogorov-Smirnov Test），并行方差齊性Levene檢驗(yàn)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，若四格表有格子1≤T<5，則應(yīng)用Fisher精確檢驗(yàn)進(jìn)行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? Hardy Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)

146例高尿酸血癥合并高血壓患者中，SLC22A12 T6092C分別經(jīng)Hardy Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)軟件檢驗(yàn)基因型分布頻率觀測(cè)值與預(yù)計(jì)值之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），與Hardy-Weinberg遺傳平衡相符合，說(shuō)明樣本具有一定的代表性，均來(lái)自一個(gè)處于隨機(jī)婚配、較大的平衡狀態(tài)的群體。

2.2? 高尿酸血癥合并高血壓患者組用藥前不同基因型臨床資料的比較

參與實(shí)驗(yàn)的146例高尿酸血癥合并高血壓性心臟病、心功能不全患者治療前的基因分型、一般情況及實(shí)驗(yàn)分組見(jiàn)表1。

2.3? 高尿酸血癥合并原發(fā)性高血壓組服用氯沙坦前后3組基因型間尿酸測(cè)定值比較

氯沙坦治療前及10～14 d后尿酸測(cè)定值比較，在SLC22A12 TT野生型個(gè)體治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），在SLC22A12? TC突變型雜合子個(gè)體治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在SLC22A12? CC突變型純合子個(gè)體治療前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.4? 服用氯沙坦后3組基因型間尿酸測(cè)定值下降幅度比較

氯沙坦治療10～14 d后尿酸測(cè)定值下降幅度比較，TT、TC、CC 3組基因型個(gè)體尿酸下降幅度分別為（132.3±62.7）μmol/L、（7.3±12.4）μmol/L、（2.0±13.9）μmol/L，3組之間方差分析比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），兩兩比較顯示，在SLC22A12? TT野生型個(gè)體下降幅度較SLC22A12? TC突變型純合子個(gè)體明顯（P<0.01），在SLC22A12 TC突變型雜合子個(gè)體較SLC22A12? CC突變型純合子個(gè)體明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3? 討論

人尿酸鹽陰離子交換器（hURAT1）是由SLC22A12基因所編碼的，SLC22A12基因主要定位在11q13，其cDNA編碼區(qū)長(zhǎng)1 659 bp，全長(zhǎng)2 642 bp，含有9個(gè)內(nèi)含子和10個(gè)外顯子，由其編碼的氨基酸共555個(gè)[1]。hURAT1通過(guò)與少數(shù)無(wú)極陰離子和多種單價(jià)的有機(jī)陰離子交換來(lái)完成對(duì)尿酸的少量分泌及重吸收，其主要是重吸收在腎近端小管的尿酸，進(jìn)而對(duì)血清中尿酸濃度發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，是血清中尿酸水平達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡[2]。

尿酸在人類血清中的濃度主要是經(jīng)過(guò)近端腎小管的重吸收來(lái)平衡的[3]。因此hURAT1對(duì)于調(diào)節(jié)人體血尿酸水平發(fā)揮著重要作用。hURAT1基因突變或者多態(tài)與高尿酸血癥的發(fā)生存在相關(guān)性，Hamada 等[4]研究發(fā)現(xiàn)在高血壓患者中hURAT1 的一些功能性突變比如G269A/C1429A/ G774A 會(huì)消除氯沙坦的降尿酸作用，其中TT基因型個(gè)體血尿酸下降幅度為（130.3±65.3）μmol/L， TC（6.8±11.5）μmol/L和CC基因型個(gè)體（2.0±12.8）μmol/L而hURAT1 未突變患者仍能降低血尿酸水平，因此該方面已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)。與該次研究TT基因型個(gè)體血尿酸下降幅度為（132.3±62.7）μmol/L，高于TC（7.3±12.4）μmol/L和CC基因型個(gè)體（2.0±13.9）μmol/L相似，患者TT、TC、CC 3組基因型服用氯沙坦后尿酸值下降幅度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism， SNP）的檢測(cè)方法多種多樣，如等位特異性雜交，等位特異性PCR，PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP），PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCR-RFLP）和直接測(cè)序等[5]。該研究采用PCR-RFLP方法進(jìn)行基因分型，每一個(gè)樣本兩次的PCR-RFLP分析結(jié)果均相同，并且與測(cè)序的結(jié)果相吻合，說(shuō)明所有方法均有很好的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

藥物基因組學(xué)主要是通過(guò)應(yīng)用已知的基因組學(xué)理論，來(lái)分析遺傳因素與藥物反應(yīng)的相關(guān)性，或者可以說(shuō)是以藥物安全性和藥物效應(yīng)作為主要研究目標(biāo)，來(lái)分析藥物學(xué)差異和藥物動(dòng)力學(xué)的基因特征，以及因基因變異而對(duì)不同個(gè)體對(duì)藥物所作出的不同反應(yīng)，其主要包括基因組學(xué)（genemics）與遺傳藥理學(xué)（phanacogenetics）[6-7]。藥物基因組學(xué)的研究?jī)?nèi)容和基礎(chǔ)是基因多態(tài)性。藥物代謝酶多態(tài)性主要是因在同一個(gè)基因位點(diǎn)上存在多個(gè)等位基因所引發(fā)的，其多態(tài)性決定藥物代謝酶活性和表型多態(tài)性，并呈現(xiàn)基因劑量-藥效的關(guān)系，導(dǎo)致不同的個(gè)體發(fā)生不同的藥物代謝反應(yīng)，是喪失或降低藥效及產(chǎn)生藥物不良反應(yīng)的主要原因之一。大多數(shù)藥物能與其特異性蛋白發(fā)生相互作用而產(chǎn)生藥物效應(yīng)，藥物作用靶點(diǎn)的基因多態(tài)性導(dǎo)致靶蛋白對(duì)特定藥物存在不同的親和力，這是產(chǎn)生藥物產(chǎn)生不同療效的原因之一[8-10]。該研究通過(guò)高血壓心衰合并高尿酸患者在基因多態(tài)性層面對(duì)氯沙坦降尿酸療效的影響進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，治療后，高尿酸血癥合并原發(fā)性高血壓組服用氯沙坦前后3組基因型間尿酸測(cè)定值均較治療前降低，且治療后SLC22A12? CC突變型純合子個(gè)體的尿酸測(cè)定值明顯高于SLC22A12? TC突變型雜合子個(gè)體、SLC22A12 TT野生型個(gè)體，SLC22A12 TT野生型個(gè)體尿酸水平下降幅度明顯高于SLC22A12? CC突變型純合子個(gè)體、SLC22A12? TC突變型雜合子個(gè)體，說(shuō)明不同基因型患者發(fā)熱療效不同，與文獻(xiàn)報(bào)道相符[11]，氯沙坦對(duì)基因型為SLC22A12 TT野生型個(gè)體效果更顯著。國(guó)內(nèi)有利用患者及健康志愿者進(jìn)行的臨床研究表明，服用氯沙坦后，突變基因型患者（TC/CC）的Ur和Cr的降低水平均明顯低于TT基因型患者（P<0.05），并且TC和CC型患者的Ur降低幅度也明顯低于TT基因型患者（P <0.05），URAT1基因6092T/C遺傳變異影響氯沙坦的降尿酸療效，并且可能是氯沙坦降尿酸潛在的遺傳靶點(diǎn)[12]。藥物基因組學(xué)主要是研究基因突變與藥物安全性和療效之間的關(guān)系，及其在基因水平的影響。研究藥物反應(yīng)多態(tài)性與等位基因多藥性之間的相關(guān)性，主要是為了探討如何預(yù)測(cè)個(gè)體的藥物反應(yīng)及如何降低研發(fā)成本、提高藥物研發(fā)的特異性[13]。因此，藥物基因組是以藥物安全性和藥物效應(yīng)為目標(biāo)，來(lái)研究個(gè)體間藥物效應(yīng)的差異，在分子水平上對(duì)藥物作用靶位、藥物療效、毒副作用、作用模式進(jìn)一步證明和闡述。

綜上所述，氯沙坦對(duì)hURAT1（T6092C）基因突變的高血壓性心臟病、心功能不全合并高尿酸血癥患者療效降低，應(yīng)該注意聯(lián)合用藥提高療效。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 耿春梅，郭瑞臣.藥物基因組學(xué)在新藥臨床試驗(yàn)及個(gè)體化用藥中的應(yīng)用[J].藥學(xué)進(jìn)展，2015，39（1I）：803-809.

[2]? 王曉躍，鄧運(yùn)明.hURAT1基因多態(tài)性與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎濕熱證型的相關(guān)性研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014（1）：38-41.

[3]? 劉正奇，鐘琴.苗藥痛風(fēng)停湯對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞hURAT、 hURAT1基因表達(dá)的影響[J].湖南中醫(yī)雜志，2016，32（2）：167-169.

[4]? Hamada T，Ichida K，Hosoyamada M，et al. Uricosuric action of losartan via the inhibition of urate transporter1（URAT 1） in hypertensive patients[J].Am J Hypertens，2008，21（10）：1157-1162.

[5]? 黃旭慧，孫紅，蔡加琴，等.高尿酸合并高血壓患者URAT1 6092（T/C）基因多態(tài)性對(duì)氯沙坦降尿酸療效的影響[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)雜志，2015， 20（4）：435-440.

[6]? 黃亞威，楊昂.雙退火溫度PCR擴(kuò)增DNA[J].微生物學(xué)報(bào)2017， 57（8）1262-1269.

[7]? Shima Y，Teruya K，Ohta H. Association between intronic SNP in urate-anion exchanger gene，SLC22A12，and serum uric acid levels in Japanese[J].Life Sci，2006，79（23） ：2234-2237.

[8]? 謝潘潘，胡欣，史愛(ài)欣.藥物基因組學(xué)應(yīng)用于藥物I期臨床試驗(yàn)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2014，30（3）：235-237.

[9]? 時(shí)晉麗.藥物基因組學(xué)在臨床應(yīng)用的影響因素及思考[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2017， 27（32）：330-331

[10]? 孫雪林，陳重建，施紅.藥物基因組學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2017，36（12）：1370-1374.

[11]? 倪偉建，方焱，張善堂.基于藥物基因組學(xué)與血藥濃度監(jiān)測(cè)指導(dǎo)的個(gè)體化用藥研究[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2018， 38（17）：1863-1868.

[12]? 劉博武.心力衰竭藥物基因組學(xué)的研究進(jìn)展[J].西南軍醫(yī)，2018，20（5）：529-533.

[13]? ?Hamada T，Hisatome I，Kinugasa Y，et al.Effect of the angiotensin II receptor antagonist losartan on uric acid and oxypurine metabolism in healthy subjects[J].Intern Med，2002，41（10） ： 793-797.

（收稿日期：2019-08-15）