丁林芬， 王海垠， 王德升，2， 謝章巧，2， 聶 偉，2， 宋流東?， 吳興德

（1. 昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 云南 昆明 650500； 2. 中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 云南 昆明 650201）

豨薟草為菊科植物豨薟Siegesbeckia orientalis L.、 腺梗豨薟S． pubescens Makino 或毛梗 豨薟S．glabrescens Makino 的干燥地上部分， 別名肥豬草、肥豬菜、 粘蒼子等， 其味辛、 苦， 性寒， 歸肝、 腎經(jīng)， 具有祛風(fēng)濕、 利關(guān)節(jié)、 解毒的作用[1］。 毛梗豨薟作為其重要基源植物， 廣泛分布于浙江、 福建、 安徽、 江西、 湖北、 湖南、 四川、 廣東、 云南等省， 大多生長(zhǎng)于路邊、 曠野荒草地、 山坡灌叢中， 海拔300～1 000 m[2］， 具有抗腫瘤、 抗菌、 抗過(guò)敏等作用[3-6］， 但其化學(xué)成分研究?jī)H報(bào)道少數(shù)黃酮類和萜類[7-8］。 為明確毛梗豨薟藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)從其95%乙醇提取物中分離鑒定11 個(gè)化合物， 其中1～5 為二萜， 6 ～7 為倍半萜， 8 ～9 為黃酮， 10～11 為酚類化合物， 4 ～7、 10 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Avance Ⅲ500 MHz、 AM-400 MHz 核磁共振儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)， 德國(guó)Bruker 公司）； 1290 UPLC／6540 Q-TOF 液質(zhì)聯(lián)用儀 （美國(guó)Agilent 公司）；Auto-Spec Premier P776 三扇型雙聚焦磁質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters 公司）； 柱色譜硅膠 （100 ～200、200～300 目）、 GF254薄層色譜硅膠板（臨沂市海洋化工廠）。 甲醇、 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 丙酮等均為工業(yè)純； 顯色劑為10%H2SO4乙醇溶液。 毛梗豨薟于2015 年10 月購(gòu)自昆明市菊花園中藥材市場(chǎng)， 經(jīng)中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所成曉副研究員鑒定為正品， 標(biāo)本存放在昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院（20151001s）。

2 提取與分離

干燥毛梗豨薟10 kg 粉碎后， 95% 乙醇提?。?0 L×3 次， 每次2 d）， 合并提取液， 減壓濃縮后得浸膏1.3 kg， 分散于水中， 乙酸乙酯萃取3 次（每次3 L）， 回收溶劑后， 得乙酸乙酯部分450 g，經(jīng)硅膠柱層析 （100 ～200 目）， 用石油醚-丙酮（9 ∶1、 8 ∶2、 7 ∶3、 6 ∶4、 1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢測(cè)合并得Fr.1～Fr.7。 Fr.3 （3.5 g） 經(jīng)石油醚-乙酸乙酯（100 ∶1～20 ∶1） 梯度洗脫， TLC 檢測(cè)合并得Fr.3.1 ～Fr.3.7， Fr.3.3 （180 mg） 經(jīng)硅膠柱層析及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1）得化合物4 （11 mg）、 6 （15 mg）； Fr.4 （80 g） 經(jīng)中壓液相色譜（MCI 柱）， 用甲醇-水（40 ∶60 ～100 ∶0） 梯度洗脫， TLC 檢測(cè)合并得Fr.4.1 ～Fr.4.8， Fr.4.2 （190 mg） 經(jīng)硅膠柱層析 （石油醚-乙酸乙酯， 10 ∶1） 及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1） 得化合物2 （17 mg）、 7 （9 mg）、 10（12 mg）； Fr.4.5 （315 mg） 經(jīng)硅膠柱層析， 用氯仿-丙酮（200 ∶1）、 石油醚-異丙醇 （100 ∶1 ～20 ∶1） 洗脫， 得化合物3 （6 mg）、 8 （13 mg）、11 （9 mg）； Fr.6 （36 g） 經(jīng)硅膠柱層析， 用石油醚-乙酸乙酯（8.5 ∶1.5 ～6 ∶4） 洗脫， TLC 檢測(cè)合并得Fr.6.1 ～Fr.6.3， Fr.6.2 （650 mg） 經(jīng)硅膠柱層析， 用氯仿-丙酮（50 ∶1）、 石油醚-異丙醇（80 ∶1～20 ∶1） 洗脫， 得化合物1 （7 mg）、 5 （11 mg）、 9 （5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末， ESI-MS m／z： 361.2[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.68 （1H， m， H-2）， 5.04 （1H， s， H-14）， 3.21（1H， dd， J=9.0， 1.9 Hz， H-15）， 3.48 （1H， dd，J=11.0，9.0 Hz，H-16a），3.39 （1H，dd，J=11.0，1.9 Hz， H-16b）， 0.80 （3H， s， H-17）， 0.93 （3H，s， H-18）， 3.61 （2H， ABq， J=11.3 Hz， H-19），0.68 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：47.3 （C-1），64.2 （C-2），43.7 （C-3），39.3 （C-4）， 55.0 （C-5）， 21.9 （C-6）， 36.1 （C-7）， 138.4 （C-8），50.8 （C-9），40.3 （C-10），18.4（C-11）， 31.7 （C-12）， 37.1 （C-13）， 128.3 （C-14）， 75.9 （C-15）， 63.1 （C-16）， 22.5 （C-17），27.1 （C-18）， 64.7 （C-19）， 16.6 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9］ 一致， 鑒定為奇任醇。

化合物2： 白色粉末， ESI-MS m／z： 345.2[M＋Na］＋， 361.2 [M ＋K］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.24 （1H， dd， J=11.2， 4.7 Hz， H-3），5.10 （1H， s， H-14）， 3.58 （1H， d， J=9.1 Hz， H-15）， 3.71 （1H， d， J = 11.2 Hz， H-16a）， 3.51（1H， dd， J=11.2，9.1 Hz， H-16b），0.88 （3H， s，H-17），1.00 （3H，s，H-18），0.81 （3H，s，H-19），0.76 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3）δ：37.1 （C-1），27.6 （C-2），79.1 （C-3），38.9 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 35.9 （C-7）， 139.7（C-8）， 50.4 （C-9）， 38.1 （C-10）， 18.4 （C-11），31.6 （C-12）， 37.3 （C-13）， 127.4 （C-14）， 76.5（C-15）， 63.4 （C-16）， 23.2 （C-17）， 28.5 （C-18）， 14.8 （C-19）， 15.7 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10-11］ 一致， 鑒定為豨薟精醇。

化合物3： 白色粉末， ESI-MS m／z： 401.3[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.80（1H， m， H-2）， 5.05 （1H， s， H-14）， 3.98 （1H，t， J=7.1 Hz， H-15）， 3.87 （1H， t， J=7.1 Hz， H-16a）， 3.73 （1H， t， J = 7.1 Hz， H-16b）， 0.88（3H， s， H-17）， 1.03 （3H， s， H-18）， 3.68 （1H，d， J=11.4 Hz， H-19a），3.30 （1H， d， J=11.4 Hz，H-19b）， 0.78 （3H， s， H-20）， 1.38 （3H， s， H-22）， 1.32 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 47.9 （C-1）， 65.2 （C-2）， 44.1 （C-3），39.7 （C-4）， 55.1 （C-5）， 22.0 （C-6）， 36.2 （C-7）， 138.9 （C-8），50.5 （C-9），40.5 （C-10），18.5（C-11）， 31.9 （C-12）， 35.8 （C-13）， 127.5 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.3 （C-16）， 22.5 （C-17），27.3 （C-18）， 64.6 （C-19）， 17.0 （C-20）， 108.6（C-21）， 26.3 （C-22）， 25.3 （C-23）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12］ 一致， 鑒定為isopropylidenkirenol。

化合物4： 白色粉末， EI-MS m／z： 83 （30），101 （100）， 135 （31）， 261 （61）， 276 （52）， 316（25）， 362 （28） [M］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.26 （1H， dd， J=11.7， 4.0 Hz， H-3），5.06 （1H， s， H-14）， 4.02 （1H， t， J=7.2 Hz， H-15）， 3.89 （1H， t， J=7.2 Hz， H-16a）， 3.74 （1H，t， J=7.2 Hz， H-16b）， 0.90 （3H， s， H-17）， 1.01（3H， s， H-18）， 0.81 （3H， s， H-19）， 0.76 （3H，s， H-20）， 1.40 （3H， s， H-22）， 1.34 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3） δ： 37.1 （C-1），27.6 （C-2）， 79.1 （C-3）， 38.2 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 36.0 （C-7）， 139.7 （C-8）， 50.2（C-9）， 39.0 （C-10）， 18.2 （C-11）， 32.1 （C-12），35.9 （C-13）， 126.8 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.4（C-16）， 22.5 （C-17）， 28.5 （C-18）， 15.7 （C-19）， 14.9 （C-20）， 108.6 （C-21）， 26.3 （C-22），25.3 （C-23）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) [13］ 一致， 鑒定為3α， 15， 16-trihydroxy-ent-pimara-8 （14） -en-15，16-acetonide。

化合物5： 白色粉末， ESI-MS m／z： 335.2[M-H］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.69 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17a），3.57 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17b）， 1.22 （3H， s， H-18）， 1.14 （3H，s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：40.6 （C-1）， 19.0 （C-2）， 37.9 （C-3）， 43.5 （C-4）， 56.7 （C-5）， 22.1 （C-6）， 41.9 （C-7）， 44.6（C-8）， 55.7 （C-9）， 39.6 （C-10）， 18.5 （C-11），26.1 （C-12）， 45.0 （C-13）， 37.1 （C-14）， 52.6（C-15）， 81.7 （C-16）， 65.9 （C-17）， 29.7 （C-18）， 180.6 （C-19）， 15.4 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14］ 一致， 鑒定為16α， 17-dihydroxy-ent-kaura-19-oic acid。

化合物6： 白色粉末， ESI-MS m／z： 285.1[M＋Cl］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.83（1H， t， J=9.7 Hz， H-4）， 4.23 （1H， m， H-8），6.14 （1H， d， J=3.5 Hz， H-13a）， 5.44 （1H， d，J=3.5 Hz， H-13b）， 0.94 （3H， d， J=6.5 Hz， H-14）， 0.88 （3H， s， H-15）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 45.2 （C-1）， 25.6 （C-2）， 28.8 （C-3），83.9 （C-4）， 44.6 （C-5）， 38.1 （C-6）， 47.7 （C-7）， 81.7 （C-8），44.4 （C-9），30.3 （C-10），140.9（C-11）， 170.3 （C-12）， 119.6 （C-13）， 20.5 （C-14）， 17.5 （C-15）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) [15-16］ 一致，鑒定為2-desoxy-4-epi-pulchellin。

化合物7： 無(wú)色油狀物， ESI-MS m／z： 259.2[M ＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 5.52（1H， d， J=4.5 Hz， H-6），4.02 （2H， brs， H-11），1.26 （3H， s， H-13）， 0.88 （3H， d， J=6.4 Hz， H-14）， 0.91 （3H， d， J = 6.4 Hz， H-15）；13C-NMR（125 MHz， CDCl3） δ： 58.9 （C-1）， 34.6 （C-2），27.1 （C-3）， 56.1 （C-4）， 51.5 （C-5）， 132.9 （C-6）， 141.7 （C-7），24.9 （C-8），39.9 （C-9），213.7（C-10）， 67.2 （C-11）， 33.1 （C-12）， 24.7 （C-13）， 22.1 （C-14）， 19.9 （C-15）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17-18］ 一致， 鑒定為aphanamol Ⅰ。

化合物8： 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 315.1[M-H］-， 631.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3COCD3） δ： 6.23 （1H， d， J=1.6 Hz， H-6），6.46 （1H， d， J=1.6 Hz， H-8）， 7.67 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2′）， 6.97 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′），7.56 （1H， dd， J = 8.5， 1.9 Hz， H-6′）， 12.78（1H， s， 5-OH）， 3.84 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（125 MHz， CD3COCD3） δ： 156.7 （C-2）， 139.2（C-3）， 179.4 （C-4）， 163.1 （C-5）， 99.3 （C-6），164.9 （C-7）， 94.4 （C-8）， 157.8 （C-9）， 105.7（C-10）， 122.9 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 145.9 （C-3′）， 149.1 （C-4′）， 116.1 （C-5′）， 122.0 （C-6′），60.1 （3-OCH3）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19］ 一致， 鑒定為3-O-甲基槲皮素。

化合物9： 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 301.0[M-H］-， 603.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3OD） δ： 6.16 （1H， d， J=1.5 Hz， H-6）， 6.35（1H， s， H-8）， 7.72 （1H， d， J=1.5 Hz， H-2′），6.87 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′）， 7.61 （1H， dd，J= 8.5， 1.5 Hz， H-6′）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD） δ： 147.9 （C-2）， 137.2 （C-3）， 177.3 （C-4）， 162.4 （C-5），99.2 （C-6），165.5 （C-7），94.4（C-8）， 158.2 （C-9）， 104.8 （C-10）， 124.1 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 146.2 （C-3′）， 148.7 （C-4′），115.9 （C-5′）， 121.7 （C-6′）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20］一致， 鑒定為槲皮素。

化合物10： 無(wú)色油狀物， ESI-MS m／z： 151.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ：7.40 （1H，d， J=1.6 Hz， H-2）， 7.02 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.41 （1H， dd， J=8.5， 1.6 Hz， H-6）， 9.81（1H， s， H-7）， 3.94 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz， CDCl3） δ： 129.7 （C-1）， 108.8 （C-2），147.2 （C-3）， 151.8 （C-4）， 114.4 （C-5）， 127.6（C-6）， 191.0 （C-7）， 56.1 （3-OCH3）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21］ 一致， 鑒定為香草醛。

化合物11： 無(wú)色油狀物， ESI-MS m／z： 163.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CD3OD） δ： 7.44（2H， d，J=8.8 Hz，H-2，6），6.79 （2H，d，J=8.8 Hz， H-3， 5）， 7.57 （1H， d， J= 16.0 Hz， H-7），6.29 （1H， d， J = 16.0 Hz， H-8）；13C-NMR （100 MHz， CD3OD） δ：127.4 （C-1），130.9 （C-2，C-6），116.8 （C-3， C-5）， 161.0 （C-4）， 146.0 （C-7），116.5 （C-8）， 171.7 （-COOH）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22］一致， 鑒定為反式對(duì)羥基肉桂酸。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)從毛梗豨薟95% 乙醇提取物中分離得到11 個(gè)化合物， 包括5 個(gè)二萜（1 ～5）、 2 個(gè)倍半萜（6 ～7）、 2 個(gè)黃酮（8 ～9）、 2 個(gè)酚類（10 ～11）， 4～7、 10 為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。 化合物1、5 具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛及抗血栓作用[14，23-25］， 6 具有顯著抗炎活性[26］， 8 也具有一定抗炎鎮(zhèn)痛作用[3］， 這些活性成分為毛梗豨薟治療風(fēng)濕痹痛、筋骨無(wú)力、 腰膝酸軟、 四肢麻痹、 半身不遂、 風(fēng)疹濕瘡等病癥提供依據(jù)， 并可促進(jìn)其開(kāi)發(fā)利用。