植漢成，劉 翔，郭寶林，馮學(xué)鋒，葛 菲，郭佳琪，溫春梅

(1 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；2 江西中醫(yī)藥大學(xué)，南昌 330006；3 重慶市中藥研究院，重慶 400065；4 中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所，北京 100700)

柔毛淫羊藿(EpimediumpubescensMaxim.)為小檗科淫羊藿屬植物，1887年發(fā)表，以葉背面密被柔毛為特征，是中國淫羊藿屬植物中分布較為廣泛的物種，集中分布于四川、重慶和陜西南部，也分布于甘肅東南角[1]，柔毛淫羊藿也是常用中藥淫羊藿的主要物種來源。其近緣種星花淫羊藿(E.stellulatumStearn)為1993年發(fā)表的物種，與柔毛淫羊藿形態(tài)近似，但區(qū)別在于花的內(nèi)輪萼片比較大，小葉片為較寬的卵形[2]，特別是葉中幾乎不含有淫羊藿苷類成分[3]，分布于湖北十堰、陜西商洛。本課題組還發(fā)現(xiàn)分布于陜西鎮(zhèn)巴的一個類型，花形態(tài)極似柔毛淫羊藿，但小葉片小而卵圓，根狀莖細(xì)長橫走，暫定名為鎮(zhèn)巴淫羊藿(E.zhenbaensesp.nov.),以及分布于四川萬源的一個類型，花形態(tài)和小葉片形態(tài)似柔毛淫羊藿，但內(nèi)萼片粉紅色，葉背面為短伏毛，暫定名為萬源淫羊藿(E.wanyuanensesp.nov.)。

非腺毛是由植物表皮細(xì)胞分化而成、不具分泌功能的突起物，它廣泛存在于植物葉、莖、花及果實(shí)的表皮上，由單細(xì)胞或多細(xì)胞構(gòu)成，無頭部和柄部之分，頂端通常狹尖[4]。大部分淫羊藿屬植物葉背被非腺毛，研究表明淫羊藿屬植物非腺毛的特征對該屬植物分類、鑒別很有價值[5]。梁海銳等最早對淫羊藿屬植物的非腺毛研究發(fā)現(xiàn)，該屬植物不同物種非腺毛形態(tài)具有專屬性[6]。何順志等也印證了該觀點(diǎn)[7-8]。本課題組前期對淫羊藿屬植物非腺毛進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)不同物種葉背非腺毛的形態(tài)、頂細(xì)胞的長度、直徑、伸長細(xì)胞的有無、基部細(xì)胞數(shù)目、頂細(xì)胞與相鄰細(xì)胞的銜接方式等具有特征性，總結(jié)了淫羊藿屬非腺毛可以分為5種主要類型，并推測了非腺毛特征的演化趨勢[9]。課題組又針對柔毛淫羊藿14個居群及其近緣種星花淫羊藿1個居群的非腺毛和ISSR分子標(biāo)記開展了研究，依據(jù)每個居群具有的非腺毛主流類型將非腺毛分為5類——長直毛、長卷曲毛、伏曲毛、擬短伏毛和長伏毛，并初步推測了長直毛-長卷曲毛-伏曲毛的演化趨勢[10]。

我們繼續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，柔毛淫羊藿葉背面的非腺毛是多種類型共存的，且類型間存在連續(xù)的變化關(guān)系，因此本研究基于原來的基礎(chǔ)，增加了更多分布區(qū)域的居群樣本，并將與柔毛淫羊藿相關(guān)的鎮(zhèn)巴淫羊藿(1個居群)和萬源淫羊藿(1個居群)納入研究，通過觀察每個居群所具有的各類非腺毛形態(tài)，以期進(jìn)一步闡明柔毛淫羊藿及近緣種所具有的非腺毛的形態(tài)特征及演化關(guān)系，并據(jù)此提供柔毛淫羊藿和幾個近緣種親緣關(guān)系的證據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

柔毛淫羊藿31個居群，星花淫羊藿3個居群，鎮(zhèn)巴淫羊藿1個居群和萬源淫羊藿1個居群，所有居群的分布點(diǎn)參見表1。每個居群采集10片以上的成年葉，硅膠快速干燥。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

OLYMPUS BX51型光學(xué)顯微鏡，DP70型CCD成像系統(tǒng)，無水乙醇、冰醋酸、甘油、H2O2、甲醛均為分析純試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1制片與觀察方法(1)葉表面片制備(刮去葉肉離析法)：將干燥葉放清水中泡至軟化后轉(zhuǎn)入FAA固定液中保存。取FAA浸泡葉片，在中部近中脈處切取約3 mm×6 mm 的小塊，刮去上表皮及葉肉組織，放入盛離析液(30%H2O2∶冰醋酸=1∶1)的燒杯中，60 ℃烘箱加熱約1～2 h，小葉塊透明后，醋酸甘油試液(50%冰醋酸∶甘油∶蒸餾水=1∶1∶1)封片。

表1 柔毛淫羊藿及近緣種樣品信息

(2)非腺毛片制備(刮取茸毛法，適用于非腺毛密被，表面片不易觀察的情況)：取干燥葉，在葉背中部近中脈處刮取非腺毛，置于載玻片上，醋酸甘油試液封片。

(3)觀察和記錄：光學(xué)顯微鏡觀察和拍照，并測量和記錄非腺毛特征(每個居群均取5枚葉片觀察)。

(4)圖片處理：用Photoshop軟件排版處理。

1.3.2數(shù)據(jù)測量統(tǒng)計與處理選取放大200倍非腺毛照片，先劃分非腺毛形態(tài)類型，然后每一類型取20根非腺毛，記錄頂細(xì)胞形狀、頂細(xì)胞與相鄰細(xì)胞銜接方式、基部細(xì)胞數(shù)和伸長細(xì)胞數(shù)，用Digimizer軟件測量非腺毛全長、頂細(xì)胞長度、頂細(xì)胞(中間)直徑和壁厚。選取放大100倍照片的1 μm2區(qū)域用Digimizer軟件統(tǒng)計非腺毛數(shù)量，共10個重復(fù)(每個居群取5枚葉片，每片2個區(qū)域)，計算得出單位面積非腺毛個數(shù)(個/mm2)。

2 觀察結(jié)果

2.1 柔毛淫羊藿及近緣種的非腺毛類型

柔毛淫羊藿及近緣種的多細(xì)胞非腺毛形態(tài)和結(jié)構(gòu)與以前研究結(jié)果一致[10]，由基部細(xì)胞(指非腺毛與表皮細(xì)胞相連接的薄壁細(xì)胞，一般扁小)和頂細(xì)胞(指末端的一個細(xì)胞，壁厚，頂端尖或偶鈍)構(gòu)成，部分多細(xì)胞毛有伸長細(xì)胞(在基部細(xì)胞和頂細(xì)胞之間，壁厚，一般比基部細(xì)胞長)；頂細(xì)胞是柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛的主要部分，大部分居群頂細(xì)胞長度占非腺毛總長90%以上；頂細(xì)胞特征變化(頂細(xì)胞形狀、頂細(xì)胞長、頂細(xì)胞占的比例、頂細(xì)胞直徑)、基部細(xì)胞數(shù)、伸長細(xì)胞有無及數(shù)量，以及頂細(xì)胞與相鄰細(xì)胞銜接方式存在多樣性。本研究在原來發(fā)現(xiàn)的5類非腺毛(長直毛、長卷曲毛、伏曲毛、擬短伏毛和長伏毛)的基礎(chǔ)上，新發(fā)現(xiàn)短伏毛和單細(xì)胞毛等兩類新的非腺毛，短伏毛基部細(xì)胞扁小，無伸長細(xì)胞，頂細(xì)胞一般梭形，頂細(xì)胞與基部細(xì)胞成一夾角，與箭葉淫羊藿[Epimediumsagittatum(Sieb. et Zucc.) Maxim.]中報道的非腺毛形態(tài)相似[11]，僅在萬源淫羊藿中發(fā)現(xiàn)；單細(xì)胞毛僅由1個細(xì)胞構(gòu)成，形狀平直或略彎曲，呈劍形或梭形，在25個居群中發(fā)現(xiàn)，這類毛在淫羊藿屬非腺毛中為首次發(fā)現(xiàn)。在詳細(xì)觀察和測量了各類非腺毛的形態(tài)和大小，又將直毛、曲毛、長伏毛區(qū)分出亞類，各類毛形態(tài)參見圖版Ⅰ。

2.1.1直毛(圖版Ⅰ，A1～A6) 長約50～900 μm，整個非腺毛平直，基部細(xì)胞一般短小(部分亞類向上有細(xì)胞較為伸長)，偶有伸長細(xì)胞，頂細(xì)胞與其他細(xì)胞直接連接，根據(jù)非腺毛長度、基部細(xì)胞數(shù)和頂細(xì)胞形狀，又細(xì)分為6個亞類(A1～A4為長直毛，長度常大于300 μm，頂細(xì)胞常呈劍形；A5～A6為短直毛，長度常小于300 μm，頂細(xì)胞常呈梭形)，其中A1類有1～2個伸長細(xì)胞，其他亞類無伸長細(xì)胞。A4類為最常見類型直毛。具體特征為：A1、長約300～500 μm，基部細(xì)胞3～9個，短小或向上有細(xì)胞略伸長，伸長細(xì)胞1～2個；A2、長約300～500 μm，基部細(xì)胞3～9個；短小或向上有細(xì)胞略伸長；A3、長約300～600 μm，基部細(xì)胞4～7個，短?。?A4、長約300～900 μm，基部細(xì)胞1～4個，短小或扁?。籄5、長約200～300 μm，基部細(xì)胞1～3個，短小或扁?。籄6、長約50～200 μm，基部細(xì)胞1～2個，扁小。

2.1.2曲毛(圖版Ⅰ，B1～B5) 長約150～1 500 μm，頂細(xì)胞波狀彎曲或卷曲狀，基部細(xì)胞一般短小(部分亞類向上有細(xì)胞較為伸長)，偶有伸長細(xì)胞；頂細(xì)胞與相鄰細(xì)胞直接連接，偶鈍角連接，根據(jù)非腺毛長度、基部細(xì)胞數(shù)、有無伸長細(xì)胞和頂細(xì)胞卷曲程度，又細(xì)分為5個亞類(B1～B4為彎曲毛，頂細(xì)胞波狀彎曲；B5為長卷曲毛，頂細(xì)胞長卷曲狀)，其中B1類有1～3個伸長細(xì)胞，其他亞類無伸長細(xì)胞。另外，B5有的頂細(xì)胞與基部細(xì)胞鈍角連接。B4、B5類為最常見類型曲毛。具體特征為：B1、長約250～500 μm，基部細(xì)胞4～10個，短小或向上有細(xì)胞略伸長，伸長細(xì)胞 1～3個，偶4～5個； B2、長約250～500 μm，基部細(xì)胞1～4個，短小或向上有細(xì)胞略伸長；B3、長約250～500 μm，基部細(xì)胞3～6個，短小；B4、長約150～700 μm，基部細(xì)胞1～3個，短??；B5、長約300～1500 μm，基部細(xì)胞1～3個，短小。

2.1.3伏曲毛(圖版Ⅰ，C) 長約520～1 100 μm，基部細(xì)胞1～3個，頂細(xì)胞波狀彎曲或卷曲狀，頂細(xì)胞與相鄰的基部細(xì)胞偏斜T型/T型(呈直角)連接。

2.1.4長伏毛(圖版Ⅰ，D1a～D2b) 約230～630 μm，基部細(xì)胞1～15個，細(xì)胞由基部向上漸長，頂細(xì)胞平直或彎曲，頂細(xì)胞與相鄰細(xì)胞直角或鈍角連接，有伸長細(xì)胞的為D1類(又細(xì)分為頂細(xì)胞平直為D1a類，彎曲為D1b類)，無伸長細(xì)胞為D2類(又細(xì)分為頂細(xì)胞平直為D2a類，彎曲為D2b類)；D1a和D2a稱為長伏直毛，D1b和D2b稱為長伏曲毛。其中D2a為常見類型。

2.1.5擬短伏毛(圖版Ⅰ，E) 約140～250 μm，基部細(xì)胞1～2個，扁小，頂細(xì)胞與基部細(xì)胞直接連接，但二者銜接處，頂細(xì)胞呈直角彎曲而形成假T型。

2.1.6短伏毛(圖版Ⅰ，F(xiàn)) 約170～280 μm，基部細(xì)胞1～4個，扁小，頂細(xì)胞與基部細(xì)胞直角或鈍角連接，頂細(xì)胞平直呈劍形或梭形。

2.1.7單細(xì)胞毛(圖版Ⅰ，G) 由一個細(xì)胞組成，形狀平直、彎曲或卷曲，呈劍形或梭形。

本研究還觀察到有13個居群葉背存在乳突，乳突結(jié)構(gòu)不同于非腺毛，是表皮細(xì)胞的細(xì)胞壁向外凸起形成，呈球形乳突，在淫羊藿屬其他植物中也有發(fā)現(xiàn)[12-13]。

2.2 柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛演化分析

基于在柔毛淫羊藿及近緣種中發(fā)現(xiàn)的非腺毛形態(tài)進(jìn)行演化分析，依據(jù)以下原則：

①普遍存在性狀為原始特征：長直毛和彎曲毛為柔毛淫羊藿及近緣種普遍存在，可以認(rèn)為是原始的特征，因此演化關(guān)系為長直毛在先，短直毛在后，彎曲毛在先，長卷曲狀毛在后。

②與原始類群相關(guān)為原始特征：淫羊藿屬的原始類群的毛為多細(xì)胞長毛，頂細(xì)胞和基部細(xì)胞為直接相接，因此基部細(xì)胞多而伸長，以及具有伸長細(xì)胞的非腺毛為原始特征；不具伸長細(xì)胞，基部細(xì)胞變短變少為演化特征。

③特化特征為次生特征：非腺毛頂細(xì)胞膨大、細(xì)胞壁格外加厚者，頂細(xì)胞異常彎曲、頂部細(xì)胞與相鄰細(xì)胞出現(xiàn)夾角以及呈現(xiàn)T型/偏斜T型連接均為演化特征。

根據(jù)以上演化推斷，以及同一個居群(同一片葉片)有多種類型而不同居群常有共同毛類型的現(xiàn)象。我們推斷出柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛的演化順序見圖1(其中實(shí)線推斷可能性較大)。

2.3 各個居群非腺毛類型構(gòu)成及形態(tài)特征

36個居群葉片背面非腺毛密度、類型構(gòu)成，以及每個類型的非腺毛全長、頂細(xì)胞長、頂細(xì)胞直徑、頂細(xì)胞壁厚、基部細(xì)胞數(shù)、伸長細(xì)胞數(shù)、頂細(xì)胞和下部細(xì)胞連接方式等非腺毛形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)匯總于表2。由表2可知，21個居群以直毛A類為主要類型，占所有居群的58%，以曲毛B類為主要類型的有7個居群，以長伏毛D類為主要類型有6個居群，以擬短伏毛E類為主要類型的只有1個居群，以短伏毛F類為主要類型的也只有1個居群，伏曲毛C類只存在于一個以B類為主要類型的居群中。因所有居群均有直毛A類型非腺毛，說明直毛A類為柔毛淫羊藿及近緣種的核心類型非腺毛。而E類和F類各自只存在于一個居群中，應(yīng)屬于特化類型。

圖1 柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛演化關(guān)系Fig.1 The evolution relationship of non-glandular hairs in E. pubescens and related species

依據(jù)表2中各個居群的非腺毛類型構(gòu)成，進(jìn)行居群歸類，歸類原則為：以A類直毛為主的居群，編為直毛群A群,以B類曲毛為主的居群，編為曲毛群B群, 以D類長伏毛為主的類群編為D群，以E類擬短伏毛為主的居群編為E0群，以F類短伏毛為主的居群編為F0群。再依具體居群非腺毛類型構(gòu)成，分為AⅠ、AⅡ、AⅢ群等，如AⅠ群以A4型毛為主要類型毛，同時存在A3、B4類型毛。柔毛淫羊藿及近緣種各居群按照非腺毛的分類見表3。其中以AⅡ群為最主要居群類型，包括11個居群；其次是AⅠ、BⅢ和DⅢ群，分別包括4個居群；再次是AⅢ群，包括3個居群；AⅣ群，包括2個居群；其余則均只有1個居群。

2.4 柔毛淫羊藿及近緣種各居群非腺毛關(guān)聯(lián)與演化分析

依據(jù)表3的居群非腺毛類型劃分，我們給出了不同類型居群的演化路線(圖2)：

1)直毛群：AⅠ→AⅡ→AⅢ→AⅣ→AⅤ。AⅡ群為主要類型，AⅠ與AⅡ群不同僅在于，AⅠ群存在有較為原始的A3類非腺毛。2)曲毛群：BⅠ→BⅡ→BⅢ→BⅣ。BⅢ群為主要類型，BⅠ和BⅡ群均是以較為原始的B4類毛為主，而BⅠ群則又存在更為原始的B3類(及A3類)曲毛。3)長伏毛群：DⅠ→DⅡ→DⅢ，DⅢ群為主要類型，DⅠ和DⅡ群以較為原始的D1a類毛為主，DⅠ更是不存在D2a類毛。4)直毛群-曲毛群：直毛群中具有少量曲毛中的彎曲毛，曲毛群中具有少量直毛類毛，從共有性上推測存在AⅠ→BⅠ，AⅡ→BⅡ或AⅡ→BⅢ或AⅡ→BⅣ的關(guān)系。5)短直毛-短伏毛和擬短伏毛特化群： AⅤ→E0，AⅤ→F0，E0群、F0群與AⅤ群發(fā)生聯(lián)系，是他們均具有AⅤ的主流毛類型A5和A6。

A1、A2、B1、B2類非腺毛并未在任何一個居群中作為主要類別的非腺毛存在，也未存在于直毛群和曲毛群中，而在長伏毛群D群中為次要類型毛。此外，在AⅠ群中，非腺毛A3與A2較相似，無伸長細(xì)胞，基部細(xì)胞較多，只是A3基部細(xì)胞略短?。辉贐Ⅰ群中，非腺毛B3與B2也較相似。我們認(rèn)為這4種非腺毛可能與直毛群、曲毛群和伏毛群是有聯(lián)系的。

表3 基于非腺毛類型對柔毛淫羊藿及近緣種36個居群分類表

注：具下劃線的非腺毛類型為該居群的主要類型

Not: The underlined types represent the main type of non-glandular hair in this population

圖2 柔毛淫羊藿及近緣種基于非腺毛形態(tài)的居群演化關(guān)系圖Fig.2 Population-relation graph of E. pubescens and related species based on non-glandular types

2.5 柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛形態(tài)與地理分布相關(guān)性分析

將各個居群按照非腺毛構(gòu)成定義的名稱填入地理分布圖中(圖3)，由圖3可看出，直毛群A分布在柔毛淫羊藿的核心區(qū)域，其中較為演化的AⅣ和 AⅤ分布在較外區(qū)域；曲毛群B則在核心區(qū)外圍的北部、西部和南部，也可證實(shí)直毛群-曲毛群的演化關(guān)系；長伏毛群D分布為離核心區(qū)和曲毛群分布點(diǎn)較遠(yuǎn)的另一個區(qū)域，與直毛群可能存在一定的聯(lián)系，在長伏毛群內(nèi)，由于樣本比較少，DⅠ～DⅢ 的演化關(guān)系不甚明朗，有待進(jìn)一步研究。擬短伏毛群E0分布于直毛群中，可能為AⅤ直接演化而來；而短伏毛群F0形態(tài)離直毛群AⅤ的關(guān)系較近，但地理上與直毛群核心區(qū)域較遠(yuǎn)，因此還需要進(jìn)一步研究。

頂細(xì)胞和相鄰細(xì)胞的連接方式導(dǎo)致直接連接的直毛、曲毛和擬短伏毛，與直角/鈍角連接的長伏毛和短伏毛兩個大的類型群之間，在地理上是能區(qū)分的，其中陜西南鄭居群SXNZ(DⅢ)和四川南江居群SCNJ(AⅡ)為兩個類型的分界居群(均屬于柔毛淫羊藿)，值得進(jìn)一步研究兩類非腺毛毛分化的產(chǎn)生。具有BⅣ型非腺毛構(gòu)成的只有一個居群SCHY，與距離很近的SCYA居群的非腺毛構(gòu)成，多了C類伏曲毛(區(qū)別于B類毛特征在于其頂細(xì)胞和相鄰細(xì)胞的連接方式為T型/偏斜T型連接)，而連接方式在柔毛淫羊藿及近緣種的各居群中是不連續(xù)分布的，因此SCHY居群也有待研究。

圖3 36個居群非腺毛形態(tài)與地理分布相關(guān)性Fig.3 Correlation between non-glandular hair characteristics and geographical distribution of 36 populations

3 討 論

3.1 柔毛淫羊藿及其近緣種分類學(xué)關(guān)系

劉翔等基于花、花序、主要非腺毛類型和ISSR分析結(jié)果建議將星花淫羊藿處理為柔毛淫羊藿種下等級。本文基于居群多細(xì)胞非腺毛構(gòu)成以及地理分布，柔毛淫羊藿及近緣種各居群的關(guān)系得到了進(jìn)一步的闡明，其中星花淫羊藿的3個居群均為長伏毛群的DⅢ群，地理上位于東北側(cè)，但是與柔毛淫羊藿的陜西山陽居群形態(tài)地理上均具有聯(lián)系性，同意劉翔等觀點(diǎn)[10]。鎮(zhèn)巴淫羊藿和萬源淫羊藿地理上相距很近，但居群毛的構(gòu)成上，前者為DⅠ群，后者為F0群(二者雖然屬于頂細(xì)胞和相鄰細(xì)胞的連接方式上為T型/偏斜T型連接，但基部細(xì)胞組成和形態(tài)差異很大)，周圍無A群和其他D群(F0和AⅤ雖然形態(tài)上有聯(lián)系，但地理上也沒有連接點(diǎn))相關(guān)的聯(lián)系居群樣本，因此需要增加鄰近地區(qū)的其他居群(特別是屬于柔毛淫羊藿的居群)的研究才能進(jìn)一步闡明他們和柔毛淫羊藿的關(guān)系。

3.2 單細(xì)胞毛和乳突的分類學(xué)價值探討

本研究觀察到柔毛淫羊藿及其近緣種共27個居群中具有單細(xì)胞毛，占本研究中居群總數(shù)的75%，直毛群(A群)21個居群中除SCCZ、SCJY1、SCQL2、SCDY 4個居群外，81.0%具有單細(xì)胞毛；曲毛群(B群)7個居群中僅SCPW3居群未看到單細(xì)胞毛，85.7%居群具有單細(xì)胞毛；而長伏毛群(D群)6個居群中有4個居群(SXZB、SXSY、HBSY、SXSN)無單細(xì)胞毛，僅33.3%居群具有單細(xì)胞毛，擬短伏毛群(E0群)和短伏毛群(F0群)各1個居群均有單細(xì)胞毛，說明單細(xì)胞毛主要存在直毛群、曲毛群、擬短伏毛群和短伏毛群中。以不同種類淫羊藿單細(xì)胞毛居群分析發(fā)現(xiàn)，柔毛淫羊藿80.6%居群具有單細(xì)胞毛，星花淫羊藿僅33.3%的居群具有單細(xì)胞毛，萬源淫羊藿具有單細(xì)胞毛，鎮(zhèn)巴淫羊藿無單細(xì)胞毛。因此，我們認(rèn)為單細(xì)胞毛可能與主流非腺毛類型和地理分布有關(guān)，與種類是否有關(guān)還需進(jìn)一步研究。

自梁海銳等[14]1992年首次發(fā)現(xiàn)淫羊藿葉背表皮細(xì)胞壁突起以來，王悅云等[13]、張曉東[15]和康帥等[12]相繼發(fā)現(xiàn)20個物種，分別是湖南淫羊藿(Epimediumhunanense)、茂汶淫羊藿(E.platypetalum)、川鄂淫羊藿(E.fargesii)、粗毛淫羊藿(E.acuminatum)、箭葉淫羊藿(E.sagittatum)、黔嶺淫羊藿(E.leptorrhizum)、寶興淫羊藿(E.davidii)、星花淫羊藿(E.stellulatum)、長蕊淫羊藿(E.dolichostemon)、天平山淫羊藿(E.myrianthum)、水城淫羊藿(E.shuichengense)、小葉淫羊藿(E.parvifolium)、貴州淫羊藿(E.sagittatumvar.guizhouense)、偏斜淫羊藿(E.truncatum)、朝鮮淫羊藿(E.koreanum)、單葉淫羊藿(E.simplicifolium)、竹山淫羊藿(E.zhushanense)、綠藥淫羊藿(E.chlorandrum)、四川淫羊藿(E.sutchuenense)、巫山淫羊藿(E.wushanense)存在乳突。柔毛淫羊藿(E.pubescens)、淫羊藿(E.brevicornu)、黔北淫羊藿(E.borealiguizhouense)、氈毛淫羊藿(E.coactum)、德務(wù)淫羊藿(E.dewuense)、無距淫羊藿(E.ecalcaratum)、短莖淫羊藿(E.brachyrrhizum)、膜葉淫羊藿(E.membranaceum)、腺毛淫羊藿(E.glandulosopilosum)、少花淫羊藿(E.pauciflorum)、木魚坪淫羊藿(E.franchetii)、恩施淫羊藿(E.enshiense)12個種葉背無乳突，但本研究通過對36個居群柔毛淫羊藿及近緣種葉背特征研究發(fā)現(xiàn)13個居群(SCBZ、SCPW1、SCPW2、SCPW3、SCNJ、SXSY、SCLZ2、SCQC、HBYX、SXSN、SXZB、SCWY、SCJY1)具有乳突。對13個居群進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，非腺毛較少(非腺毛密度少于50個/mm2)的居群69.2%具有乳突，如SXSY(非腺毛密度為20個/mm2)、SCNJ(42)、SCQC(49)、SCPW1(40)、SCLZ2(29)、SXSN(36)、SXZB(3)、SCWY(9)、SCJY1(21)居群，另外4個居群SCBZ(60)、SCPW2(55)、SCPW3(77)、HBYX(65)非腺毛較多，密度大于50個/mm2，具有乳突，占非腺毛多居群的17.4%，也說明了非腺毛密度與乳突間可能存在負(fù)相關(guān)性。特別是以長卷曲毛(BⅢ群、BⅣ群)為主的SCYA(113)、SCHY(125)、SCLC(149)、SCMC(115)、GSCX(107)5居群非腺毛最多，密度達(dá)100個/mm2以上，葉背均不具乳突；以不同種類分析柔毛淫羊藿29.3%居群、星花淫羊藿66.7%居群、鎮(zhèn)巴淫羊藿和萬源淫羊藿具有乳突。因此，我們認(rèn)為乳突與非腺毛密度可能具有一定的關(guān)系，具體仍需對淫羊藿屬的其他類群進(jìn)行研究。

通過對柔毛淫羊藿及近緣種36個居群非腺毛研究發(fā)現(xiàn)，柔毛淫羊藿及近緣種非腺毛形態(tài)結(jié)構(gòu)特征、有無單細(xì)胞、有無乳突，并不是完全一致的，但分析表明居群間整體呈現(xiàn)連續(xù)變異，所有居群均有直毛A類型非腺毛，說明直毛A類為柔毛淫羊藿及近緣種的核心類型非腺毛。由此可見, 非腺毛性狀至少在某些種內(nèi)變異十分復(fù)雜, 不同產(chǎn)地/居群間存在不同程度的共性和個性類別。所以在以后利用非腺毛進(jìn)行分類和演化分析時，應(yīng)注意需要有足夠的樣本數(shù)量，特別是不同居群的樣本量，除了進(jìn)行形態(tài)的觀察和主要類型的歸類外，還應(yīng)該總結(jié)出共性和個性類別。

圖版Ⅰ 柔毛淫羊藿及其近緣種非腺毛類型及乳突
A1～A4.長直毛；A5～A6.短直毛；B1～B4.彎曲毛；B5.長卷曲毛；C.伏曲毛；D1a、D2a.長伏直毛；D1b、D2b.長伏曲毛；E.擬短伏毛；F.短伏毛；G.單細(xì)胞毛
Plate Ⅰ Different types of non-glandular hairs and mastoid inE.pubescensand its related species
A1-A4. Long straight hair; A5-A6. Short straight hair; B1-B4. Curved hair; B5. Long curly hair; C. Appressed curly hair; D1a and D2a. Long appressed straight hair; D1b and D2b. Long curly appressed hair; E. Pseudo short appressed hair; F. Short appressed hair; G. Single cell hair