于汪營，楊靜，安晨

（河南省平頂山市第二人民醫(yī)院 病理科，河南 平頂山 467000）

關(guān)鍵字：增生性腎小球腎炎；病理；CD10；CD34；免疫組化；雙染色

臨床區(qū)分診斷腎臟疾病病理類型和變化常用方式為腎活檢病理檢查[1]，腎臟疾病中種類最多的為腎小球疾病，原發(fā)性腎小球中發(fā)病率最多的為增生性腎小球腎炎，臨床多依據(jù)細胞、基質(zhì)彌漫性增生病理改變評定病理類型，包含新月體性腎小球腎炎、膜增生性腎小球腎炎、毛細血管內(nèi)增生性腎小球腎炎等。腎活檢病理檢查包含馬松（Masson）染色、過碘酸六胺銀染色（periodic acid-silver metheramine,PASM）、過碘酸雪夫（periodic acid-Schiff,PAS）染色、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色等，Masson染色可反映出纖維蛋白、免疫復合物、III型膠原、基膜等，PASM染色比PAS更為精細，PAS染色可反映出系膜基質(zhì)和基膜，臨床可從基膜輪廓分辨細胞種類，HE染色可反映出細胞數(shù)量和種類。臨床醫(yī)生在進行病理診斷時主要依據(jù)以上敘述染色檢查的基膜輪廓狀況評估細胞種類[2]，但基膜輪廓不清晰時，則評估此類固有細胞確保其客觀性具有一定難度。為此，本研究納入本院2016年4月-2018年2月期間收治的腎疾病患者116例，根據(jù)疾病分組重點討論CD10和CD34免疫組化雙染色診斷增生性腎小球腎炎的病理類型和病理變化的準確性，具體報告如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

隨機從本院2016年4月-2018年2月期間收治的腎疾病患者116例進行討論，根據(jù)患者疾病分組，對照組中共35例腎小球微小病變患者，男19例，女16例；年齡46～71歲，平均（60.5±1.3）歲。研究組（81例）中包含新月體性腎小球腎炎21例、膜增生性腎小球腎炎25例、毛細血管內(nèi)增生性腎小球腎炎12例、系膜增生性腎小球腎炎23例；81例患者中包含男42例，女39例；年齡47～69歲，平均為（60.9±1.2）歲。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準后實施，且患者與其家屬均自愿接受此次檢查。比較兩組研究對象性別比、年齡資料無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組患者均接受免疫組化雙染色法腎活檢，標記CD10和CD34。由漳州武德公司提供親水性防脫載玻片（U-004）、羅氏全自動免疫組化染色儀、CD34（羅氏試劑）、CD10（羅氏試劑）。

將腎活檢組織，做切片，厚2 μm[3]，貼在防脫載玻片上，并在65℃環(huán)境下烘2 h。用全自動免疫組化染色儀做免疫組化雙染色檢查，99℃環(huán)境下做抗原修復0.5 h，37℃環(huán)境下，CD10、CD34孵育15 min[4]。

1.3 判定標準

參考對照組檢測狀況，毛細血管基膜呈棕色外包紅色，毛細血管基膜顯色清晰，且血管管腔正常；腎小球系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34均呈（-），顏色為無色；腎小囊壁層上皮細胞CD10（+），臟層上皮細胞CD10為（++），顏色為紅色；腎小球毛細血管內(nèi)皮細胞CD34（++），顏色為棕色。研究組接受光鏡檢查腎小球固有細胞顯色，并評估腎小球細胞增生狀況。

2 結(jié)果

2.1 腎小球內(nèi)CD10、CD34表達

系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34均為（-），顏色為無色；壁層和臟層上皮細胞CD10（+-+++），顏色為紅色；毛細血管內(nèi)皮細胞CD34（+-+++），顏色為棕色。各細胞均給予核蘇木精染色處理，顏色為藍色，各組織定位準確，顯色清楚。

2.2 腎小球微小病變

系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34均表現(xiàn)為（-），顏色為無色；毛細血管基膜呈棕色外包紅色；腎小囊壁層上皮CD10為（+），顏色為紅色，臟層上皮CD10為（++），顏色為紅色；毛細血管內(nèi)皮CD34表現(xiàn)為（++），顏色為棕色。此3種細胞均表現(xiàn)為輕度增生，毛細血管管腔基本正常，基膜顯色明顯。對照組患者CD10和CD34免疫組化雙染色檢查結(jié)果滿足病理判定結(jié)果。

2.3 系膜增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），無色；腎小囊上皮細胞，壁層CD10（-）、臟層CD10（+++），紅色；毛細血管內(nèi)皮細胞CD34（+），顏色為棕色。腎小球基質(zhì)和系膜細胞增生明顯，腎小球毛細血管腔出現(xiàn)擠壓癥狀，腎小囊臟層上皮細胞增生明顯。系膜增生性腎小球腎炎23例患者檢測CD10和CD34滿足病理診斷。

2.4 毛細血管內(nèi)增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），顏色為無色；腎小囊上皮細胞，壁層CD10表現(xiàn)為（+++），顏色為紅色，臟層CD10（+++），顏色為紅色；腎小球毛細血管內(nèi)皮CD34（+++），顏色為棕色。3種細胞均呈增生狀態(tài)，毛細血管管腔出現(xiàn)擠壓癥狀。毛細血管內(nèi)增生性腎小球腎炎患者CD10、CD34檢測結(jié)果與病理診斷相符。

2.5 膜增生性腎小球腎炎

腎小球系膜基質(zhì)和細胞CD10、CD34表現(xiàn)為（-），顏色為無色；腎小囊上皮細胞，壁層CD10表現(xiàn)為（+++），顏色為紅色，臟層CD10（+++），顏色為紅色；腎小球毛細血管內(nèi)皮CD34（+++），顏色為棕色。腎小球系膜基質(zhì)和細胞呈顯著增生狀，毛細血管基膜中存在系膜基質(zhì)，腎小囊臟層上皮細胞增生突出，擠壓血管管腔。膜增生性腎小球腎炎患者CD10、CD34檢測結(jié)果與病理結(jié)果相符。

3 討論

本研究中所納入的腎小球疾病者接受CD10、CD34免疫組化雙染色檢查后，定位準確，顯色清晰。提示CD10、CD34免疫組化雙染色特征可靠性高、準確性高、特異性高，且檢查結(jié)果均滿足病理類型和病理變化的判定，說明CD10和CD34免疫組化雙染色可將腎小球增生程度和固有細胞準確顯示，并顯示腎小球毛細血管基膜和管腔狀況，以及病變程度[5]。

以往所采用的HE染色無法客觀判定腎小囊壁層、臟層上皮細胞和腎小球系膜細胞、毛細血管內(nèi)皮細胞，Masson、PASM、PAS等染色均無法將此類固有細胞顯示出。醫(yī)生通過病理診斷分析以上染色狀況，根據(jù)分析基膜輪廓區(qū)分固有細胞種類，若難以區(qū)分基膜輪廓則無法更為客觀地判定固有細胞種類[6]。CD34多在血管內(nèi)皮細胞部位標記，內(nèi)皮細胞呈陽性癥狀。足細胞在新月體部位時，經(jīng)常獲得新抗原和失去CD10標記[7]。所以，標記新月體CD10，結(jié)果為陰性或弱陽性。CD10、CD34不標記腎小球系膜細胞[8]。腎活檢切片時用免疫組化雙染色法標記CD10、CD34，讓腎小囊壁層及臟層上皮細胞和毛細血管內(nèi)皮細胞顯示為紅色、棕色，而腎小球系膜則非棕色、紅色，進而可特異、客觀地鑒別固有細胞[9]。所以，在Masson染色、PASM染色、PAS染色、HE染色等腎活檢病理檢查聯(lián)合CD10、CD34免疫組化雙染色，可準確地診斷增生性腎炎病理類型和病理改變[10]。CD10、CD34在診斷腎小球疾病中有較大診斷意義，臨床可根據(jù)實際狀況選擇診斷方式。

綜上所述，腎活檢病理光鏡檢查包含Masson、PASM、PAS、HE等染色，聯(lián)合CD10、CD34免疫組化雙染色，有利于提升增生性腎小球腎炎病理類型和病理變化的診斷準確性，值得推廣。