譚 均，李隆云*，王計(jì)瑞，丁 剛，徐 進(jìn)

1重慶市中藥研究院；2重慶市中藥良種選育與評價(jià)工程技術(shù)研究中心；3重慶市中藥資源學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室； 4中國中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心重慶分中心，重慶400065

槐米為豆科植物國槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾，具有清熱、涼血、止血的功效[1]。現(xiàn)代藥理研究表明槐米具有保護(hù)心腦血管[2,3]、改善糖尿病[4]、抗菌[5]、抗氧化[6]和抑制黑色素生成[7]等作用?；泵字泻写罅康狞S酮及其苷類成分，如蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素、山奈酚、染料木素等[8,9]。槐米的產(chǎn)地在中國分布范圍較廣，由于各地氣候、地形、土壤條件等不同，所產(chǎn)槐米質(zhì)量也不均一。李振志[10]等研究發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地槐米中蘆丁的含量有顯著性差異，其中以廣西桂林產(chǎn)含量最高。國槐的花期為6～8月，在不同時(shí)期，槐花中黃酮類成分的含量也有較大差異[11]。為了綜合開發(fā)槐米產(chǎn)品及保障用藥安全，有必要對各產(chǎn)地槐米藥材的質(zhì)量進(jìn)行全面的評價(jià)。Liu[8]等采用UPLC-MS/MS法同時(shí)測定了槐米中5種黃酮類成分，但是檢測成本較高，不易推廣。本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定槐米中蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素4種成分的HPLC方法，對不同產(chǎn)地槐米中4種成分含量進(jìn)行測定，并通過主成分分析法進(jìn)行評價(jià)；參照2015版《中華人民共和國藥典》[1]對不同產(chǎn)地槐米藥材進(jìn)行水分和灰分的檢查以及浸出物和總黃酮的含量測定并采用聚類分析法進(jìn)行歸類。通過以上研究，更加全面地評價(jià)各地槐米的質(zhì)量，為槐米藥材的臨床使用和產(chǎn)品開發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀(Agilent公司，美國；DAD檢測器)，UV 2600紫外分光光度計(jì)(島津公司，日本)，Milli(Q Integral 5型純水儀(Millipoer公司，美國)，BSA 124(S型電子天平(Sartorius，德國)，KQ(250 DB型數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司，中國)，8(10型馬弗爐(沈陽節(jié)能電爐廠，中國)，XMTB數(shù)顯式電熱恒溫水浴鍋(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司，中國)，G2X(9240 MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，中國)。

對照品：蘆丁對照品(批號：MUST(16070511，純度：≥ 99%)、槲皮素對照品(批號：MUST(16072203，純度：≥ 98%)、異鼠李素對照品(批號：MUST(16092001，純度：≥ 98%)購自成都曼斯特生物科技有限公司；水仙苷對照品(批號：TAQT(LRLA，純度：≥ 93.1%)購自中國食品藥品檢定研究院。

試劑：乙腈(TEDIA公司，美國；色譜純)、甲醇(TEDIA公司，美國；色譜純)、醋酸(TEDIA公司，美國；色譜純)，其它試劑均為分析純。

樣品產(chǎn)地：在全國范圍內(nèi)共收集樣品54批，詳細(xì)信息見表1。樣品經(jīng)重慶市中藥研究院李隆云研究員鑒定為豆科植物國槐SophorajaponicaL.的干燥花蕾。

表1 槐米樣品來源Table 1 Origin of Flos Sophorae Immaturus

續(xù)表1(Continued Tab.1)

編號No.產(chǎn)地Habitat編號No.產(chǎn)地HabitatBF-21安徽省 亳州市(藥市購)NF-23重慶市 萬州區(qū) 甘寧鎮(zhèn) 甘寧鄉(xiāng)BF-22安徽省 亳州市 譙城區(qū) 十九里鎮(zhèn)NF-24重慶市 萬州區(qū) 柱山鄉(xiāng) 青高村BF-23江蘇省 邳州市 八義集鎮(zhèn)石橋村NF-25重慶市 大足區(qū) 珠溪鎮(zhèn) 寶珠村BF-24江蘇省 邳州市 占城鎮(zhèn)NF-26重慶市 大足區(qū) 寶頂鎮(zhèn) 雞公嶺BF-25江蘇省 宿遷市NF-27重慶市 涪陵區(qū) 太和鄉(xiāng) 白果村NF-1湖北省 武漢市NF-28重慶市 北碚區(qū) 西山坪村NF-2湖南省 永州市 蔡市鎮(zhèn) 三龍?zhí)链錘F-29四川省 樂山市 沙灣區(qū) 碧山鄉(xiāng)

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測

樣品處理及檢測方法按照《中華人民共和國藥典》[1]中相關(guān)方法進(jìn)行檢測。

2.2 4種黃酮類成分含量測定

2.2.1 色譜分析條件

色譜柱：Inertsil?ODS-3(250 mm × 4.6 mm，5 μm)。流動相：乙腈(A)- 1%醋酸水溶液(B)，梯度洗脫，0～5 min，5% A；5～10 min，5% → 20% A；10～20 min，20% A；20～30 min，20% → 32% A；30～45 min，32% → 35%A；45～50 min，35% → 5% A；50～55 min，5% A。流速1.0 mL/min，檢測波長257 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。色譜圖見圖1。

圖1 對照品(A)和槐米供試品(B)的HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substance (A) and Flos Sophorae Immaturus sample (B)注：1.蘆丁,2.水仙苷,3.槲皮素,4.異鼠李素。Note:1.rutin,2.narcissin,3.quercetin,4.isorhamnetin.

2.2.2 混合對照品溶液的制備

精密稱取對照品水仙苷6.04 mg、槲皮素10.18 mg、異鼠李素3.00 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密移取上述水仙苷溶液2 mL、槲皮素溶液2 mL、異鼠李素溶液0.5 mL與蘆丁9.04 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁濃度為904.0 μg/mL、水仙苷濃度為120.8 μg/mL、槲皮素濃度為203.6 μg/mL、異鼠李素濃度為15.0 μg/mL的混合對照品溶液。再稀釋得到梯度濃度的混合對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

精密稱取干燥槐米樣品粉末(過60目篩)0.1 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，稱定質(zhì)量。于25 ℃超聲處理(功率400 W，頻率40 kHz)30 min，冷卻，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取濾液即得。

2.2.4 方法學(xué)考察

2.2.4.1 線性關(guān)系考察

將梯度濃度的混合對照品溶液按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測。以各對照品峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，濃度(X，μg/mL)為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁的線性方程為Y=18.872X+34.875，r=0.999 9；水仙苷的線性方程為Y=9.763X-1.661，r=0.999 8；槲皮素的線性方程為Y=17.583X-14.405，r=0.999 9；異鼠李素的線性方程為Y=16.203X-3.285，r=0.999 9。結(jié)果表明，蘆丁在56.5～904.0 μg/mL、水仙苷在7.6～120.8 μg/mL、槲皮素在1.6～203.6 μg/mL、異鼠李素在 0.9～15.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4.2 檢測限與定量限

配制一系列質(zhì)量濃度由高到低的對照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測。以信噪比為3時(shí)考察檢測限、信噪比為10時(shí)考察定量限，結(jié)果表明蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素的檢測限分別為159、329、223、234 ng/mL，定量限分別為556、940、556、938 ng/mL。

2.2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一混合對照品溶液按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各成分的峰面積。結(jié)果蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素峰面積RSD分別為1.26%、2.18%、1.27%、2.14%、1.58%，表明儀器精密度良好。

2.2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一來源槐米樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣，記錄各成分的峰面積。結(jié)果蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素峰面積RSD分別為1.87%、1.90%、1.44%、1.34%，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄各成分的峰面積。結(jié)果蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素峰面積RSD分別為1.11%、1.24%、1.99%、1.32%，表明供試品溶液于24 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.4.6 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的同一來源槐米樣品6份，每份0.05 g，分別精密添加與樣品中含量相當(dāng)?shù)奶J丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素對照品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測，計(jì)算得到蘆丁的平均加樣回收率為100.31%，RSD為1.73%；水仙苷的平均加樣回收率為103.77%，RSD為1.85%；槲皮素的平均加樣回收率為100.63%，RSD為2.75%；異鼠李素的平均加樣回收率為101.93%；RSD為2.55%。結(jié)果表明本方法的回收率良好。

3 結(jié)果與分析

3.1 水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測

槐米樣品中水分、灰分、浸出物及總黃酮的檢測結(jié)果見表2。結(jié)果顯示54批槐米樣品的水分含量在4.83%～10.81%之間，均低于11.00%，符合藥典規(guī)定；總灰分含量在3.42%～8.93%之間，均低于9.00%，酸不溶性灰分含量在0.73%～2.93%之間，均低于3.00%，符合藥典規(guī)定。南方產(chǎn)樣品30%甲醇浸出物含量在43.69%～55.11%之間，均符合藥典規(guī)定；北方產(chǎn)樣品30%甲醇浸出物含量在32.38%～52.56%之間，差異較大，其中BF-4、BF-6、BF-9、BF-10和BF-24 的含量低于藥典對槐米浸出物的要求。南方產(chǎn)槐米樣品中總黃酮含量在20.10%～42.98%之間，均符合藥典規(guī)定；北方產(chǎn)樣品總黃酮含量在9.91%～25.55%之間，僅有7批(BF-2、BF-7、BF-8、BF-11、BF-13、BF-18和BF-24)合格，說明南方產(chǎn)槐米樣品普遍優(yōu)于北方。

表2 槐米中水分、灰分、浸出物和總黃酮測定結(jié)果Table 2 The determination of moisture,ash,total flavonoids extract in Flos Sophorae Immaturus

續(xù)表2(Continued Tab.2)

編號No.水分Moisture(%)總灰分Total ash(%)酸不溶性灰分Acid-insoluble ash(%)30%乙醇浸出物30% Ethnaol extract(%)總黃酮Total flavonoids(%)BF-167.70±0.833.42±0.550.73±0.0147.74±4.1517.72±0.19#BF-179.91±0.368.47±0.361.99±0.7847.08±5.109.91±0.22#BF-187.61±0.626.32±0.841.70±0.2550.45±1.0021.50±1.09BF-1910.36±0.827.71±0.202.9 1±0.8045.70±0.3014.93±1.10#BF-209.51±0.916.93±0.821.47±0.2944.22±2.0016.34±0.36#BF-2110.81±0.176.51±0.391.38±0.0246.33±2.2919.68±0.07#BF-228.56±0.647.81±0.341.58±0.1143.60±1.2218.50±0.13#BF-235.40±0.187.40±0.732.01±0.4244.72±2.6518.79±0.20#BF-249.71±0.396.02±0.291.80±0.5241.15±4.47#23.90±0.02BF-256.31±0.528.38±0.472.21±0.3646.03±1.3813.42±0.46#NF-110.81±0.925.03±0.661.03±0.3048.90±2.4220.10±0.67NF-28.61±4.598.19±0.492.18±0.3243.69±3.0438.30±0.55NF-37.62±0.498.20±1.131.78±0.0548.95±1.6639.08±0.54NF-46.92±0.616.38±0.631.39±0.3345.43±0.7022.20±0.98NF-57.59±0.827.29±0.812.23±0.4744.55±1.3039.67±1.17NF-68.80±0.318.11±0.472.08±0.3147.78±3.5122.98±0.74NF-79.21±0.458.39±0.991.87±0.6245.34±4.6634.75±1.89NF-810.17±0.427.02±0.462.01±0.4949.64±3.1338.25±0.73NF-99.82±0.736.64±0.831.19±0.1346.56±2.1935.43±0.56NF-108.83±0.866.45±0.421.01±0.2849.99±1.3442.98±0.45NF-119.83±0.127.22±0.472.17±0.2246.48±1.8936.17±0.45NF-1210.28±0.418.28±0.731.93±0.2045.38±2.1935.24±0.46NF-1310.11±0.685.39±0.941.32±0.5248.31±1.1941.60±0.62NF-146.32±0.918.42±0.852.00±0.0344.64±2.1134.98±0.84NF-157.49±0.827.21±0.172.02±0.1246.87±2.8938.02±0.80NF-167.73±0.298.39±0.772.38±0.4846.66±5.7937.25±0.11NF-178.92±0.736.62±0.501.81±0.3350.49±1.1735.46±0.42NF-189.01±0.378.93±0.852.33±0.4745.27±3.9837.51±0.47NF-199.96±0.828.30±0.412.62±0.8155.11±1.7832.91±0.26NF-2010.13±0.567.79±0.831.88±0.3047.19±2.3531.06±0.79NF-218.31±0.796.48±0.311.19±0.0751.27±3.7837.81±0.50NF-227.23±0.175.32±0.811.12±0.0148.68±4.0732.16±0.66NF-238.29±0.426.39±0.961.43±0.2950.28±3.1438.45±0.26NF-248.47±0.915.22±0.390.99±0.2751.72±4.1836.66±0.36NF-259.25±0.317.19±0.981.28±0.0946.16±2.8731.89±0.67NF-268.73±0.278.53±0.822.93±0.3548.36±2.1933.66±0.84NF-277.79±3.178.17±0.101.83±0.4944.78±1.9839.55±0.83NF-286.53±0.866.93±0.381.42±0.2845.83±2.0239.12±0.79NF-299.27±0.787.49±0.401.67±0.3946.83±1.1926.04±0.68藥典規(guī)定Pharmacopeial regulations11.009.003.0043.0020.00

注：“#”表示低于藥典規(guī)定。
Note:"#" indicates that the content is below the Pharmacopeial regulations.

3.2 4種黃酮類成分含量測定

按“2.2.3”項(xiàng)下方法每個(gè)樣品平行制備3份供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測，記錄色譜圖。根據(jù)線性方程分別計(jì)算蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素的百分含量，結(jié)果見表3。

表3 槐米中4種成分含量測定結(jié)果Table 3 Determination results of 4 components in Flos Sophorae Immaturus

續(xù)表3(Continued Tab.3)

編號No.蘆丁Rutin(%)水仙苷Narcissin(%)槲皮素Quercitrin(%)異鼠李素Isorhamnetin(%)PCA得分排序PCA score sortNF-1132.217 3±0.713 02.802 8±0.088 10.234 2±0.020 5-4NF-1230.948 2±0.192 12.494 0±0.021 80.564 1±0.013 5-8NF-1337.801 1±0.153 72.558 5±0.006 00.154 0±0.001 9-3NF-1430.125 6±0.330 91.906 0±0.016 91.533 5±0.012 8-18NF-1534.278 6±0.521 82.217 3±0.083 20.521 8±0.005 39NF-1631.822 9±1.643 01.890 5±0.163 42.344 6±0.078 90.152 1±0.006 37NF-1729.446 6±0.339 41.513 0±0.157 43.491 9±0.203 20.230 3±0.007 912NF-1831.242 6±1.184 41.941 7±0.085 51.844 6±0.072 00.120 4±0.005 511NF-1924.993 7±0.215 11.171 5±0.217 74.539 4±0.017 20.270 0±0.000 420NF-2026.726 8±0.527 21.576 1±0.018 81.940 6±0.004 80.117 8±0.001 021NF-2130.902 6±0.322 51.537 7±0.010 93.618 8±0.062 00.200 9±0.003 110NF-2225.462 2±1.125 61.458 8±0.071 54.034 0±0.142 70.234 5±0.008 515NF-2333.733 8±0.617 41.745 1±0.036 72.415 3±0.006 40.154 7±0.000 76NF-2431.829 7±1.919 91.644 3±0.459 41.548 5±0.037 70.112 6±0.002 714NF-2525.948 2±2.217 61.627 4±0.144 83.119 4±0.223 30.189 4±0.012 016NF-2627.345 7±1.842 81.452 8±0.987 13.211 5±0.310 10.175 4±0.008 619NF-2736.354 0±1.478 12.730 9±0.169 20.266 5±0.010 6 - 2NF-2835.562 2±0.738 41.452 5±0.968 40.621 8±0.102 70.215 4±0.038 613NF-2920.437 8±0.812 31.009 7±0.038 43.779 7±0.109 70.230 7±0.005 627藥典規(guī)定Pharmacopeial regulations15未控制 Uncontrolled未控制 Uncontrolled未控制Uncontrolled-

注：“-”表示在當(dāng)前濃度下未檢出；“#”表示低于藥典規(guī)定。
Note:"-" indicates that no concentration was detected at the current concentration;"#" indicates that the content is below the Pharmacopeial regulations.

由結(jié)果可知，南方產(chǎn)槐米樣品中蘆丁含量在18.402 2%～37.801 1%之間，均符合藥典規(guī)定；其中武漢(NF-1)產(chǎn)槐米中蘆丁含量最低，推測這與其處于平原地區(qū)，氣候與其他中南、西南高海拔產(chǎn)區(qū)差異較大有關(guān)。北方產(chǎn)樣品蘆丁含量在5.530 0%～21.879 5%之間，其中約有一半不合格。

南方和北方樣品中水仙苷、槲皮素和異鼠李素含量也有較大差異。水仙苷含量分別為0.544 6%～2.802 8%和0.124 2%～1.796 5%；而槲皮素和異鼠李素含量在北方樣品中均出現(xiàn)了未檢出的情況，且明顯南方樣品優(yōu)于北方樣品。

3.3 化學(xué)模式識別

3.3.1 聚類分析

浸出物、總黃酮及單個(gè)黃酮類成分含量是評價(jià)槐米質(zhì)量的重要指標(biāo)。本研究以浸出物、總黃酮含量、蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素含量的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)為變量，運(yùn)用SPSS 20.0 軟件，以平方歐氏距離作為度量標(biāo)準(zhǔn)，對54批樣品進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，結(jié)果見圖2。54批樣品共被分為3大類，其中北方產(chǎn)槐米被聚為一類；南方產(chǎn)槐米可分為2類，產(chǎn)于湖南、云南、廣西的被歸為一類，產(chǎn)于重慶、四川的被歸為一類。結(jié)果表明，南、北方所產(chǎn)槐米質(zhì)量有較大差異，說明槐米的質(zhì)量受地域及氣候的影響較大。

3.3.2 主成分分析

運(yùn)用SPSS 20.0軟件，以槐米中蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素含量作為變量，以特征值和累計(jì)貢獻(xiàn)率作為判定依據(jù)，對不同產(chǎn)地槐米進(jìn)行主成分分析。根據(jù)降維結(jié)果，共挑選出2個(gè)主成分PC1、PC2，特征值分別為2.036、1.510。各成分方差貢獻(xiàn)值分別為50.893%、37.751%，累積貢獻(xiàn)值達(dá)到88.644%，具有較強(qiáng)的代表性，可用來評價(jià)槐米的質(zhì)量。

圖2 槐米樣品聚類分析Fig.2 Cluster analysis of Flos Sophorae Immaturus

表4 因子載荷矩陣Table 4 Initial factor load matrix

根據(jù)各因子載荷矩陣及特征值計(jì)算得分系數(shù)，進(jìn)一步得到PC1、PC2及綜合得分(Y)方程式：

PC1=0.327ZX1+0.227ZX2+0.395ZX3-0.389ZX4

PC2=0.424ZX1+0.489ZX2+0.343ZX3+0.356ZX4

ZX1、ZX2、ZX3、ZX4分別為蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素的標(biāo)準(zhǔn)化值。

Y=0.574PC1+0.426PC2

利用上式計(jì)算各地槐米質(zhì)量綜合得分并按結(jié)果高低進(jìn)行排序，結(jié)果見表3。得分越高，表明槐米質(zhì)量越好，排名越靠前。排名靠前的樣品多產(chǎn)于南方地區(qū)，排名靠后的多產(chǎn)于北方地區(qū)，說明南方產(chǎn)槐米質(zhì)量普遍優(yōu)于北方。由主成分得分圖(圖3)可知，除甘肅省禮縣紅河鎮(zhèn)的一批樣品(BF-6)離散，其它產(chǎn)地樣品可分為3大類。其中產(chǎn)地位于南方的可分為2大類，產(chǎn)地位于北方的聚集為1類，分類結(jié)果與聚類分析結(jié)果一致，均表明槐米樣品質(zhì)量受南、北方地域因素的影響較大。此外，由表4及圖4可知，PC1主要反映了槲皮素和異鼠李素的信息，PC2主要反映了水仙苷的信息；PC1和PC2對蘆丁信息的反應(yīng)程度相近。因此Ⅱ類與Ⅰ、Ⅲ類分開的主要原因是前者含有較高的水仙苷，Ⅰ類與Ⅲ類分開的主要原因則是槲皮素和異鼠李素含量的差異。

圖3 主成分得分圖Fig.3 Scores plot from principal component analysis

圖4 主成分因子分析圖Fig.4 Loadings plots from principal component analysis

4 結(jié)論

本研究建立了可同時(shí)檢測蘆丁、水仙苷、槲皮素和異鼠李素4種黃酮類成分的HPLC方法，方法學(xué)驗(yàn)證均符合藥典中相關(guān)規(guī)定，表明該方法準(zhǔn)確、可行。由于槐米中蘆丁的含量很高，是其他成分的幾十倍，故在對槐米進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，大多只檢測蘆丁一種成分[1]。但有研究表明，槐米中蘆丁和槲皮素的含量在槐米的成長過程中是反向變化的[12]，且其他黃酮類成分也具有較強(qiáng)的藥理活性[13-16]，因此有必要對槐米中多種成分進(jìn)行檢測。本實(shí)驗(yàn)分別選用了WATERS Symmetry C18、SWELL Chromplus?C18和Inertsil?ODS-3三種類型色譜柱，Agilent 1260和1200兩個(gè)系列高效液相色譜儀，對不同藥材粉末濃度(0.4～2.0 mg/mL)提取液中蘆丁的吸附飽和度進(jìn)行考察。結(jié)果表明，當(dāng)提取液藥材粉末濃度為2.0 mg/mL時(shí)，三種色譜柱均未達(dá)到飽和，蘆丁色譜峰面積重復(fù)性較好(RSD ≤ 2%)，且在兩個(gè)系列的高效液相色譜儀上均能檢測到多數(shù)樣品中水仙苷、槲皮素的峰面積和部分樣品中異鼠李素的峰面積，并可做定量檢測(≥ LOQ)。

此外，本研究對全國各主要產(chǎn)地槐米的質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行了較全面地考察。通過化學(xué)模式識別法分析浸出物、總黃酮和蘆丁、水仙苷、槲皮素、異鼠李素含量，結(jié)果可將54批槐米樣品分為3大類，表明其質(zhì)量與地域有較大相關(guān)性。南方產(chǎn)槐米的質(zhì)量普遍優(yōu)于北方產(chǎn)槐米，其中以重慶、廣西、湖南為代表的西南、中南地區(qū)所產(chǎn)槐米質(zhì)量優(yōu)異，表明海拔和氣候?qū)λ幉馁|(zhì)量有較大影響[17-19]。