■管軍軍 張?zhí)煊?高天增 王志祥

（1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧學(xué)博士后科研流動(dòng)站，河南 鄭州 450002；2.河南廣安生物科技股份有限公司博士后科研工作分站，河南 鄭州 450001）

仔豬由于其身體發(fā)育不完全的特征，導(dǎo)致其在不同階段對(duì)于飼料的要求不同的特性，鑒于此市面上已有專門針對(duì)仔豬的不同階段而設(shè)計(jì)的專用配合飼料。雖然這些仔豬專用飼料能夠解決一些消化問題，但是，還存在一些如消化不良、厭食等問題。研究發(fā)現(xiàn)，微生物發(fā)酵飼料對(duì)于幼小動(dòng)物的消化、吸收、食欲、腸道發(fā)育等方面有顯著提高[1-3]。

乳酸菌是定居在動(dòng)物腸道中的正常微生物，常被選用菌種進(jìn)行發(fā)酵飼料，具有潛在的益生作用，有利于維護(hù)動(dòng)物的腸道健康。因其能夠代謝生成大量乳酸，降低飼料pH值，且飼料發(fā)酵后具有酸香味，從而能極大地提高動(dòng)物的食欲。同時(shí)，經(jīng)乳酸菌發(fā)酵后，能提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的含量，降低抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，具有一定的抑菌作用，能夠防止雜菌污染，提高發(fā)酵飼料的品質(zhì)[4-5]。一般來說，乳酸菌發(fā)酵飼料常采用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，既能降低成本，又能利用其厭氧發(fā)酵的特點(diǎn)進(jìn)行深層發(fā)酵，利于大規(guī)模發(fā)酵的應(yīng)用。

但是，有關(guān)乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的研究鮮有報(bào)道。本課題組結(jié)合固態(tài)發(fā)酵飼料的產(chǎn)業(yè)化實(shí)際情況，在科學(xué)設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案的基礎(chǔ)上系統(tǒng)地研究乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料生產(chǎn)技術(shù)，本研究主要集中在發(fā)酵的工藝參數(shù)對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品主要營養(yǎng)指標(biāo)（蛋白質(zhì)）的影響及工藝參數(shù)的優(yōu)化，為乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的實(shí)際生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

乳酸菌為河南省工業(yè)微生物菌種保藏中心提供，經(jīng)過篩選馴化后，并加以輔料經(jīng)冷凍干燥制成發(fā)酵劑（＞108CFU/g），冰箱5℃保存?zhèn)溆?。仔豬配合飼料551H及552H由河南廣安生物科技股份有限公司生產(chǎn)，其組成如表1所示；另外，葡萄糖等試劑均為分析純，購自鄭州新豐化驗(yàn)器材有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

SPX-250B智能型生化培養(yǎng)箱(上?，槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；JJ-CJ-1FD超凈工作臺(tái)(吳江市凈化設(shè)備總廠)；LDZX-50FB立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠)；FA2004B電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.3 粗蛋白及其增加率的測定

利用凱氏定氮法GB/T6432-1994對(duì)仔豬配合飼料或發(fā)酵產(chǎn)品進(jìn)行粗蛋白的測定，以干基P表示。

蛋白增加率(%)=（P發(fā)酵后-P未發(fā)酵）/P未發(fā)酵×100

1.4 發(fā)酵試驗(yàn)

將乳酸菌發(fā)酵劑接種到培養(yǎng)液[2%（w/v）仔豬配合飼料551H或552H+2%（w/v）葡萄糖+蒸餾水]中，振蕩均勻，30℃條件下靜置培養(yǎng)4 h。取發(fā)酵劑活化液一定比例（v/v）接種到固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基（仔豬配合飼料551H或552H與蒸餾水組成，裝料100 g/瓶）上。攪拌均勻后，置于培養(yǎng)箱中固態(tài)發(fā)酵，一定時(shí)間后取樣，50℃條件下干燥成品備用。

表1 仔豬配合飼料551H及552H配方

1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.5.1 發(fā)酵時(shí)間、固態(tài)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度及接種量的影響試驗(yàn)

試驗(yàn)主要研究不同的發(fā)酵時(shí)間（0、12、16、24、32、40、48 h），固態(tài)培養(yǎng)基組成[仔豬配合飼料∶水=（80∶20）、（70∶30）、（60∶40）、（50∶50）]，發(fā)酵溫度（25、28、30、32、35 ℃）及接種量（3%、5%、10%、15%、20%）對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白的影響，其它因素還有培養(yǎng)基的種類（551H與552H），并進(jìn)行7×2（發(fā)酵時(shí)間）、4×2（固態(tài)培養(yǎng)基組成）、5×2（發(fā)酵溫度）及5×2（接種量）試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每組試驗(yàn)均重復(fù)3次。

1.5.2 優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)——響應(yīng)面設(shè)計(jì)

在研究各種工藝參數(shù)影響的基礎(chǔ)上，根據(jù)實(shí)際應(yīng)用及統(tǒng)計(jì)分析確定每個(gè)因素的最高與最低水平，進(jìn)行4因素的響應(yīng)面設(shè)計(jì)，共27組，每組試驗(yàn)均重復(fù)3次。試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行二次響應(yīng)面回歸建模，并預(yù)測最佳工藝參數(shù)。

1.5.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

在優(yōu)化試驗(yàn)確定最佳理論工藝參數(shù)的基礎(chǔ)上，并對(duì)該工藝參數(shù)進(jìn)行相應(yīng)的發(fā)酵試驗(yàn)，其結(jié)果與理論值進(jìn)行比較，最終確定最佳工藝參數(shù)。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

利用SAS 9.0軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多因素方差分析（ANOVA）、最小二乘法（LSD）進(jìn)行各水平之間的多重比較以及二次響應(yīng)面回歸分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白的影響

本研究所選用的兩種仔豬配合飼料在配方上有所不同（見表1），551H側(cè)重于營養(yǎng)成分的強(qiáng)化與補(bǔ)充，且易于吸收消化，而552H側(cè)重于腸道健康并逐步向育肥豬飼料過渡，因此，前者更適用于斷奶仔豬，后者更適合年齡更大的仔豬，故兩種仔豬飼料具有代表性。本研究分別對(duì)兩種配合飼料進(jìn)行乳酸菌固態(tài)發(fā)酵研究。通過發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品的影響可以發(fā)現(xiàn)(見圖1)，兩種配合飼料均隨著發(fā)酵時(shí)間的延長其蛋白含量及其增加率相應(yīng)提高，24 h之后，出現(xiàn)下降，趨勢基本一致；但是，發(fā)酵時(shí)間達(dá)到32 h后，兩種飼料的蛋白所受的影響不同，551H則繼續(xù)下降，40 h后才出現(xiàn)上漲的態(tài)勢，而552H則呈上升態(tài)勢。而通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析本次試驗(yàn)結(jié)果，發(fā)酵時(shí)間顯著影響著乳酸菌對(duì)于這兩種飼料固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白含量（P＜0.000 1)及其增加率（P＜0.000 1），各水平的多重比較排序?yàn)椋? hd、12 hc、16 hbc、24 hab、32 hb、40 hb、48 ha（右上肩標(biāo)不同字母表示差異顯著，P＜0.05），其中發(fā)酵12 h后產(chǎn)品中蛋白含量及其增加率顯著高于未發(fā)酵的產(chǎn)品（P＜0.05），而且發(fā)酵24 h及48 h后對(duì)產(chǎn)品中蛋白的影響顯著高于發(fā)酵12 h的產(chǎn)品（P＜0.05），但是12～16、16～40 h及24～48 h各水平之間的差異并不顯著（P＞0.05），因此，結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果與應(yīng)用，在后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)中對(duì)于551H，可確定發(fā)酵時(shí)間的最高水平為32 h及最低水平為12 h，而對(duì)于552H，可確定發(fā)酵時(shí)間的最高水平為48 h及最低水平為12 h。至于發(fā)酵原料影響，顯著影響產(chǎn)品蛋白含量（P＜0.000 1）及其增加率（P＜0.000 1），且發(fā)酵551H后蛋白的含量及其增加率明顯高于552H（P＜0.05）。

圖1 發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的影響

乳酸菌作為一種厭氧型微生物，由于固態(tài)發(fā)酵傳質(zhì)的不連續(xù)性，導(dǎo)致發(fā)酵微環(huán)境的變化呈現(xiàn)不一致性[6]，物料內(nèi)部由于其物理受力等原因，導(dǎo)致微環(huán)境中氧分較少，利于乳酸菌的生長。隨著發(fā)酵的進(jìn)行，乳酸菌的擴(kuò)增，代謝產(chǎn)物的生成，改變了發(fā)酵的微環(huán)境條件，當(dāng)微環(huán)境的養(yǎng)分不能滿足微生物的大量生長時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生競爭性生長及微生物凋亡，代謝產(chǎn)物必然會(huì)被利用，產(chǎn)生過度發(fā)酵，導(dǎo)致有機(jī)氮流失，因此研究中發(fā)現(xiàn)發(fā)酵24 h后蛋白含量在數(shù)值上出現(xiàn)下降的態(tài)勢。不過，對(duì)于這兩種飼料，這個(gè)下降態(tài)勢的持續(xù)時(shí)間并不一樣，551H持續(xù)較長，應(yīng)與其組成中大量可溶養(yǎng)分利于乳酸菌快速生長及產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物有關(guān)。若繼續(xù)發(fā)酵，隨著代謝產(chǎn)物的消耗，飼料中養(yǎng)分再次被利用，從而出現(xiàn)蛋白含量再次提升的態(tài)勢。而本研究中兩種飼料作為固態(tài)發(fā)酵基，乳酸菌可利用養(yǎng)分有所不同，551H優(yōu)于552H。

2.2 固態(tài)培養(yǎng)基組成對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白的影響

本研究中固態(tài)培養(yǎng)基由仔豬配合飼料與水組成，如圖2所示，兩種培養(yǎng)基中，固液比的大小，影響著發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白含量及其增加率，但結(jié)果二者不同。對(duì)于551H固態(tài)培養(yǎng)基，固液比的增加對(duì)于發(fā)酵的影響呈“N”形逐步向上態(tài)勢；而對(duì)于552H培養(yǎng)基，呈現(xiàn)出快速上升后趨緩態(tài)勢的特點(diǎn)?？偟膩碚f，固液比大于（70∶30）可獲得較高的產(chǎn)品品質(zhì)，而高固液比（80∶20）則不利于發(fā)酵的進(jìn)行。本次研究中，固態(tài)培養(yǎng)基組成對(duì)于發(fā)酵的產(chǎn)品蛋白含量的影響（P=0.004 3＜0.01）及蛋白增加率（P＜0.000 1）有顯著影響，各水平的多重比較排序?yàn)椋海?0∶20）b、（70∶30）a、（60∶40）a、（50∶50）a（右上肩標(biāo)不同字母表示差異顯著，P＜0.05），其中，（80∶20）的影響明顯低于其它水平，但另外三個(gè)水平之間的差異并不顯著。因此，在后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)中，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定固液比最高水平（80∶20=4）及最低水平（60∶40=1.5）。另外，培養(yǎng)基的種類對(duì)蛋白含量有顯著影響（P＜0.000 1），且發(fā)酵551H后蛋白的含量明顯高于552H（P＜0.05）。

圖2 固態(tài)培養(yǎng)基組成對(duì)乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的影響

固態(tài)培養(yǎng)基中水分的含量影響著乳酸菌的生長與代謝。水分含量高，固態(tài)培養(yǎng)基中溶解于水中可利用的養(yǎng)分增多，利于微生物的生長，發(fā)酵產(chǎn)品中蛋白含量相應(yīng)得到提高。對(duì)于551H，配方組成中有大量營養(yǎng)成分且能易于溶解于水中，因此固態(tài)培養(yǎng)中水分含量（70∶30）的提高可溶解大量養(yǎng)分，利于乳酸菌的快速生長，再提高含水量，并不能提高這些養(yǎng)分的含量，因此，對(duì)發(fā)酵的影響不明顯。對(duì)于552H，其主要組成除玉米與豆粕外，其余營養(yǎng)組分較少，能夠被乳酸菌利用的主要是玉米與豆粕，其中的養(yǎng)分能被水溶解出，但過程緩慢，隨著固態(tài)培養(yǎng)基中水分含量的增加，其可溶養(yǎng)分漸漸提高，發(fā)酵產(chǎn)品中蛋白指標(biāo)也逐步提高。另一方面，培養(yǎng)基中水分含量高(低固液比)除了有利于營養(yǎng)組分的充分溶解外，固態(tài)培養(yǎng)基中顆粒間隙被水分子濕潤，封閉了發(fā)酵微環(huán)境，起到隔絕氧氣的作用，也利于乳酸菌厭氧發(fā)酵。

2.3 發(fā)酵溫度對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白的影響

圖3表現(xiàn)了兩種飼料在不同發(fā)酵溫度下其發(fā)酵產(chǎn)品中蛋白的變化，而且對(duì)不同飼料，其變化趨勢不同。對(duì)于551H，溫度的影響基本呈“倒N”形態(tài)，25℃較有利于乳酸菌的生長，高于此溫度對(duì)菌種的生長有抑制作用；而對(duì)于552H，與之相反，基本呈“N”形態(tài)，30℃時(shí)發(fā)酵產(chǎn)品有較高的蛋白及其增長率，高于或低于此溫度，均不利于乳酸菌的生長。而對(duì)所獲得的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，溫度顯著影響著該發(fā)酵產(chǎn)品蛋白含量（P=0.041 1＜0.05）及其增加率（P=0.022 6＜0.05)，各水平的多重比較排序?yàn)椋?5 ℃abc、28 ℃ab、30 ℃a、32℃bc、35℃c（右上肩標(biāo)不同字母表示差異顯著，P＜0.05），其中，30～35 ℃之間差異比較顯著，25～30 ℃各水平間的差異并不顯著。因此，在后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)中，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定最高發(fā)酵溫度30℃及最低發(fā)酵溫度25℃。至于發(fā)酵基的種類，在本次試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其對(duì)于產(chǎn)品蛋白含量（P＜0.000 1)及其增加率（P=0.004 1＜0.01）的影響顯著，具體表現(xiàn)在551H發(fā)酵后所得產(chǎn)品的蛋白含量及其增加率明顯高于552H（P＜0.05）。

圖3 發(fā)酵溫度對(duì)乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的影響

乳酸菌的生長受溫度的影響，一般來說，30～40℃比較適合其生長。本研究中，考慮到工業(yè)化生產(chǎn)及溫控成本，選擇低溫發(fā)酵，且在菌種的前期培養(yǎng)中選擇低溫馴化，這樣方便實(shí)際應(yīng)用，節(jié)省能源消耗。溫度的提高一方面促進(jìn)了乳酸菌的生長，另一方面提高了可利用養(yǎng)分在水中的溶解度，便于乳酸菌快速利用，二者相互作用，此消彼長，共同決定著發(fā)酵產(chǎn)品的質(zhì)量。由于選用的兩種飼料的組成不同，溫度對(duì)于發(fā)酵的影響不同。對(duì)于551H，由于可利用組分在所選溫度范圍內(nèi)溶解度影響不大，主要是對(duì)乳酸菌生長的影響，因此，隨著溫度的提高，乳酸菌生長迅速，養(yǎng)分充分利用而局部出現(xiàn)匱乏，限制了微生物的生長，從而影響了產(chǎn)品中蛋白含量。對(duì)于552H，可利用組分屬于大分子有機(jī)物，在水中的溶解度與溫度有關(guān)，提升溫度溶解度提高，乳酸菌生長速度加快，超過30℃后，其可利用組分溶解度變化不大，但微生物生長速度繼續(xù)增加，養(yǎng)分匱乏抑制乳酸菌生長，產(chǎn)品中蛋白含量出現(xiàn)下降態(tài)勢。

2.4 接種量對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白的影響

如圖4所示，接種量對(duì)于乳酸菌固態(tài)發(fā)酵這兩種仔豬配合飼料的影響趨勢不一致。對(duì)于551H，接種量10%更利于乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬飼料，過高或過低的接種量均不利于發(fā)酵的進(jìn)行；而對(duì)于552H，3%的接種量所獲得的產(chǎn)品具有較高的蛋白含量及其增加率，而5%的接種量則具有較低的蛋白含量及其增加率。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，接種對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品中蛋白含量（P=0.004 0＜0.01）及其增加率（P=0.002 5＜0.01）的影響非常顯著，各水平的多重比較排序?yàn)椋?%a、5%b、10%a、15%a、20%a（右上肩標(biāo)不同字母表示差異顯著，P＜0.05），其中，5%接種量所得產(chǎn)品蛋白質(zhì)指標(biāo)明顯低于其它水平。因此，在后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)中，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，確定接種量最高水平為10%，最低水平為3%。另外，本次試驗(yàn)中固態(tài)培養(yǎng)基對(duì)于產(chǎn)品中蛋白含量（P＜0.000 1）及其增加率（P=0.001 0＜0.01）影響顯著，具體是551H發(fā)酵后所得產(chǎn)品的蛋白含量明顯高于552H（P＜0.05），但是552H發(fā)酵后蛋白增加率明顯高于551H（P＜0.05）。

本次試驗(yàn)結(jié)果表明，接種量較高（10%～20%），乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)品中蛋白含量變化不大，較低的接種量（3%～5%）的情況下，兩種飼料表現(xiàn)出不同的結(jié)果。接種量的大小主要體現(xiàn)在菌種的起始分布密度上，隨著起始分布密度的提高，乳酸菌生長速度加快，當(dāng)起始分布密度達(dá)到一定程度后，其對(duì)乳酸菌的生長促進(jìn)作用開始減弱，因?yàn)榭捎灭B(yǎng)分限制了微生物的大量生長，所以當(dāng)接種量超過10%后所得產(chǎn)品的蛋白指標(biāo)變化不大。值得一提的是，對(duì)于552H，接種量3%時(shí)獲得了相當(dāng)高的蛋白含量及其增加率，這應(yīng)與552H飼料中可利用組分主要為有機(jī)大分子以及微環(huán)境條件有關(guān)，當(dāng)然，具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

圖4 接種量對(duì)乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的影響

2.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

2.5.1 固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料551H

在前期確定各種因素的最高與最低水平(發(fā)酵時(shí)間12～32 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5～4，發(fā)酵溫度25～30 ℃，接種量3%～10%)下，進(jìn)行如表2所示的響應(yīng)面試驗(yàn)。通過對(duì)該試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析（表3）發(fā)現(xiàn)，在所構(gòu)造的二次模型中，一次項(xiàng)t、R、T、I及二次項(xiàng)I×I、t×t、R×R及模型整體均較為顯著（P＜0.01），且模型的失擬項(xiàng)不顯著（P＞0.05），該模型可在各因素的水平范圍內(nèi)應(yīng)用于乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料551H工藝。通過擬合并估計(jì)出二次響應(yīng)面回歸模型各顯著項(xiàng)的系數(shù)，并進(jìn)行蛋白含量及增加率最高時(shí)的最佳工藝參數(shù)預(yù)測，其結(jié)果為：發(fā)酵時(shí)間27 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值2.125，發(fā)酵溫度25℃，接種量10%，此時(shí)有較高的蛋白含量（22.47%）及其增加率（7.23%）。

2.5.2 固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料552H

在前期確定各種因素的最高與最低水平(發(fā)酵時(shí)間12～48 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5～4，發(fā)酵溫度25～30 ℃，接種量3%～10%)下，進(jìn)行如表4所示的響應(yīng)面試驗(yàn)。通過對(duì)該試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析（見表5）發(fā)現(xiàn)，在所構(gòu)造的二次模型中，一次項(xiàng)t、R、T、I及二次項(xiàng)I×I、R×R及模型整體均較為顯著（P＜0.01），且模型的失擬項(xiàng)（P＞0.05）不顯著，該模型可在各因素的水平范圍內(nèi)應(yīng)用于乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料552H工藝。通過擬合并估計(jì)出二次響應(yīng)面回歸模型各顯著項(xiàng)的系數(shù)，并進(jìn)行蛋白含量及增加率最高時(shí)的最佳工藝參數(shù)預(yù)測，其結(jié)果為：發(fā)酵時(shí)間48 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5，發(fā)酵溫度30℃，接種量3%，此時(shí)有較高的蛋白含量（20.87%）及其增加率（8.22%）。

2.5.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

為了進(jìn)一步檢驗(yàn)經(jīng)過響應(yīng)面設(shè)計(jì)試驗(yàn)所獲得的模型及其預(yù)測的最佳工藝條件的可靠性，在最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，并重復(fù)5次，結(jié)果及統(tǒng)計(jì)分析如表6所示：對(duì)于酵母固態(tài)發(fā)酵551H及552H，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與預(yù)測結(jié)果差異性均不顯著（P＞0.05）,因此，模型預(yù)測的最佳工藝參數(shù)適合實(shí)際應(yīng)用。

3 結(jié)論

對(duì)于乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料551H及552H的發(fā)酵時(shí)間、固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值、發(fā)酵溫度、接種量等工藝參數(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)地研究，得到如下結(jié)論：

①在前期各因素對(duì)于固態(tài)發(fā)酵的影響試驗(yàn)中，發(fā)酵時(shí)間、固態(tài)培養(yǎng)基組成、發(fā)酵溫度、接種量以及固態(tài)培養(yǎng)基的種類顯著影響著乳酸菌對(duì)于這兩種飼料固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)品的蛋白含量及其增加率。

②對(duì)于固態(tài)發(fā)酵551H，確定各種因素的最高與最低水平為發(fā)酵時(shí)間12～32 h、固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5～4、發(fā)酵溫度25～30 ℃、接種量3%～10%；對(duì)于固態(tài)發(fā)酵552H，確定各種因素的最高與最低水平為發(fā)酵時(shí)間12～48 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5～4，發(fā)酵溫度25～30℃，接種量3%～10%。

表2 乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料551H響應(yīng)面設(shè)計(jì)與結(jié)果

表3 乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料551H優(yōu)化試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

表4 乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料552H響應(yīng)面設(shè)計(jì)與結(jié)果

表5 乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料552H優(yōu)化試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

③通過響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)統(tǒng)計(jì)分析得到可靠性較高的二次響應(yīng)面回歸模型，并預(yù)測最佳工藝參數(shù)：對(duì)于固態(tài)發(fā)酵551H，發(fā)酵時(shí)間27 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值2.125，發(fā)酵溫度25℃，接種量10%；對(duì)于固態(tài)發(fā)酵552H，發(fā)酵時(shí)間48 h，固態(tài)培養(yǎng)基組成/固液比值1.5，發(fā)酵溫度30℃，接種量3%，驗(yàn)證試驗(yàn)證明該參數(shù)可行。

因此，該研究結(jié)果將為工業(yè)化乳酸菌固態(tài)發(fā)酵仔豬配合飼料的工藝提供試驗(yàn)與理論支撐，但是仍需要進(jìn)行放大試驗(yàn)、中試等進(jìn)一步研究，以便更好地應(yīng)用實(shí)際生產(chǎn)。