崔繼鵬，徐 源，武秋穎，范永山

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棉籽殼與麥粒配比對(duì)秀珍菇原種質(zhì)量的影響

崔繼鵬，徐 源，武秋穎，范永山

（唐山師范學(xué)院 生命科學(xué)系，河北 唐山 063000）

探究棉籽殼與麥粒配比對(duì)秀珍菇原種質(zhì)量的影響。結(jié)果表明，在麥粒培養(yǎng)基內(nèi)添加20%-25%干重比例的棉籽殼之后，菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)滿培養(yǎng)基的時(shí)間都沒(méi)有顯著變化，但菌絲生長(zhǎng)速度提高62%，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基的時(shí)間縮短6~8 d，而最佳接種菌齡則延長(zhǎng)2.6倍。在原種培養(yǎng)基中適當(dāng)添加麥?？稍黾泳z生長(zhǎng)速度，適當(dāng)添加棉籽殼可延長(zhǎng)最佳接種菌齡。

秀珍菇；原種培養(yǎng)基；菌種質(zhì)量；棉籽殼與麥粒配比

隨著食用菌的食用價(jià)值和藥用價(jià)值的逐步開發(fā)，市場(chǎng)需求量逐年增加，制種質(zhì)量成為制約食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要一環(huán)。食用菌的原種是由母種在原種培養(yǎng)基中擴(kuò)繁獲得的菌種，原種轉(zhuǎn)接至栽培種培養(yǎng)基中則得到栽培種，即生產(chǎn)用菌種，因此原種對(duì)保持菌種質(zhì)量起到承上啟下的關(guān)鍵作用，決定了食用菌制種的成敗及所制菌種的質(zhì)量[1]。采用棉籽殼制作原種培養(yǎng)基具有發(fā)菌快、適應(yīng)期短、制作工序簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但培養(yǎng)基質(zhì)間空隙小，氧氣不充足，使得原種菌絲在后期生長(zhǎng)緩慢，不利于農(nóng)業(yè)的大規(guī)模使用[2]。近年來(lái)將麥粒、大豆、玉米等用作平菇原種培養(yǎng)基的制作，麥粒培養(yǎng)基具有種量少、菌絲恢復(fù)快、菌絲萌發(fā)時(shí)間短和生長(zhǎng)快速等優(yōu)點(diǎn)，取得較好的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益[3]。但麥粒培養(yǎng)基在菌絲生長(zhǎng)過(guò)程易導(dǎo)致菌絲過(guò)早成熟，老化時(shí)間提前，原種的儲(chǔ)藏有效期大大縮短，這使得栽培種接種時(shí)間無(wú)法掌控。

秀珍菇（）質(zhì)地細(xì)膩，鮮美可口，在全國(guó)各地都有廣泛栽培[4]。但由于品種更新緩慢，目前的主栽品種間親緣關(guān)系較近，已經(jīng)出現(xiàn)了顯著的菌種退化和老化現(xiàn)象，嚴(yán)重制約了秀珍菇產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[5]。另外，秀珍菇的出菇期主要在夏季，對(duì)菌種質(zhì)量的要求顯著高于春秋季出菇的食用菌品種。因此，為了提高秀珍菇原種的質(zhì)量，防止菌種的退化和老化，本試驗(yàn)通過(guò)探索棉籽殼和麥粒配比對(duì)秀珍菇原種質(zhì)量的影響規(guī)律，為秀珍菇生產(chǎn)過(guò)程中的菌種質(zhì)量提供技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 食用菌品種

秀珍菇71，由唐山師范學(xué)院食用菌育種和遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)室保存。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備

麥粒提前用自來(lái)水浸泡12 h，開水煮至麥粒內(nèi)部無(wú)白心、不開花，背陰晾曬至麥粒表面無(wú)水漬、有彈性且不粘手。提前將棉籽殼按1:1加水混勻，堆30 min，然后按照料水比1:1.2-1.5補(bǔ)加水翻勻至濕度65%左右。將秀珍菇71的母種菌株接至PDA平板內(nèi)，27 ℃恒溫培養(yǎng)，為定量接種做準(zhǔn)備。

1.3 原種培養(yǎng)基配方及制備

以棉籽殼培養(yǎng)基（CK-1）和麥粒培養(yǎng)基（CK-2）為對(duì)照，按照麥粒與棉籽殼配比分別為1?1（A）、1?3（B）、3?1（C）、1?2（D）、2?1（E）、1?4（F）和4?1（G）制作原種培養(yǎng)基作為試驗(yàn)處理，分析麥粒與棉籽殼配比對(duì)秀珍菇原種生長(zhǎng)和質(zhì)量的影響。每個(gè)配方設(shè)置5次重復(fù)，使用聚丙烯塑料袋裝料，每袋裝濕料體積約600 cm3，高壓滅菌鍋中121 ℃滅菌2 h，無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)冷卻至室溫待用[2]。

1.4 生長(zhǎng)速度的測(cè)定

PDA平板布滿菌絲后，在無(wú)菌條件下使用半徑8 mm的打孔器在PDA平板中取等量菌盤，每袋原種培養(yǎng)基接種3個(gè)菌盤，置27 ℃下恒溫避光培養(yǎng)。將每袋培養(yǎng)基按體積自上而下平均分為6個(gè)區(qū)（Q1-Q6），每區(qū)體積約100 cm3，從每組菌絲長(zhǎng)至第二區(qū)時(shí)開始測(cè)量每層菌絲生長(zhǎng)速度、平均菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲生長(zhǎng)速度提升率。

每層菌絲生長(zhǎng)速度=每層長(zhǎng)滿菌絲的體積(cm3)/每層長(zhǎng)滿所用時(shí)間(h)。

平均菌絲生長(zhǎng)速度為各層菌絲生長(zhǎng)速度的平均值。

菌絲生長(zhǎng)速度提升率%=(實(shí)驗(yàn)組平均生長(zhǎng)速度-對(duì)照組平均生長(zhǎng)速度)/對(duì)照組平均生長(zhǎng)速度×100%。

1.4 最佳接種菌齡的測(cè)定

本文采用吐黃水和菌絲萎縮、出現(xiàn)原基作為菌種開始衰老的主要特征[6]。在試驗(yàn)中，將菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基后繼續(xù)在相同條件下培養(yǎng)至剛剛出現(xiàn)菌種衰老特征之前的時(shí)間（d）作為原種的最佳接種菌齡。測(cè)定各組的最佳接種菌齡，分析麥粒和棉籽殼配比對(duì)最佳接種菌齡的影響。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析方法

利用IBM SPSS Statistics 22軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長(zhǎng)速度

圖1為各組原種培養(yǎng)基內(nèi)Q2~Q6層的菌絲生長(zhǎng)速度。

圖1 各組原種培養(yǎng)基分層菌絲生長(zhǎng)速度

從圖1可見，除了A組（麥粒:棉籽殼=1:1）外，其它各組培養(yǎng)基中菌絲均為越向下生長(zhǎng)速度越低，其中CK-1（棉籽殼）到最下部的第6區(qū)時(shí)，生長(zhǎng)速度已下降到0.5 cm3/h以下，非常不利于菌絲的生長(zhǎng)。A組各區(qū)之間的菌絲生長(zhǎng)速度比較接近，C組（麥粒:棉籽殼=3:1）和G組（麥粒:棉籽殼=4:1）到第4區(qū)后菌絲生長(zhǎng)速度仍顯著高于其它各組試驗(yàn)，說(shuō)明在棉籽殼培養(yǎng)基中添加一定比例的麥粒，可以增加菌絲在培養(yǎng)基下部的生長(zhǎng)速度。

圖2 各組原種培養(yǎng)基平均菌絲生長(zhǎng)速度

圖2為各組的菌絲平均生長(zhǎng)速度。從圖2可見，CK-2（麥粒）、C（麥粒:棉籽殼=3:1）和G（麥粒:棉籽殼=4:1）組的菌絲生長(zhǎng)速度平均為1.53 cm3/h，顯著高于以CK-1為代表的其它各組試驗(yàn)的平均菌絲生長(zhǎng)速度0.94 cm3/h，菌絲生長(zhǎng)速度提高了62%。

2.2 菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基時(shí)間

圖3 各組原種培養(yǎng)基長(zhǎng)滿培養(yǎng)基時(shí)間

在接種初期，以棉籽殼為主的原種培養(yǎng)基內(nèi)的菌絲粗壯短密、吃料快，而以麥粒為主的原種培養(yǎng)基菌絲纖細(xì)稀疏，生長(zhǎng)不均勻，但長(zhǎng)至菌袋的第三區(qū)后菌絲逐漸轉(zhuǎn)密，各組菌絲的吃料情況相差不大。如圖3所示，各組菌絲在接種第2 d均開始萌發(fā)，13.3~24.7 d后長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。需時(shí)最短的是CK-2（麥粒）、C（麥粒:棉籽殼=3:1）和G（麥粒:棉籽殼=4:1），13~14 d即長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。需時(shí)最長(zhǎng)的是D（麥粒:棉籽殼=1:2）和E（麥粒:棉籽殼=2:1），需23~25 d長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。CK-1（棉籽殼）、A（麥粒:棉籽殼=1:1）、B（麥粒:棉籽殼=1:3）和F（麥粒:棉籽殼=1:4），則需19~21 d長(zhǎng)滿培養(yǎng)基。該試驗(yàn)結(jié)果表明，菌絲生長(zhǎng)速度顯著依賴于制備原種培養(yǎng)基所用的原料，以麥粒為主要原料優(yōu)于以棉籽殼為主要原料。

2.3 最佳接種菌齡

圖4 各組原種培養(yǎng)基最佳接種菌齡

從圖4可見，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基后繼續(xù)在相同條件下培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CK-1（棉籽殼）、B（麥粒:棉籽殼=1:3）、D（麥粒:棉籽殼=1:2）和F（麥粒:棉籽殼=1:4）長(zhǎng)滿培養(yǎng)基7.3 d后即出現(xiàn)菌絲扭結(jié)現(xiàn)象，CK-2（麥粒）也在7.9 d時(shí)出現(xiàn)吐黃水現(xiàn)象，而E（麥粒:棉籽殼=2:1）在15.5 d時(shí)才出現(xiàn)吐黃水現(xiàn)象，A（麥粒:棉籽殼=1:1）、C（麥粒:棉籽殼=3:1）和G（麥粒:棉籽殼=4:1）直到19.1 d時(shí)才出現(xiàn)吐黃水現(xiàn)象。該試驗(yàn)結(jié)果表明，以棉籽殼為主料的原種培養(yǎng)基容易出現(xiàn)菌絲扭結(jié)甚至出現(xiàn)原基的現(xiàn)象，而以麥粒為主料的原種培養(yǎng)基易出現(xiàn)吐黃水現(xiàn)象。當(dāng)麥粒和棉籽殼以適當(dāng)?shù)谋壤旌虾罂梢燥@著減少菌絲的衰老時(shí)間，提高菌種的最佳接種菌齡。

3 討論和結(jié)論

棉籽殼培養(yǎng)基相對(duì)與麥粒培養(yǎng)基有兩大優(yōu)點(diǎn)，一是價(jià)格較低廉，便于擴(kuò)大培養(yǎng)；二是棉籽殼中可供菌絲吸收利用的營(yíng)養(yǎng)成份平衡適中、基質(zhì)物理性狀穩(wěn)定，菌絲體萌發(fā)、生長(zhǎng)平穩(wěn)，對(duì)大規(guī)模農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的影響較小。但由于棉籽殼基質(zhì)結(jié)構(gòu)較緊密，培養(yǎng)基中的氧氣含量較低，隨著菌絲向培養(yǎng)基內(nèi)部生長(zhǎng)，氧氣缺乏而導(dǎo)致菌絲生長(zhǎng)緩慢，并且棉籽殼的碳氮比較易使菌絲過(guò)早出現(xiàn)菌絲扭結(jié)，甚至出現(xiàn)菇蕾，表現(xiàn)出栽培種特征，此時(shí)的菌絲體不適合再作為原種。麥粒培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)豐富，含有較多可被菌絲直接利用的全糖和小分子蛋白；并且麥粒培養(yǎng)基具有較為疏松的結(jié)構(gòu)，通氣良好，因此菌絲生長(zhǎng)速度優(yōu)于棉籽殼培養(yǎng)基[7]。但由于麥粒中可供直接吸收利用的可溶性養(yǎng)分較多，菌絲在前期生長(zhǎng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)成份的吸收較快，致使前期菌絲生長(zhǎng)過(guò)快、纖細(xì)稀疏，單位培養(yǎng)料內(nèi)菌絲量較少，若此時(shí)用于實(shí)際生產(chǎn)中，菌絲易被分解消亡，對(duì)環(huán)境抗逆性較差，容易感染病害；在菌絲生長(zhǎng)后期由于麥粒碳氮比易使菌絲過(guò)早成熟衰老，出現(xiàn)菌絲水解，菌絲內(nèi)容物流出，呈現(xiàn)“吐黃水”現(xiàn)象[8]。

添加20%-25%干重棉籽殼的麥粒培養(yǎng)基（C組和G組）在菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)滿培養(yǎng)基時(shí)間和最佳接種菌齡等方面均顯著優(yōu)于其它各組培養(yǎng)基，菌絲生長(zhǎng)速度相對(duì)于CK-1（棉籽殼）增長(zhǎng)62%，達(dá)到1.5 cm3/h，菌絲長(zhǎng)滿原種培養(yǎng)基的時(shí)間僅需13~14 d。最佳接種菌齡則達(dá)到19 d，是以麥粒作為培養(yǎng)基和以棉籽殼為主料的培養(yǎng)基的2.6倍。原種培養(yǎng)基配方中棉籽殼干重比例超過(guò)2/3后，棉籽殼本身的碳氮比使得秀珍菇原種在保存期間出現(xiàn)菌絲扭結(jié)現(xiàn)象，降低原種的質(zhì)量，且由于棉籽殼基質(zhì)間隙較小，菌絲生長(zhǎng)速度隨棉籽殼比例增加而下降。

在原種培養(yǎng)基中適當(dāng)添加麥?？杉哟缶z生長(zhǎng)速度，適當(dāng)添加棉籽殼可延長(zhǎng)最佳接種菌齡。棉籽殼在秀珍菇的菌絲生長(zhǎng)過(guò)程中加入量不宜過(guò)多，與麥粒一起使用，可使菌絲生長(zhǎng)效果達(dá)到最優(yōu)。從經(jīng)濟(jì)性來(lái)看，適當(dāng)添加棉籽殼，能大大降低原種生產(chǎn)成本，具有良好的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。

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Effects of the Ratio of Cottonseed Husk to Wheat Grain on the Secondary Spawn Quality of Pleurotus Geesteranus

CUI Ji-peng, XU Yuan, WU Qiu-ying, FAN Yong-shan

(Department of Life Science, Tangshan Normal University, Tangshan 063000, China)

Effects of the ratio of cottonseed husk to wheat grain on the secondary spawn quality ofwere explored. Results have shown that adding 20% - 25% cottonseed husk into the wheat grain in the secondary spawn medium has no significant difference from the wheat grain medium in the mycelium growth rate and the culture time of medium fully-filled by mycelia, but the mycelium growth rate has increased 62% and the culture time of medium fully-filled by mycelia has shortened by 6 ~ 8 days than the cottonseed husk medium. The best inoculation age has also increased by 2.6 times than the wheat grain medium and the medium with cottonseed husk as main ingredient. The results have also proposed that proper addition of wheat grains in the secondary spawn medium ofcan increase the growth rate of mycelium, and proper addition of cottonseed husks can increase the best inoculation age of the original species.

; secondary spawn medium; culture quality; ratio of cottonseed husk to wheat grain

S646

A

1009-9115(2018)06-0073-04

10.3969/j.issn.1009-9115.2018.06.017

唐山市科技計(jì)劃項(xiàng)目（17120204a），唐山師范學(xué)院科技發(fā)展項(xiàng)目（2016C05）

2018-06-27

2018-07-10

崔繼鵬（1995-），男，河北邯鄲人，本科生，研究方向?yàn)樯锛夹g(shù)。

（責(zé)任編輯、校對(duì)：李春香）