張貝葉 趙晶晶 高榮 封宏哲

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)海洋學(xué)院，河北滄州 061100)

金魚(yú)(由鯽魚(yú)改良而成的觀賞魚(yú)類的統(tǒng)稱)易于飼養(yǎng)，能美化環(huán)境，很受人們的喜愛(ài)，是具有中國(guó)特色的觀賞魚(yú)。但是飼養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的常見(jiàn)疾病如不及時(shí)治療，會(huì)造成損失。金魚(yú)感染小瓜蟲(chóng)嚴(yán)重時(shí)，魚(yú)的全身皮膚和魚(yú)鰭都會(huì)布滿白點(diǎn)并被白色黏液覆蓋。患水霉病魚(yú)體表面會(huì)長(zhǎng)有白色或者灰黑色的絨毛狀或線狀物質(zhì)。福爾馬林是40%左右甲醛的水溶液，具刺激性氣味，有凝固蛋白質(zhì)作用，能抑制病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)和浮游生物，可治療多種常見(jiàn)魚(yú)病[1]。本文研究甲醛對(duì)金魚(yú)的急性毒性作用，通過(guò)獲得的數(shù)據(jù)求得半致死濃度和安全濃度，可為亞急性、慢性毒性試驗(yàn)提供參考資料，通過(guò)觀察的毒性癥狀可為臨床檢測(cè)毒性提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)

所用金魚(yú)為實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖的草種魚(yú)，體形近似鯽魚(yú)，身體側(cè)扁呈紡錘形，有背鰭，胸鰭呈三角形，長(zhǎng)而尖。野性略存，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)藥物有跳缸的可能。挑選健康且狀態(tài)一致的金魚(yú)進(jìn)行一周的馴養(yǎng)[2]。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

甲醛(分析純)。

1.3 實(shí)驗(yàn)工具

若干個(gè)容量、顏色相同的塑料盆、塑料桶，移液管、洗耳球、玻璃棒、鑷子、電子秤、大小燒杯、溫度計(jì)若干、精密pH試紙、標(biāo)簽紙。

1.4 實(shí)驗(yàn)條件

每個(gè)盆中為4L曝氣3d的自來(lái)水，水溫：18℃，pH：7，溶解氧控制在5mg/L以上。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前隨機(jī)選取10條健康、狀態(tài)相近的金魚(yú)，進(jìn)行體長(zhǎng)、體重的測(cè)量與記錄，得出均值。

在正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前先進(jìn)行為期2d的預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定正式實(shí)驗(yàn)濃度范圍。預(yù)實(shí)驗(yàn)濃度范圍通過(guò)參考相關(guān)急性毒性實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)確定[3]，共設(shè)置6個(gè)梯度組(15ppm、20ppm、25ppm、30ppm、40ppm和50ppm)和1個(gè)對(duì)照組，正式實(shí)驗(yàn)的藥物濃度按照等對(duì)數(shù)間距計(jì)算，均設(shè)置2個(gè)重復(fù)的平行實(shí)驗(yàn)，做好標(biāo)簽標(biāo)記。

實(shí)驗(yàn)藥液每24h更新一次，防止藥物降解，實(shí)驗(yàn)期間觀察水質(zhì)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)魚(yú)的游泳狀態(tài)、呼吸、體表黏液等表征并記錄，同時(shí)記錄每個(gè)組別實(shí)驗(yàn)魚(yú)的死亡時(shí)間及數(shù)量。通過(guò)半對(duì)數(shù)坐標(biāo)和直線內(nèi)插法求得甲醛對(duì)金魚(yú)的半致死濃度(LC50)，進(jìn)而通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算出安全濃度。實(shí)驗(yàn)期間不投餌。

半致死濃度計(jì)算公式(改進(jìn)寇氏法)：

LC50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)]

其中：

Xm：最大劑量對(duì)數(shù)；

p：各組死亡率；

i：相鄰兩劑量比值(高劑量為分子)的對(duì)數(shù)。

安全濃度計(jì)算公式[4]：

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)計(jì)算得：實(shí)驗(yàn)魚(yú)平均體長(zhǎng)：4.72cm，平均質(zhì)量：3.77g。

由表1預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果可以得出：正式實(shí)驗(yàn)濃度梯度可將范圍選擇在20～40mg/L。

表1 預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果

正式實(shí)驗(yàn)預(yù)備設(shè)計(jì)6個(gè)濃度梯度，藥物濃度按照等對(duì)數(shù)間距計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 正式實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果

經(jīng)計(jì)算，甲醛在24h、48h、96h的半致死濃度見(jiàn)表3。

表3 甲醛毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

甲醛濃度為40mg/L時(shí)，15min之后實(shí)驗(yàn)魚(yú)開(kāi)始有浮頭現(xiàn)象，2h后有明顯體表黏液，對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍，游動(dòng)偏向一側(cè)，或有明顯跳缸現(xiàn)象，3h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)死亡，24h死亡率為100%。甲醛濃度為20mg/L時(shí)，96h內(nèi)未出現(xiàn)死亡情況。

在甲醛濃度為22.98mg/L以及20mg/L的組別中，9h內(nèi)未出現(xiàn)不適應(yīng)的反應(yīng)。甲醛會(huì)消耗水中氧氣并且損害魚(yú)鰓組織，刺激分泌黏液阻塞呼吸甚至對(duì)鰓部造成腐蝕，同時(shí)會(huì)刺激魚(yú)的黏液、表皮蛋白質(zhì)凝固。實(shí)驗(yàn)魚(yú)在不同濃度上面受到不同程度的刺激：甲醛在濃度較高時(shí)對(duì)金魚(yú)的生命活動(dòng)表現(xiàn)出抑制作用，實(shí)驗(yàn)魚(yú)的呼吸、擺尾頻率降低；在濃度較低時(shí)實(shí)驗(yàn)魚(yú)的呼吸、擺尾頻率明顯加快，表現(xiàn)出對(duì)藥物的毒性及改變環(huán)境的抵抗。

3 討論

甲醛的安全濃度是7.94mg/L，在實(shí)際使用時(shí)對(duì)濃度要求很小、時(shí)間短不易把控，因此不適合大范圍池塘潑灑，可適當(dāng)濃度浸浴來(lái)治療魚(yú)病。使用時(shí)注意，不同的條件時(shí)金魚(yú)對(duì)甲醛的耐受性可能不同，如果不確定適用量時(shí)可以低濃度試用，觀察魚(yú)的反應(yīng)，如發(fā)現(xiàn)呼吸頻率、擺尾頻率出現(xiàn)明顯變化，需及時(shí)將其轉(zhuǎn)移到無(wú)藥物添加的水中，以免發(fā)生進(jìn)一步的中毒癥狀。在使用甲醛治療魚(yú)病時(shí)要將溶解氧控制在5mg/L以上，以防甲醛消耗氧氣造成魚(yú)缺氧死亡。