王超 武振東

【摘 要】

目的：探討FGA基因座突變產(chǎn)生的原因。方法：提取案例中孩子和父親兩份血樣DNA，通過(guò)PCR擴(kuò)增和毛細(xì)管電泳得到STR基因分型。發(fā)現(xiàn)突變后加做遺傳標(biāo)記，同時(shí)檢測(cè)性染色體基因座分型。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)FGA基因座發(fā)生1步突變，計(jì)算親權(quán)指數(shù)大于10000，性染色體分型符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。結(jié)論：鑒定人員應(yīng)詳細(xì)記錄具體突變情況、被鑒定人的民族等信息，以實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)共享。

【關(guān)鍵詞】 法醫(yī)遺傳學(xué)；滿族；FGA基因座；突變

【中圖分類號(hào)】R715 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】

A 【文章編號(hào)】1005-0019（2018）21-233-01

Analysis of a mutation in the FGA locus of Manchu in Liaoning area

Abstract Objective： Explore the causes of mutations in the FGA locus. Methods：Two blood samples were taken from the child and father in the case， and STR genotyping was obtained by PCR amplification and capillary electrophoresis. After the mutation was found， the genetic marker was added and the sex chromosome locus typing was detected. Results：A 1-step mutation was found in the FGA locus， and the calculated parental index was greater than 10，000. The sex chromosome typing was consistent with Mendelian inheritance. Conclusion：The appraisers should record in detail the specific mutations， the ethnicity of the identified person， and other information to achieve data sharing.

Key words：Forensic genetics； Manchu； FGA locus； Mutation

目前，STR基因座已被廣泛應(yīng)用于親子鑒定和個(gè)體識(shí)別，而相關(guān)的鑒定實(shí)踐顯示，越來(lái)越多的STR變異現(xiàn)象被人們發(fā)現(xiàn)，文獻(xiàn)報(bào)道的不同地區(qū)不同民族的STR基因座頻率有不近相同。本實(shí)驗(yàn)室在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)一例少數(shù)民族基因突變現(xiàn)象，遂對(duì)此現(xiàn)象做一分析，以期為少數(shù)民族突變數(shù)據(jù)增加信息。

1 材料和方法

1.1 基本案情 曾某，男，滿族，因申報(bào)戶口需要，要求對(duì)其與女兒進(jìn)行親權(quán)鑒定。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 使用Chelex-100法提取曾某與其女兒兩份血樣基因座DNA。

1.2.2 擴(kuò)增與分析 使用GoldeneyeRRDNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑（基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司）復(fù)合擴(kuò)增Amelogenin 基因座和19個(gè)STR基因座（）。發(fā)現(xiàn)FGA基因座存在突變后，加測(cè)MicroreaderTM 23sp-D ID System試劑（閱微基因技術(shù)有限公司）和GoldeneyeRRDNA身份鑒定系統(tǒng)17X試劑（基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司），擴(kuò)增體系和熱循環(huán)反應(yīng)按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，擴(kuò)增產(chǎn)物使用AB 3130XL（美國(guó)AB公司）遺傳分析儀電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物，GeneMapper ID-X v1.2軟件分析得到分型結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 常染色體檢驗(yàn)結(jié)果 共檢測(cè)常染色體38個(gè)基因座和性別基因座，檢驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照（9947A、F312）分型正確，陰性對(duì)照未見(jiàn)特異性譜帶，檢材分型如下，分型結(jié)果按SF/Z JD0105001-2016《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》中方法計(jì)算累積親權(quán)指數(shù)。

2.2 性染色體檢驗(yàn)結(jié)果 使用DXS67

95等16個(gè)X染色體STR基因座和Amelogenin基因座進(jìn)行檢測(cè)，檢驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照9948分型正確，陰性對(duì)照未見(jiàn)特異性譜帶，孩子各基因座等位基因可從曾某的分型中找到來(lái)源，檢材分型如下。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析 常染色體STR遵循孟德?tīng)栠z傳定律，生物學(xué)父親會(huì)將其每個(gè)基因座上一對(duì)等位基因中的一個(gè)隨機(jī)遺傳給孩子，即孩子每個(gè)基因座上一對(duì)等位基因中的一個(gè)來(lái)自生父。根據(jù)上述分型結(jié)果，除FGA基因座外，孩子各基因座等位基因可從曾某的分型中找到來(lái)源。在FGA基因座，孩子的基因型為“22”，曾某的基因型為“23，24”，曾某不能提供給孩子必需的等位基因“22”，不符合遺傳規(guī)律。按照《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》SF/Z JD0105001-2016中不符合遺傳規(guī)律情形時(shí)親權(quán)指數(shù)的計(jì)算方法，F(xiàn)GA基因座的親權(quán)指數(shù)為0.0030。根據(jù)中國(guó)滿族群體調(diào)查數(shù)據(jù)[1]和漢族群體調(diào)查數(shù)據(jù)[2]，對(duì)曾某與孩子檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，累積親權(quán)指數(shù)為1.65×1012。

3 討論

在親權(quán)鑒定實(shí)踐中，一般認(rèn)為發(fā)現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上STR基因座違反孟德?tīng)栠z傳定律時(shí)才得出排除結(jié)論。若只有1個(gè)或2個(gè)STR基因座違反孟德?tīng)栠z傳規(guī)律時(shí)，為避免因STR基因突變導(dǎo)致錯(cuò)誤地排除親子關(guān)系，應(yīng)增加遺傳標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)所測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，以排除或認(rèn)定親子關(guān)系。本案例在應(yīng)用GoldeneyeRDNA檢測(cè)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)突變后，及時(shí)增加MicroreaderTM 23sp-D檢測(cè)系統(tǒng)，將常染色體檢測(cè)系統(tǒng)增加至39個(gè)基因座，同時(shí)又補(bǔ)充檢測(cè)性別染色體檢測(cè)系統(tǒng)，以獲取更多的遺傳信息。

研究表明，STR基因座發(fā)生突變的主要機(jī)制是由于復(fù)制滑鏈錯(cuò)配，即在DNA復(fù)制過(guò)程中，DNA聚合酶發(fā)生滑脫，重復(fù)序列易堿基錯(cuò)配，形成一個(gè)或數(shù)個(gè)重復(fù)序列的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，如繼續(xù)復(fù)制，就會(huì)出現(xiàn)新生鏈加長(zhǎng)或縮短的現(xiàn)象[3]。本案例中FGA基因座突變?yōu)闇p少一個(gè)重復(fù)單位，這在STR基因座突變中比較少見(jiàn)，大多數(shù)研究結(jié)果顯示STR基因座突變中重復(fù)序列的增加比減少更為常見(jiàn)[4，5]。通常STR基因座核心序列重復(fù)次數(shù)越多，基因的突變率越高。突變率最高的基因座，同時(shí)也是多態(tài)性最高的基因座，具有更多的等位基因。目前，常用的STR基因座突變率在0.1%-0.5%。FGA等位基因的范圍在12.2-51.2，觀察到的等位基因數(shù)目達(dá)80個(gè)，共有69種變異[6]，突變率在0.2%-0.22%之間。根據(jù)蔡穎[7]等研究，中國(guó)不同地區(qū)同一STR基因座突變率無(wú)顯著差異，但中國(guó)人群的突變數(shù)據(jù)中僅個(gè)別標(biāo)明了研究的民族，民族也是STR基因座突變率差異的原因之一。所以為了更全面的了解中國(guó)人群中STR基因座的突變規(guī)律，鑒定人員在實(shí)際工作中應(yīng)多加注意，詳細(xì)記錄具體的突變情況、被鑒定人的民族等信息，實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)共享。

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