張光亞，安 妮，吳建輝

(1.中華全國供銷合作總社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；2.泰王國猜帕塔納基金會，泰國 曼谷 10700；3.云南物產(chǎn)進出口集團股份有限公司，云南 昆明 650011)

層迭靈芝Ganoderma lobatum，是靈芝科（Ganodermataceae） 靈芝屬 （Ganoderma） 的重要種之一。別名裂迭靈芝、層迭樹舌。模式種產(chǎn)地為美國。主要分布在中國、美國、泰國，國內(nèi)主要分布在云南、浙江、福建、廣東、海南、香港、河北等地[1-7]。2015年～2017年，在泰國猜帕納塔基金會清邁府芳縣基地，實施中國政府援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目期間，偶然發(fā)現(xiàn)1朵特大的野生層迭靈芝，結(jié)合項目中的食用菌課題，開展了人工馴化栽培研究，并獲得成功，這也引起了泰國科教部門的重視，并受到泰國王室的贊揚和肯定?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 野生層迭靈芝發(fā)現(xiàn)的地理位置與生態(tài)環(huán)境

2015年2月23日，在基地內(nèi)小山頂侍衛(wèi)樓住房旁30 m處的一顆腐朽的闊葉樹支干上，發(fā)現(xiàn)1朵大靈芝。經(jīng)初步認(rèn)定，為靈芝科、靈芝屬的層迭靈芝（Ganoderma lobatum），與現(xiàn)在廣泛栽培的靈芝為同屬的不同種。

第2天將生長于樹林中的層迭靈芝子實體完好地采下，并將靈芝根部的腐木基質(zhì)取下裝入小塑料袋內(nèi)帶回研究。經(jīng)測量，層迭靈芝子實體生長在離地面高約1.5 m的樹木支干處，該樹生長于北緯19°57′55″，東經(jīng) 99°9′31″，海拔約 579 m 的地方。形態(tài)特征（圖1～圖5）：層迭3層，最上層子實體的芝蓋直徑為22 cm×18 cm，厚0.8 cm～1.2 cm，第二層子實體芝蓋不規(guī)則，形如人像，寬約10 cm，厚1.4 cm，第三層的子實體芝蓋直徑為16.5 cm×8.5 cm，厚1.5 cm。

圖1 層迭靈芝的生長地點

圖2 采下的層迭靈芝標(biāo)本

圖3 摘取層迭靈芝子實體后的枯樹

圖4 層迭靈芝子實體生長的枯樹腐木基質(zhì)

圖5 層迭靈芝生長的濃密樹林

所采集的標(biāo)本，于2015年12月2日經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所真菌分類學(xué)家楊祝良研究員鑒定為：靈芝科（Ganodermataceae） 靈芝屬（Ganoderma） 層迭靈芝，拉丁學(xué)名：Ganoderma lobatum（Schwein.）G.F.Atk.，中文名：層迭靈芝。植物鑒定證明編號：KUN-2015-185。

1.2 層迭靈芝的馴化栽培

1.2.1 菌種分離與純化

層迭靈芝是靈芝屬的1個重要種，但筆者未見其栽培成功的報道。

分離所用培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g（浸出汁）、葡萄糖20 g、瓊脂20 g，水1 000 mL，pH自然。

母種分離與純化：自2月25日起，即開始了純菌種的分離培養(yǎng)。但由于這個層迭靈芝子實體生長時間太久，已完全干縮死亡，從子實體和孢子上難以分離出菌種。唯一途徑是從腐木基質(zhì)中獲得其菌種。選擇0.5 cm～1 cm大小含有大量菌絲的腐木基質(zhì)，用升汞和酒精分別消毒后，用蒸餾水沖洗，在超凈工作柜內(nèi)移入試管PDA斜面或培養(yǎng)皿平面上，在28℃～30℃的電熱培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d～7 d，培養(yǎng)基上長出濃密的白色層迭靈芝菌絲，但也發(fā)現(xiàn)綠霉、青霉、酵母等多種雜菌的菌絲。經(jīng)過多次地挑選、分離、棄雜棄劣、純化培養(yǎng)，終于獲得了層迭靈芝的純菌種，命名為泰G1號（圖6～圖10）。

1.2.2 塑料袋馴化栽培層迭靈芝

2015年5月16日，開始用木屑袋料和椴木進行層迭靈芝栽培試驗研究。

圖6 母種玻璃試管和325 mL小瓶培養(yǎng)基

圖7 分離純化的層迭靈芝母種

圖8 層迭靈芝325 mL玻璃瓶母種

圖9 層迭靈芝生產(chǎn)用750 mL玻璃瓶原種

圖10 長勢良好的層迭靈芝原種

木屑袋料栽培：培養(yǎng)基配方為木屑76%（1/3細木屑，2/3粗木屑）、細米糠14%、玉米粉8%、石膏1%、石灰0.5%、火山灰0.5%。聚乙烯塑料折角袋規(guī)格：短袋寬16.5 cm（扁寬），長31.5 cm，厚0.04 mm～0.05 mm，長袋扁寬 15 cm～17 cm，長 55 cm，厚0.04 mm～0.05 mm。菌棒制作流程為拌料、裝袋、滅菌、冷卻、接種、菌絲培養(yǎng)。栽培流程為發(fā)好菌的菌棒覆土、管理、采芝、干燥等（圖11）。

圖11 發(fā)菌培養(yǎng)的層迭靈芝泰G1號木屑菌棒

第1批泰G1號菌種采用細木屑短袋栽培，53 d現(xiàn)蕾。接種時打孔，菌絲生長速度快，故現(xiàn)蕾早；第2批泰G1號菌種采用細木屑短袋栽培，73 d現(xiàn)蕾；第3批泰G1號菌種采用2/3粗木屑和1/3細木屑短袋栽培，59 d現(xiàn)蕾。采用粗、細木屑比純細木屑提早14 d現(xiàn)蕾（圖12）。

層迭靈芝由試驗栽培進入生產(chǎn)栽培時，袋栽規(guī)格由短聚乙烯折角袋栽培改為長袋栽培。栽培試驗表明，材質(zhì)致密的木屑料栽培層迭靈芝產(chǎn)量高；培養(yǎng)料中添加玉米粉所栽培層迭靈芝菌絲粗壯，長勢良好；層迭靈芝比其他大量栽培的靈芝品種適宜溫度高2℃～3℃。

1.2.3 層迭靈芝段木馴化栽培試驗

試驗樹種為芒果木、荔枝木、龍眼木、酸角木等木質(zhì)堅硬的樹種。栽培椴木的制作：采用伐木后10 d～15 d內(nèi)，直徑8 cm～10 cm的樹木，切成長15 cm的木椴，直徑15 cm以上切成長25 cm～30 cm的木椴。用兩頭開口的，厚度為0.055 mm～0.06 mm的聚乙烯塑料袋，裝入切好的木椴，兩頭用撕裂膜帶扎緊，然后裝入常壓滅菌柜內(nèi)滅菌。滅菌后溫度降至40℃以下時，在無菌狀態(tài)下進行搶溫接種。在30℃～32℃的溫度條件下發(fā)菌培養(yǎng)。發(fā)菌培養(yǎng)80 d～95 d（具體視椴木的發(fā)菌情況而定）脫袋，然后覆土栽培（圖13～圖15）。

經(jīng)過5個批次的木屑、椴木栽培的重復(fù)試驗，均獲得大量子實體，且形狀比較穩(wěn)定。經(jīng)過馴化培

圖12 泰G1號菌種不同生長階段的子實體

圖13 剛接種的層迭靈芝泰G1號椴木菌棒

圖14 正在發(fā)菌培養(yǎng)的層迭靈芝G1椴木菌棒

圖15 培養(yǎng)好的層迭靈芝泰G1號椴木菌棒

育出的層迭靈芝子實體，幼嫩時，白邊套黑底；子實體成熟時，體態(tài)大型，剛勁有力，具有特殊的清香味，適口性強，頗受人們的歡迎。在試驗成功的基礎(chǔ)上，進行了上萬個菌棒的生產(chǎn)栽培研究，都取得理想的結(jié)果（圖16～圖19）。

圖16 椴木栽培的層迭靈芝子實體

圖17 椴木栽培的層迭靈芝子實體

圖18 科技示范苑椴木栽培層迭靈芝

圖19 科技示范苑代料栽培層迭靈芝

2 層迭靈芝泰G1號品種成分的檢測分析結(jié)果

2.1 泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的測試結(jié)果

泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的檢測報告見圖20。

圖20 泰國瑪希隆大學(xué)藥學(xué)學(xué)院商品質(zhì)量檢測中心的檢測報告

圖20結(jié)果表明，靈芝三萜含量為（0.8±0.01） % （w·w-1，n＝3，RSD＝0.79%）；靈芝多糖含量為 （1.4±0.01） % （w·w-1，n＝3，RSD＝0.83%）。樣品編號為H59-208，報告編號為RH59-105，檢測日期為2016年8月29日，送檢單位為援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目。

2.2 上海市農(nóng)科院食用菌研究所測試結(jié)果

2.2.1 靈芝三萜含量

靈芝三萜指紋圖譜見圖21。

測試結(jié)果表明，三萜含量為5.32%。

2.2.2 靈芝多糖含量

測試結(jié)果表明，靈芝多糖含量2.39%。中國藥典規(guī)定靈芝產(chǎn)品的多糖含量不得低于0.5%。

2.2.3 核苷

層迭靈芝核苷的指紋圖譜見圖22。層迭靈芝核苷種類和含量與其他靈芝品種相差較大。核苷的具體含量見表1。

由圖22和表1可以看出，層迭靈芝核苷中含有尿嘌呤、胞苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、尿苷、鳥苷、胸苷和腺苷等11種成分；而赤芝中僅含有尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、尿苷和腺嘌呤等5種成分。層迭靈芝中核苷含量除黃嘌呤（0.027 μg·mg-）1稍低于赤芝 （0.046 μg·mg-）1外，其余各核苷酸含量均遠高于赤芝。

2.2.4 層迭靈芝與其他靈芝品種三萜含量比較

圖21 靈芝三萜的指紋圖譜

圖22 層迭靈芝的核苷的指紋圖譜

表1 核苷含量測定結(jié)果

比較結(jié)果顯示，江蘇野生赤芝三萜含量為0.343%，RSD為1.240%；廣東段木栽培赤芝三萜含量為0.258%，RSD為0.821%；福建段木栽培赤芝三萜含量為0.135%，RSD為2.050%；福建段木栽培松杉靈芝三萜含量為0.237%，RSD為1.790%。

3 層迭靈芝

3.1 袋料栽培的子實體類似樹舌或無柄靈芝

袋料木屑栽培的層迭靈芝子實體，與層迭靈芝野生子實體的形象差異較大，無層迭特征，初看上去以為是樹舌或無柄靈芝。

3.2 椴木栽培的子實體具有野生層迭靈芝子實體的特征

椴木栽培的層迭靈芝子實體完全具有野生層迭靈芝子實體分層的形態(tài)，子實體大型具體見圖23，椴木栽培的子實體比代料栽培的子實體大得多，其子實體的直徑超過25 cm。

3.3 化學(xué)成分與其他靈芝品種差異極大

圖23 椴木栽培具有層疊特征的層迭靈芝子實體

據(jù)劉偉[9]研究顯示，與赤芝比較，層迭靈芝中三萜類化合物種類比赤芝少，但中等極性三萜類化合物的含量比赤芝高，糖醇、核苷、蛋白質(zhì)和氨基酸含量比赤芝豐富，赤芝中多糖含量為（2.67±0.06） %，層迭靈芝中多糖含量為（3.60±0.10） %；赤芝的蛋白質(zhì)含量為8.97%，層迭靈芝的蛋白質(zhì)含量為15.2%，是赤芝的1.7倍；赤芝中核苷含量除黃嘌呤稍高于層迭靈芝外，其余各核苷含量均遠低于層迭靈芝。赤芝必需氨基酸含量為（4.83±0.20）μg·g-1，層迭靈芝必需氨基酸含量為 （9.44±0.21）μg·g-1；赤芝氨基酸總含量為 （0.273±0.02） μg·g-1，層迭靈芝氨基酸總含量為 （0.448±0.01） μg·g-1。特別是從層迭靈芝中分離到6個三萜類化合物，其中樹舌環(huán)氧酸E和G的抗腫瘤效果較好[9]。

4 結(jié)果與討論

4.1 層迭靈芝泰G1號經(jīng)濟價值和研究價值顯著

目前，關(guān)于層迭靈芝的栽培和產(chǎn)品開發(fā)研究報道較少。層迭靈芝泰G1號與靈芝其他品種，既有很大的相似性，又有很大的差異性，因此在開發(fā)利用中有較大的互補性。層迭靈芝泰G1號品種，在生產(chǎn)栽培中表現(xiàn)出比靈芝其他品種更耐高溫、抗逆性更強以及內(nèi)含物豐富獨特的特點，值得引起重視和進一步研究。

4.2 層迭靈芝泰G1號的馴化栽培研究，展示出食用菌產(chǎn)業(yè)在國家戰(zhàn)略“一帶一路”中的廣闊前景

中國政府援泰國國王山地開發(fā)計劃二期技術(shù)合作項目，實質(zhì)上就是山區(qū)的扶貧脫貧計劃，就是“一帶一路”戰(zhàn)略的一個具體行動，受到了泰國山區(qū)農(nóng)民的熱烈歡迎和泰國政府的高度重視。2016年9月14日泰國詩琳通公主視察該項目的食用菌科技示范苑時，表現(xiàn)出了極大的興趣，她說：“非常好，泰中雙方要長期合作”，并為項目題詞“科技促民富”。

圖24 詩琳通公主視察食用菌示范苑