馬天華 遼寧省撫順市新賓滿族自治縣衛(wèi)生監(jiān)督所 （遼寧 撫順 113200）

內(nèi)容提要： 目的：探究分析旋轉(zhuǎn)恒溫箱進(jìn)行快速細(xì)菌和鑒定的實(shí)用性。方法：選取本縣人民醫(yī)院在2017年1月～2017年12月收治的懷疑沙門桿菌感染的敗血癥患者的血液標(biāo)本，經(jīng)BACTEC9120儀培養(yǎng)確定為陽(yáng)性的50株細(xì)菌為當(dāng)做臨床標(biāo)本，選取已知菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株組成模擬標(biāo)本100份，隨機(jī)分為兩組，研究組采用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進(jìn)行培養(yǎng)，對(duì)照組采用普通恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果：研究組陽(yáng)性顯示時(shí)間多在24h之內(nèi)，顯著低于對(duì)照組96h之內(nèi)（P＜0.05），兩組快速法判讀結(jié)果相同，快速法結(jié)果判讀所需時(shí)間少于常規(guī)法（P＜0.05）。結(jié)論：旋轉(zhuǎn)恒溫箱能夠減少快速細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定的時(shí)間，應(yīng)用效果理想。

隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，循證醫(yī)學(xué)得到了廣泛應(yīng)用，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行快速檢驗(yàn)并得出相應(yīng)報(bào)告越來(lái)越重要。但是傳統(tǒng)細(xì)菌增菌培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，一般在18h～38h之間，傳統(tǒng)生化鑒定判斷結(jié)果也要在16h～24h之間才能得出。采用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進(jìn)行快速細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定能夠有效減少所需時(shí)間，提高細(xì)菌快速培養(yǎng)和鑒定的效率，應(yīng)用效果理想，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC25923）、糞腸球菌（ATCC29212）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、大腸埃希菌（ATCC25922）、布魯菌（ATCC25964）。已知菌株：100株分離鑒定并保存的臨床標(biāo)本以及全國(guó)和湖南省臨床檢驗(yàn)中心微生物室間質(zhì)評(píng)下發(fā)的菌株[1]。

1.1.2 標(biāo)本來(lái)源。臨床標(biāo)本：本院在2017年1月～2017年12月收治的懷疑沙門桿菌感染的敗血癥的血液標(biāo)本，經(jīng)BACTEC9120儀培養(yǎng)確定為陽(yáng)性的50株細(xì)菌。模擬標(biāo)本：已知菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株。

1.1.3 儀器THZ-92B恒溫振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱。

1.1.4 培養(yǎng)基與生化管。選用杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)的常規(guī)血液增菌培養(yǎng)瓶，實(shí)驗(yàn)室自制TTC琥珀酸鹽血液增菌培養(yǎng)瓶（TTC瓶），按照傳統(tǒng)配方將硝酸鹽、尿素酶、七葉苷底物擴(kuò)大10倍，每管0.4mL～0.5mL之間，5.0g/L的L-苯丙氨酸配成苯丙氨酸脫氨酶，1.0g/L的色氨酸配成靛基質(zhì)[2]。

1.2 方法

1.2.1 制備模擬標(biāo)本復(fù)蘇傳代已知菌株和準(zhǔn)備菌株后，制成菌液，濃度為0.5McFarland，之后梯度稀釋為含菌濃度為10CFU/mL的菌液，將常規(guī)瓶加入正常人靜脈血，注入稀釋后菌液，置入普通恒溫箱培養(yǎng)；將分別置入旋轉(zhuǎn)恒溫箱和普通恒溫箱的兩瓶TTC瓶加入正常人靜脈血5mL，之后注入稀釋后菌液，分別在普通恒溫培養(yǎng)箱和旋轉(zhuǎn)恒溫箱進(jìn)行培養(yǎng)監(jiān)測(cè)。生化實(shí)驗(yàn)所用濃度懸液由濃度為10.McFarland的菌液配成。

1.2.2 檢出陽(yáng)性瓶。普通恒溫箱、旋轉(zhuǎn)恒溫箱分別放入已接種臨床標(biāo)本或模擬標(biāo)本培養(yǎng)。常規(guī)瓶液體變渾濁，或TTC瓶液體變紅后記錄培養(yǎng)時(shí)間[3]。

1.2.3 接種生化管。接種針挑適量菌落用常規(guī)法接種，置于普通恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)；取一滿環(huán)上述濃菌液采用快速法接種，置于普通恒溫箱和恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)；恒溫培養(yǎng)箱溫度均為36°C。

1.2.4 判讀生化管。2～6h普通培養(yǎng)快速法判讀，1～4h旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)快速法判讀，24h后常規(guī)法加入相應(yīng)試劑，陽(yáng)性七葉苷變黑色，苯丙氨酸脫氨酶變綠色，尿素酶（不加試劑）、靛基質(zhì)、硝酸鹽變紅色，陰性則不變色[4]。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結(jié)果

2.1 比較兩組培養(yǎng)箱顯示陽(yáng)性所用時(shí)間

研究組陽(yáng)性顯示時(shí)間多在24h之內(nèi)，對(duì)照組陽(yáng)性顯示時(shí)間多在96h之內(nèi)，研究組培養(yǎng)箱顯示陽(yáng)性所需時(shí)間顯著低于對(duì)照組，研究組效果顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.2 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時(shí)間

研究組快速法七葉苷4h、尿素酶1h不加試劑判讀結(jié)果，硝酸鹽、苯丙氨酸脫氨酶、靛基質(zhì)1h加入試劑判讀結(jié)果。對(duì)照組快速法七葉苷6h，尿素酶2h不加試劑判讀結(jié)果，靛基質(zhì)、硝酸鹽、苯丙氨酸脫氨酶2h加入試劑判讀結(jié)果，常規(guī)法則要16～24h培養(yǎng)后加入試劑判讀結(jié)果。研究組和對(duì)照組快速法判讀結(jié)果相同，快速法結(jié)果判讀所需時(shí)間少于常規(guī)法，研究組效果顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

3.討論

在臨床上，由于傳統(tǒng)微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果判讀耗時(shí)長(zhǎng)，醫(yī)生往往根據(jù)以往經(jīng)驗(yàn)給藥，容易產(chǎn)生耐藥菌株，影響患者病情，浪費(fèi)醫(yī)療資源。本文研究發(fā)現(xiàn)用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進(jìn)行快速細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定，效果較好，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，樹脂、琥珀酸鹽、氯化-235三苯基四氮唑（TTC）加入傳統(tǒng)培養(yǎng)瓶中與旋轉(zhuǎn)恒溫箱效果相同，但是成本降低。旋轉(zhuǎn)恒溫培養(yǎng)箱能夠使肉湯不斷流動(dòng)，為細(xì)菌提供足夠營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，同時(shí)樹脂會(huì)清除掉其代謝廢物，為培養(yǎng)細(xì)菌提供適宜環(huán)境。本文數(shù)據(jù)顯示，研究組陽(yáng)性顯示時(shí)間多在24h之內(nèi)，對(duì)照組陽(yáng)性顯示時(shí)間多在96h之內(nèi)，研究組培養(yǎng)箱顯示陽(yáng)性所需時(shí)間顯著低于對(duì)照組。因?yàn)殓晁崦摎涿妇哂谢罨饔?，伴隨細(xì)菌繁殖，培養(yǎng)基變紅色，顯示細(xì)菌生長(zhǎng)狀況。傳統(tǒng)培養(yǎng)是靜止的，肉湯不流動(dòng)，細(xì)菌生長(zhǎng)狀況難以判斷且耗時(shí)長(zhǎng)。本文研究中，最快可在6h內(nèi)旋轉(zhuǎn)恒溫箱TTC瓶培養(yǎng)細(xì)菌就會(huì)顯示陽(yáng)性結(jié)果普通恒溫箱則高于6h，旋轉(zhuǎn)恒溫箱培養(yǎng)時(shí)間短。旋轉(zhuǎn)恒溫箱中，1～4h高濃度底物和高濃度細(xì)菌懸液培養(yǎng)后就能得到結(jié)果，在普通恒溫箱培養(yǎng)中，則要1～4h才能獲得結(jié)果，并且快速法和常規(guī)法結(jié)果相同，但是快速法所需時(shí)間短。

綜上所述，旋轉(zhuǎn)恒溫箱在快速細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定中能減少所需時(shí)間，降低醫(yī)療資源消耗，效果理想。

表1. 比較兩組培養(yǎng)箱顯示陽(yáng)性所用時(shí)間(例)

表2. 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時(shí)間(h,±s)

表2. 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時(shí)間(h,±s)

組別 靛基質(zhì) 苯丙氨酸脫氨酶 七葉苷 尿素酶 硝酸鹽還原研究組 1.0±0.2 1.0±0.3 4.0±0.4 1.1±0.1 0.9±0.4對(duì)照組(快速法) 2.0±0.1 2.0±0.2 6.0±0.2 2.0±0.1 2.0±0.2對(duì)照組(常規(guī)法) 16.8±0.5 16.2±0.3 24.2±0.6 18.6±0.7 17.5±0.4 t 10.023 9.998 13.256 12.025 11.987 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05