李尚穎 陳默 張耀文 隋曉璠 孫苓苓 國夢然

中圖分類號 R917 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2018）23-3189-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.23.05

摘 要 目的：建立拆分鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏4種H1受體拮抗藥對映體的方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），選擇Chiralcel OJ-H手性色譜柱，檢測波長為230 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL/min，進樣量為20 μL；以保留時間、選擇因子和分離度為指標，考察流動相中酸堿添加劑（二乙胺）、有機改性劑的種類（乙醇、異丙醇）及其占比、甲醇等對4種藥物對映體分離的影響。結果：流動相考察結果為鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪的流動相為正己烷-乙醇（90 ∶ 10，V/V）；特非那定的流動相為正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺（89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1，V/V/V/V）；馬來酸非尼拉敏對映體的流動相為正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺（98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1，V/V/V/V）。在此條件下，4種藥物的對映體均達到完全分離，分離度分別為4.36、3.76、1.55、1.71。結論：建立的Chiralcel OJ-H手性色譜柱-HPLC法對這4種H1受體拮抗藥的選擇性良好，可用于其對映體的手性分離。

關鍵詞 Chiralcel OJ-H手性色譜柱；高效液相色譜法；H1受體拮抗藥；鹽酸西替利嗪；鹽酸異丙嗪；特非那定；馬來酸非尼拉敏；對映體

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for separating of 4 kinds of H1-receptor antagonist enantiomers as cetirizine hydrochloride， promethazine hydrochloride， terfenadine and pheniramine maleate. METHODS： HPLC method was adopted. Chiralcel OJ-H chiral column was selected. Detection wavelength was set at 230 nm； column temperature was room temperature； flow rate was 1.0 mL/min； sample size was 20 μL. Using retention time， selective factors and separation rate as indexes， the influence of acid-base additives （diethylamine）， type and ratio of organic modifiers （ethanol， isopropanol）， methanol on the separation of 4 kinds of enantiomers in mobile phase were investigated. RESULTS： The results of mobile phase investigation was the mobile phase of cetirizine hydrochloride and promethazine hydrochloride was n-hexane and ethanol （90 ∶ 10， V/V）. Mobile phase of terfenadine was n-hexane-methanol-ethanol-diethylamine （89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1， V/V/V/V）. Mobile phase of pheniramine maleate enantiomers was n-hexane-methanol-ethanol-diethylamine （98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1， V/V/V/V）. Under the condition， 4 kinds of drug enantiomers were separated completely， with separate rate of 4.36， 3.76， 1.55， 1.71. CONCLUSIONS： Established Chiralcel OJ-H chiral column-HPLC is selective for these 4 kinds of H1-receptor antagonists， and can be used for the chiral separation of the enationmers.

KEYWORDS Chiralcel OJ-H chiral column； HPLC； H1-receptor antagonists； Cetirizine hydrochloride； Promethazine hydrochloride； Terfenazine； Pheniramine maleate； Enantiomer

組胺是一種內(nèi)源性的生物活性物質(zhì)，可參與多種復雜的生理過程。外源性抗原能引起人體的過敏性反應，導致血漿滲出，出現(xiàn)局部組織紅腫，支氣管、胃腸道平滑肌收縮等過敏性癥狀[1]。H1受體拮抗藥可拮抗組胺與H1受體結合，產(chǎn)生抗過敏作用。目前，H1受體拮抗藥在臨床上主要用于治療胃潰瘍和過敏性疾病，常見的H1受體拮抗藥類藥物有鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、馬來酸非尼拉敏和特非那定等。以鹽酸西替利嗪為例，其分子中存在一對對映異構體，有關研究表明[2]，鹽酸西替利嗪異構體的藥效存在顯著差異，（+）-異構體主要用于治療風疹，（-）-異構體主要用于抗過敏治療，其單旋體用藥可以避免外消旋體用藥產(chǎn)生的副作用。為了減少對映體藥物的毒副作用，提高藥物利用度，以及控制藥物的質(zhì)量，應對手性對映體藥物進行分析和研究。

目前，常用于拆分H1受體拮抗藥的方法為毛細管電泳法與高效液相色譜法[3-5]。其中利用β-環(huán)糊精作為毛細管電泳法和高效液相色譜法的流動相添加劑或者將β-環(huán)糊精鍵合到硅膠上作為手性固定相拆分不同的H1受體拮抗藥對映體已有報道[6-8]。而纖維素類手性固定相是近幾年開始應用的固定相，因其制備簡單，手性識別能力強等優(yōu)點而被廣泛應用[9]。筆者在本研究中首次使用Chiralcel OJ-H色譜柱，其固定相是由表面涂敷有纖維素-3（4-甲基苯甲酸酯）的硅膠組成，并考察了流動相中酸堿添加劑（二乙胺）、有機改性劑的種類（乙醇、異丙醇）及其占比、甲醇等對鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏4種H1受體拮抗藥類藥物對映體分離的影響，優(yōu)化分離條件，建立這4種藥物對映體分離的方法，為后續(xù)相關藥物的對映體研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

1580高效液相色譜儀（日本Jasco公司）；Chiralcel OJ-H色譜柱（日本Daicel公司）；SPD-15C紫外檢測器（日本Shimadzu公司）；N2000色譜工作站（浙江大學智達信息有限公司）；BS1102電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸西替利嗪對照品（消旋體，批號：100660-201102，純度：99.8%）、左旋鹽酸西替利嗪對照品（批號：100659- 201102，純度：98.8%）、鹽酸異丙嗪對照品（消旋體，批號：100422-201603，純度：99.5%）、特非那定對照品（消旋體，批號：100292-201302，純度：99.4%）均購至中國食品藥品檢定研究院；馬來酸非尼拉敏對照品（消旋體，歐洲藥品質(zhì)量管理局，批號：P0850000，純度：100%）；鹽酸西替利嗪原料藥（丹東醫(yī)創(chuàng)藥品有限責任公司，批號：160310，純度：99.4%）；鹽酸異丙嗪原料藥（蘇州甫路生物科技有限公司，批號：170407，純度：99.1%）；特非那定原料藥（沈陽新馬藥業(yè)有限公司，批號：361503017，純度：99.0%）；馬來酸非尼拉敏原料藥（珠海物美科技有限公司，批號：150204，純度：99.0%）；正己烷、乙醇、異丙醇、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Chiralcel OJ-H手性色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），檢測波長為230 nm，柱溫為室溫，流速為1.0 mL/min，進樣量為20 μL，流動相根據(jù)優(yōu)化條件確定。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別稱取鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對照品適量，分別用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得4種藥物的對照品溶液，并于4 ℃下保存，備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別稱取鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏原料藥適量，分別用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的供試品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得4種藥物的供試品溶液，并于4 ℃下保存，備用。

2.2.3 左旋鹽酸西替利嗪對照品溶液的制備 稱取左旋鹽酸西替利嗪對照品適量，用乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為0.05 mg/mL的溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，即得，并于4 ℃下保存，備用。

2.3 分離條件的選擇

在前期試驗中發(fā)現(xiàn)，鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪的流動相（正己烷-乙醇）在不添加堿性添加劑時，其對映體色譜峰已經(jīng)能達到完全分離，為了保護色譜柱，故不繼續(xù)考察酸堿添加劑對這2種藥物的影響。相同條件下，特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體色譜峰峰形嚴重拖尾且未實現(xiàn)分離，改變有機改性劑的種類和占比均不能使其分離，故先考察加入酸堿添加劑（二乙胺），使其色譜峰部分分離后，繼續(xù)考察有機改性劑的種類及其占比對這4種藥物分離的影響。

2.3.1 酸堿添加劑的影響 按“2.1”項下色譜條件，以保留時間t、選擇因子α（α應>1，且α越大，選擇性越好，分離效果越好）和分離度R（R應≥1.5，且R越大，對映體的分離效果越好）為指標，考察流動相中加入0.1%二乙胺對特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的影響，二乙胺對特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的影響結果見表1（表中t1為第1個對映體峰的保留時間；t2為第2個對映體峰的保留時間，下同）。

特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體在未加入二乙胺時其色譜峰峰形嚴重拖尾且未實現(xiàn)分離（α=1，R=0），當在流動相中加入0.1%二乙胺后，特非那定對映體的α為1.30、R為1.03，馬來酸非尼拉敏對映體的α為1.12、R為0.79，均實現(xiàn)了部分分離。因此，在特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離流動相中加入0.1%二乙胺可改善其對映體的分離。

2.3.2 有機改性劑的種類對分離的影響 以正己烷為基礎溶劑，按“2.1”項下色譜條件，考察流動相中有機改性劑種類（乙醇和異丙醇）對鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的影響，有機改性劑種類對4種藥物對映體的分離影響結果見表2。

由表2可知，對于鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對映體，使用乙醇作為有機改性劑時α和R更大，因此，選擇正己烷-乙醇作為分離鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對映體的流動相；對于特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體，當以異丙醇為有機改性劑時，手性固定相對這兩種藥物均沒有選擇性，兩種藥物不能被分離。當使用乙醇為有機改性劑，特非那定對映體的R由0增加為1.03，馬來酸非尼拉敏對映體的R由0增加為0.79，兩種藥物的分離均得到明顯改善，因此，選擇正己烷-乙醇-0.1%二乙胺作為分離特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體的流動相。

2.3.3 有機改性劑的占比對分離的影響 根據(jù)上述試驗結果，按“2.1”項下色譜條件，考察流動相中乙醇占比對鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪（5%、10%、15%、20%），特非那定和馬來酸非尼拉敏（2%、5%、8%、10%）對映體分離的影響，結果見表3。

從表3中可知，隨著乙醇占比的降低，4種藥物的出峰時間均延長。當分離鹽酸西替利嗪對映體的乙醇占比從20%降低到5%時，其α和R均逐漸增加；但乙醇占比為5%時，出峰時間長且峰寬明顯增加；因此，選擇10%乙醇占比來分離鹽酸西替利嗪對映體。鹽酸異丙嗪對映體在乙醇占比為10%時，α和R達到最大；因此，選擇10%乙醇占比來分離鹽酸異丙嗪對映體。特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的情況略有不同。隨著乙醇占比的降低，這2種藥物的選擇因子呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢。特非那定對映體在乙醇占比為10%時，分離度最大（R=1.03）；因此，選擇10%乙醇占比來分離特非那定對映體。馬來酸非尼拉敏對映體在乙醇占比為2%時，分離度最大（R=1.09）。因此，選擇2%乙醇占比來分離馬來酸非尼拉敏對映體。

2.3.4 甲醇對分離的影響 在“2.3.3”項試驗結果基礎上，特非那定對映體的R=1.03，馬來酸非尼拉敏對映體的R=1.09，均小于1.5，故繼續(xù)優(yōu)化分離條件，以實現(xiàn)完全分離。據(jù)有關文獻報道[10]，甲醇的加入有利于對映體的拆分。因此，嘗試在特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的流動相中加入甲醇。結果顯示，特非那定對映體在正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺體積比為89 ∶ 9.9 ∶ 1 ∶ 0.1的條件下，獲得了最大分離度（R=1.56）；馬來酸非尼拉敏對映體在正己烷-乙醇-甲醇-二乙胺體積比為 98 ∶ 2 ∶ 0.5 ∶ 0.1時，獲得了最大分離度（R=1.61）。兩種藥物均達到了完全分離。

2.4 系統(tǒng)適用性考察

精密吸取“2.2”項下各藥物的對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件和“2.3”項下優(yōu)化后的各藥流動相組成，進樣分析。結果顯示，鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對照品溶液的R分別為4.29、3.67、1.56和1.68，4種藥物對照品溶液的高效液相色譜圖詳見圖1。鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏供試品溶液的分離度分別為4.36、3.76、1.55和1.71，4種藥物供試品溶液的高效液相色譜圖詳見圖2。

2.5 對映體洗脫順序的考察

準確預測對映異構體在高效液相色譜中的洗脫順序?qū)τ谑中运幬锏亩ㄐ院投糠治鼍哂兄匾饬x。因此，筆者以鹽酸西替利嗪為例，考察鹽酸西替利嗪對映體的洗脫順序。精密吸取“2.2.1”項下鹽酸西替利嗪對照品溶液和“2.2.3” 左旋鹽酸西替利嗪溶液，按“2.1”項色譜條件和“2.3”項下優(yōu)化后的各流動相組成，進樣分析。結果顯示，右旋鹽酸西替利嗪先被洗脫下來，左旋鹽酸西替利嗪后被洗脫下來，兩對映體分離情況詳見圖3。

3 討論

本文使用的Chiralcel OJ-H手性色譜柱固定相是由硅膠載體涂覆纖維素-3（4-甲基苯甲酸酯）制備而成，根據(jù)“三點相互作用”原理[11]，固定相上的羰基可以與對映體中的羥基、氨基形成氫鍵，與具有羰基的對映體發(fā)生偶極-偶極相互作用，與帶有羥基或氨基的對映體則可通過氫鍵發(fā)生作用；固定相上的甲基是供電子基團，引入甲基可使苯環(huán)上的電子云密度增強，使得C=O基團上的電子云密度加大，從而加強了固定相與對映體之間的相互作用。鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏的化學結構中均含有苯環(huán)、氨基或羥基等基團，可與固定相的苯基之間還能形成π-π相互作用，從而實現(xiàn)了4種H1受體拮抗藥的對映體分離。

根據(jù)本研究結果可知，鹽酸西替利嗪和鹽酸異丙嗪對映體分離效果較好。這是由于在鹽酸西替利嗪的分子結構中，手性碳分別與2個苯環(huán)和1個哌嗪基相連，與固定相的苯基之間能產(chǎn)生較強的π-π作用；在鹽酸異丙嗪的分子中，手性碳原子不僅與氨基相連，還能與固定相產(chǎn)生氫鍵作用；同時，手性碳原子上還連有吩噻嗪基，能與固定相的苯環(huán)產(chǎn)生π-π作用，故使得該手性固定相對鹽酸異丙嗪具有較強的對映體選擇性。由特非那丁和馬來酸非尼拉敏的結構式可知，特非那定手性碳原子的α位僅連有1個苯環(huán)，與鹽酸異丙嗪和鹽酸西替利嗪相比，其與固定相的苯環(huán)產(chǎn)生的π-π作用較??；且由于其結構式中有較大的空間位阻，減小了分子與固定相之間空間適應性，而在馬來酸非尼拉敏的手性碳原子的β位連有叔胺基團，形成空間位阻，使得該固定相對特非那定和馬來酸非尼拉敏的手性選擇性較小。

綜上所述，本試驗建立的方法簡單、快速，且分離效果好，不僅能夠拓展纖維素涂覆型手性固定相的應用范圍，還可作為鹽酸西替利嗪、鹽酸異丙嗪、特非那定和馬來酸非尼拉敏對映體分離的新方法，并在立體選擇性代謝研究、手性藥物質(zhì)量控制等方面具有一定的參考價值。

參考文獻

[ 1 ] 馮小倩，武曦，譚穎徽.組胺及組胺受體的研究進展[J].中華肺部疾病雜志，2015，8（2）：234-236.

[ 2 ] COREY EJ，HELAL CJ. Catalytic enantioselective synthesis of the second generation histamine antagonist cetirizine hydrochloride[J]. Tetrahedron Lett，1996，37（28）：4837-4840.

[ 3 ] RUSTICHELI C，GAMBERINI MC，F(xiàn)ERUILI，et al. Enantioselective analyses of antihistaminic drugs by high- performance liquid chromatography[J]. J Chromatogr，2004，60（1/2）：99-103.

[ 4 ] 劉桂蘭.毛細管電泳法對幾種手性抗組胺藥物的分析應用[D]. 鄭州：鄭州大學，2009.

[ 5 ] 朱丹，劉健藝，左麗華，等.高效毛細管電泳法分離4種堿性藥物對映體[J].西北藥學雜志，2011，26（5）：340-342.

[ 6 ] 程燕，賈欣欣，劉健藝，等.以CM-β-CD為HPLC手性流動相添加劑分離撲爾敏等6種手性藥物對映體[J].沈陽藥科大學學報，2012，29（2）：121-125.

[ 7 ] VAN EA，DETAEVERNIER MR，CROMMEN J，et al. Influence of methanol on the enantiore solution of antihistamines with carboxymethyl-beta-cyclodextrin in capillary electrophoresis[J]. Electrophoresis，2004，25（16）：2838- 2847.

[ 8 ] 沈靜茹，韋慧慰，余學紅，等. β-環(huán)糊精硝基衍生物HPLC柱分離手性藥物撲爾敏[J].中南民族大學學報（自然科學版），2011，30（4）：32-35.

[ 9 ] 趙允鳳，宋佳新，孫嘉儀，等.纖維素鍵合手性固定相拆分6種萘滿酮衍生物對映體[J].色譜，2014，32（8）：832- 836.

[10] 王琰，陳文靜，周穎，等.纖維素衍生物手性固定相拆分腎上腺素、鹽酸去氧腎上腺素[J].藥物分析雜志，2012，32（11）：1985-1990.

[11] 羅英豪.超臨界流體色譜法拆分萘普生對映體[J].中國藥房，2015，26（34）：4789-4791.

（收稿日期：2018-08-14 修回日期：2018-10-10）

（編輯：唐曉蓮）