張月順 周 旋 蘆相玉 夏洪蓮 李 穎 南錫浩

依托咪酯為現階段我國臨床上應用較為廣泛的一種全身麻醉誘導用藥。近年來, 有研究發(fā)現該藥物對神經元缺氧損傷具有保護作用［1］。為明確該藥物的神經元保護機制, 本研究探討依托咪酯對神經膠質細胞IL-1β的影響, 現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 細胞株：小鼠神經膠質細胞株(購自背景元唐盛興科技有限公司)。主要儀器及試劑：酶標儀(購自上海紀寧生物科技有限公司)、6孔培養(yǎng)板(購自上海晶安生物科技有限公司)、DMEM高糖培養(yǎng)基(購自上海源葉生物科技有限公司)、胎牛血清(購自杭州四季青生物工程材料有限公司)、酶聯免疫吸附試驗試劑盒(購自上海紀寧生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 使用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)小鼠神經膠質細胞, 培養(yǎng)條件, 溫度37℃、二氧化碳5%。

1.2.2 試驗研究 細胞培養(yǎng)48 h后, 取對數生長期的細胞以每孔2×105的密度接種在6孔培養(yǎng)板中, 共接種在3張培養(yǎng)板中。每張培養(yǎng)板中均留1個孔作為空白對照, 分別向培養(yǎng)板中其他5個孔中加入0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg/L共5個濃度的依托咪酯(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司, 國藥準字H32022379, 規(guī)格：10 ml∶20 mg), 繼續(xù)培養(yǎng)24 h后進行神經膠質細胞IL-1β檢測。

1.2.3 神經膠質細胞IL-1β檢測及神經膠質細胞神經元存活率計算 應用酶聯免疫吸附法檢測各張培養(yǎng)板中各培養(yǎng)孔中神經膠質細胞IL-1β的表達水平。檢測操作嚴格按照試劑盒使用說明書進行, 在酶標儀波長570 nm處讀取吸光度OD值。神經元存活率(%)=試驗組OD值÷空白對照組OD值×100.00%。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差(s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞IL-1β的表達水平比較 3張培養(yǎng)板中, 依托咪酯濃度為4.8 mg/L時, 神經膠質細胞IL-1β的表達水平明顯低于其他濃度以及空白對照的表達水平, 差異均具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞神經元的存活率比較 3張培養(yǎng)板中, 依托咪酯濃度為4.8 mg/L時, 神經膠質細胞神經元存活率, 明顯高于其他濃度以及空白對照的存活率, 差異均具有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞IL-1β的表達水平比較(s, pg/ml)

表1 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞IL-1β的表達水平比較(s, pg/ml)

注：與依托咪酯濃度4.8 mg/L比較, aP＜0.05

?

表2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞神經元的存活率比較(s, %)

表2 不同濃度依托咪酯環(huán)境下神經膠質細胞神經元的存活率比較(s, %)

注：與依托咪酯濃度4.8 mg/L比較, aP＜0.05

?

3 討論

IL-1β是IL-1存在形式的一種, 為人體正常細胞在應答感染時所產生的炎性細胞因子, 其表達水平升高往往表示正常的細胞功能遭到破壞, 機體出現病理反應［2］。神經膠質細胞是廣泛分布于神經元以外的細胞, 具有滋養(yǎng)和支持神經元的作用［3-7］。神經膠質細胞中IL-1β的表達水平變化能夠反映中樞神經系統損傷情況［8］。近年來, 有國內研究學者發(fā)現, 靜脈麻醉藥物依托咪酯對神經元損傷具有保護作用,但也有研究學者持反對觀點［9］。

基于上述研究現狀, 本研究分析依托咪酯對神經膠質細胞IL-1β的影響。結果顯示, 隨著依托咪酯濃度的升高, 神經膠質細胞IL-1β的表達水平降低, 神經元存活率升高, 表明依托咪酯對神經膠質細胞IL-1β表達能夠產生抑制作用,保護神經元不受破壞。分析得到上述結果的原因可能為：依托咪酯能夠增強由γ-氨基J酸(GABA)介導的抑制性突觸傳遞, 直接激活GABA受體。激活GABA受體的過程中, 可能會導致細胞膜上的氯離子通透性增加, 細胞電位失衡, 使細胞處于超極化的狀態(tài)［10］。這一狀態(tài)下具有電壓依賴性的的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體通道和電壓依賴性鈣離子通道的開啟受到抑制, 從而減少鈣離子內流, 抑制IL-1β表達, 發(fā)揮神經元保護作用。

綜上所述, 依托咪酯對小鼠神經膠質細胞神經元具有保護作用, 用藥劑量越大, 保護作用越顯著。但由于近年來國內開展的相關課題研究較少, 本研究的試驗過程可能受到混雜因素的影響, 故關于依托咪酯對神經膠質細胞IL-1β的具體影響機制, 仍需進行深入研究。