康新華

（甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅蘭州 730046）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種急性高致死性傳染病，主要引發(fā)母豬繁殖障礙、仔豬肺炎等。此外，PRRSV具有高變異特性，可隨時(shí)間變異出多種基因型的毒株[1]，從而加大了其防治難度，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的困擾和經(jīng)濟(jì)損失。豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種以豬為主要宿主的病原，目前已在全球范圍內(nèi)廣泛流行，且危害嚴(yán)重。PCV2可造成豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合癥（PMWS）、豬皮炎與腎炎綜合癥（PDNS）、繁殖障礙、A2型先天性震顫（CT）、豬增生性壞死性間質(zhì)性肺炎（PNP）以及豬呼吸道病復(fù)合征（PRDC） 等疾病[2]。

臨床上PCV2與其他病原混合感染的現(xiàn)象普遍存在。趙浩軍等[3]對(duì)全國(guó)9個(gè)省份的733份病豬樣品進(jìn)行了PCV2檢測(cè)，對(duì)鑒定為PCV2陽(yáng)性的283份樣品再進(jìn)行PRRSV、豬細(xì)小病毒（PPV）和豬瘟病毒（CSFV）檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)PCV2與PRRSV、PPV和CSFV 3者混合感染的陽(yáng)性率分別為33.2%、16.3%和26.1%，以PCV2和PRRSV雙重感染最為突出。此外，大量研究表明，PCV2和PRRSV的混合感染已成為PMWS陽(yáng)性豬的主要致病因素。如荷蘭表現(xiàn)PMWS臨床癥狀的豬群中PCV2與PRRSV混合感染率高達(dá)83%[4]，美國(guó)為60%[5]，中國(guó)為47.7%[6]，由此可見，PRRSV與PCV2混合感染的病例在許多國(guó)家和地區(qū)的養(yǎng)殖場(chǎng)廣泛存在，嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。本文主要對(duì)甘肅省某規(guī)模場(chǎng)一起PRRSV與PCV2混合感染的病例進(jìn)行了診斷分析，并闡述了其發(fā)病情況及臨床癥狀，進(jìn)一步綜述了兩種病毒的協(xié)同致病機(jī)制，為該病的臨床防治提供理論參考。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

2018年3月，甘肅某規(guī)模豬場(chǎng)，不同胎次母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，日流產(chǎn)2～4頭，表現(xiàn)為早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎、畸形胎。母豬流產(chǎn)前體溫升高到39.3～40.5℃，并伴有咳嗽、腹式呼吸，食欲不振，厭食并逐漸消瘦，流產(chǎn)后母豬開始采食。發(fā)病豬群精神沉郁、扎堆，腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)以及頜下淋巴結(jié)明顯腫大，個(gè)別病豬胸腹部可見皮膚點(diǎn)狀出血。在飼料中添加替米考星、磺胺、柴胡粉等藥物5天，癥狀沒有明顯好轉(zhuǎn)，1個(gè)月內(nèi)死胎率為18%，木乃伊胎發(fā)生率為3%，平均死亡淘汰率高達(dá)20.05%。

2 病理學(xué)特征

病死豬尸體消瘦，對(duì)其進(jìn)行剖檢可見：胸腹腔有積液，呈現(xiàn)“絨毛心”；肺臟充血、淤血、腫脹，表面有纖維素性滲出和暗區(qū)，個(gè)別有散在肉變或胰變，按壓無(wú)彈性；肝臟腫大、質(zhì)脆；脾臟腫大，邊緣梗死，有不規(guī)則出血點(diǎn)，質(zhì)地變脆；腎臟出血較多；腸道黏膜、喉頭、膀胱均有不同程度的點(diǎn)狀出血；關(guān)節(jié)腫大，全身淋巴結(jié)腫大。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

分別采集7份流產(chǎn)胎兒組織樣品，采用RT-PCR方法進(jìn)行CSFV、PRRSV、PCV2、豬偽狂犬病毒（PRV）以及豬乙型腦炎病毒（JEV）的病原學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖1（A～E）所示。同時(shí)隨機(jī)抽取2份飼料樣品，使用黃曲霉毒素B1膠體金快速檢測(cè)卡，嚴(yán)格按照操作程序檢測(cè)黃曲霉毒素含量，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。

檢測(cè)結(jié)果表明：PRRSV、PCV2核酸檢測(cè)為陽(yáng)性，CSFV、PRV以及JEV核酸檢測(cè)均為陰性；黃曲霉毒素檢測(cè)C線、T線同時(shí)顯色，表示樣品中黃曲霉毒素B1殘留量低于檢測(cè)限量濃度（10 μg/kg），飼料中黃曲霉毒素未超標(biāo)。綜上所述，PRRSV與PCV2混合感染是導(dǎo)致該規(guī)模場(chǎng)母豬流產(chǎn)的主要原因。

圖1 CSFV、PRRSV、PCV2、PRV gE和JEV RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

圖2 飼料中黃曲霉毒素檢測(cè)結(jié)果

4 分析討論

4.1 PRRSV與PCV2混合感染的致病機(jī)理

PRRSV和PCV2都是制約養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要病原。臨床上，這兩種病原的混合感染現(xiàn)象較為普遍，且控制難度大，已成為世界養(yǎng)豬業(yè)的一大難題。造成這一局面的根本原因是PRRSV與PCV2都屬于免疫抑制性病毒，其混合感染一方面會(huì)導(dǎo)致群體免疫力下降，對(duì)疾病的易感性增高[7]；另一方面這兩種病毒之間存在相互作用，使混合感染的病情更加嚴(yán)重。

首先，PRRSV可以使豬只的免疫調(diào)節(jié)紊亂，而PCV2則主要侵害機(jī)體內(nèi)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，從而造成免疫抑制，導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體免疫應(yīng)答能力下降，無(wú)法產(chǎn)生高水平抗體[8]。王天戶等[9]研究表明，PRRSV和PCV2混合感染豬發(fā)生免疫抑制是由于病毒感染前期引發(fā)的廣泛性淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞凋亡以及感染后期淋巴組織的廣泛性壞死。其研究表明，PRRSV與PCV2混合感染組多處淋巴結(jié)指數(shù)顯著高于PRRSV單獨(dú)感染組，且混合感染加重了免疫器官、淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的變性壞死，后期還可造成脾臟嚴(yán)重的淋巴濾泡缺失和淋巴結(jié)肉芽腫性炎癥。兩種感染均能引發(fā)淋巴結(jié)、脾、肺、肝和外周血淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞凋亡，但混合感染細(xì)胞凋亡更加嚴(yán)重且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。且凋亡主要見于早期，后期則主要表現(xiàn)為壞死性病變，導(dǎo)致更加嚴(yán)重的免疫抑制。其次，早有研究證實(shí)了PRRSV與PCV2之間的相互關(guān)系，在混合感染豬中，PCV2不影響PRRSV的復(fù)制和損傷，而PRRSV能夠增強(qiáng)血清中PCV2的DNA載量[10-11]，并可以增加組織樣品中PCV2的抗原水平[12]，這會(huì)導(dǎo)致更加嚴(yán)重的PCV2聯(lián)合損傷[13]。研究表明，PRRSV與PCV2混合感染組中臟器PCV2病毒載量高于單一感染組，表明PRRSV對(duì)PCV2的復(fù)制有增強(qiáng)作用。同時(shí)PRRSV與PCV2混合感染的仔豬，抗體產(chǎn)生晚于單一感染組，且抗體水平較低。PRRSV和PCV2能夠協(xié)同作用，導(dǎo)致試驗(yàn)豬外周血中NK細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞減少。因此，PRRSV與PCV2混合感染更加嚴(yán)重地抑制了宿主的免疫反應(yīng)，使豬只對(duì)其他病原的易感性增強(qiáng)。由于PCV2可誘導(dǎo)淋巴系統(tǒng)中B細(xì)胞凋亡，嚴(yán)重侵害豬的免疫系統(tǒng)，造成感染豬免疫功能降低[14]。

4.2 PRRSV與PCV2混合感染的綜合防控

PRRSV和PCV2的混合感染在臨床上普遍存在，由于其免疫抑制作用，以及兩種病毒之間的相互作用，加大了防控難度。其綜合防控措施主要從以下幾方面著手：

4.2.1 混合感染的疫苗免疫

疫苗免疫是常用的最快捷有效的防治方法。但是關(guān)于混合感染的疫苗免疫，有研究表明PRRSV和PCV2疫苗之間也存在相互作用。在PRRSV和PCV2混合感染豬中，PCV2疫苗可以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答從而減少PCV2病毒血癥、PCV2的組織損傷和PCV2抗原含量，且PCV2疫苗不影響PRRSV疫苗的免疫反應(yīng)；而在混合感染豬中，PRRSV疫苗不能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，或者說(shuō)不能減少PRRSV病毒血癥、PRRSV的組織損傷以及PRRSV抗原含量，且PRRSV疫苗可增強(qiáng)PCV2病毒血癥、PCV2誘導(dǎo)的損傷以及PCV2抗原含量。因此，在PRRSV與PCV2混合感染豬中，PCV2疫苗可以減少由PRRSV增強(qiáng)的PCV2損傷，而PRRSV疫苗單獨(dú)存在時(shí)并不能減少由PRRSV增強(qiáng)的PCV2損傷。這個(gè)模型顯示，PRRSV疫苗或者是PRRSV本身可能會(huì)誘導(dǎo)PCV2加大復(fù)制，PCV2復(fù)制的增強(qiáng)可能會(huì)損害免疫系統(tǒng)。這項(xiàng)研究具有深遠(yuǎn)的臨床意義，提示養(yǎng)豬從業(yè)者在注射PRRSV疫苗時(shí)，應(yīng)首先檢查豬只PCV2的感染狀況，這樣才能有效控制PRRSV。在混合感染中，使用PCV2疫苗控制PCV2感染時(shí)，PCV2疫苗的免疫反應(yīng)肯定受到PRRSV疫苗的影響，制定合理的免疫程序是防治混合感染的關(guān)鍵[15]。

4.2.2 免疫抑制的消除

由于PRRSV和PCV2都屬于免疫抑制性病毒，因此，其混合感染的防控應(yīng)首先考慮避免或消減其免疫抑制問題。近年來(lái)免疫增效劑在此類疫病防控中得到了廣泛應(yīng)用，對(duì)其選擇也逐漸趨于高活性、無(wú)污染殘留和毒副作用的天然免疫增效劑，如中草藥提取物及增益素等成為防控此類疫病的首選。

4.2.3 常規(guī)防控措施

造成PRRSV和PCV2混合感染的風(fēng)險(xiǎn)因素是多方面的，因此防控此類疫病也需從多方面入手。

首先，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，控制豬場(chǎng)環(huán)境。嚴(yán)格控制飼養(yǎng)密度，減少交叉哺乳，避免不同日齡和來(lái)源的豬只混群。提供合理全面的營(yíng)養(yǎng)方案，嚴(yán)格把控飼料和飲水質(zhì)量，定期檢查、清理消毒，盡量減少豬群應(yīng)激，采用“分階段、全進(jìn)全出”的飼養(yǎng)方式，確保每次轉(zhuǎn)群或賣豬后，清空豬舍嚴(yán)格消毒。

其次，加強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全監(jiān)督，嚴(yán)格消毒滅菌。堅(jiān)持引種檢疫和隔離觀察制度，堅(jiān)持嚴(yán)格的消毒滅菌以及外來(lái)人員參觀訪問制度。加強(qiáng)豬場(chǎng)生物安全監(jiān)督，減少病原傳播幾率。

最后，加強(qiáng)疫病的監(jiān)測(cè)和免疫預(yù)防，定期開展常見疫病的監(jiān)測(cè)。對(duì)已免疫疫病定期進(jìn)行抗體檢測(cè)以及抗體效果評(píng)價(jià)，掌握豬群疫病流行狀況以及免疫效果。根據(jù)飼養(yǎng)情況、病原特征，制定合理的免疫程序，確定疫苗種類以及免疫時(shí)間。

總之，PRRSV與PCV2混合感染的現(xiàn)象普遍存在，由于兩種病毒之間的相互作用以及相應(yīng)疫苗之間的相互作用，加大了該類混合感染疾病的防控難度，其相互作用機(jī)理還需進(jìn)一步深入研究。