顧建青，何海娟，王良錄，喬秉善，尹 佳

真菌是常見吸入性變應(yīng)原之一，真菌過敏不僅可誘發(fā)I 型變態(tài)反應(yīng)介導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎和哮喘，而且可誘發(fā)Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)介導(dǎo)的變態(tài)性肺泡炎以及Ⅰ型和Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)共同介導(dǎo)的變應(yīng)性支氣管肺真菌病(allergic bronchopulmonary mycoses，ABPM)[1]。開展真菌過敏性疾病的臨床及基礎(chǔ)研究首先要明確所在地區(qū)氣傳真菌的種類、數(shù)量及飄散規(guī)律。本研究對北京城區(qū)進(jìn)行了1年的真菌曝片監(jiān)測，為北京地區(qū)的相關(guān)研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采樣地點

2010年1月1日至2010年12月31日采用每日不間斷的真菌曝片法進(jìn)行采樣和測定，采樣地點位于北京協(xié)和醫(yī)院門診樓4層樓頂，高度距地面15 m，周圍30 m內(nèi)無樹木及任何污染源。地理位置為北緯39°54′39″，東經(jīng)116°24′40″。

1.2 方法

1.2.1 采樣方法：用重力沉降法進(jìn)行曝片取樣，取樣器采用國內(nèi)通行的葉氏花粉及真菌孢子取樣器[2]，黏附劑采用白凡士林-液體石蠟[3]。定于每天早8∶00定時取片和換片。

1.2.2 鏡檢分類和計數(shù)：用瓊脂-甘油染色劑染色，加蓋22 mm× 22 mm 蓋玻片封片。參照文獻(xiàn)[4]的方法，于光學(xué)顯微鏡下對蓋玻片下所有真菌孢子進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定并分類計數(shù)，記錄真菌孢子的種類及數(shù)量，換算成1 000 mm2截面積上的真菌孢子數(shù)目，即氣傳真菌孢子含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用Excel 2003版軟件建立數(shù)據(jù)庫。累加每種真菌孢子含量，制表、繪圖并進(jìn)行初步分析。

2 結(jié)果

2.1 2010年北京城區(qū)氣傳真菌孢子種類及含量

2010年共收集到真菌孢子25 118粒/1 000 mm2，各種真菌孢子匯總結(jié)果(按全年真菌孢子含量排序)見表1。北京城區(qū)氣傳真菌孢子中鏈格孢屬孢子含量最高，占總量的 66.65%，為本地區(qū)絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子；枝孢屬孢子次之，占 9.71%，含量超過 1%的還包括假格孢屬、附球菌屬、黑粉目、德氏霉屬、銹菌目及細(xì)基格孢屬孢子。

所收集到的真菌孢子共28種，其中絕大多數(shù)能鑒定到屬，隸屬于25屬的分別為鏈格孢屬、枝孢屬、假格孢屬、附球菌屬、德氏霉屬、細(xì)基格孢屬、彎孢屬、匍柄霉屬、平臍蠕孢屬、凸臍蠕孢屬、內(nèi)臍蠕孢屬、假尾孢屬、色二胞屬、尾孢屬、鐮刀霉屬、柱孢屬、莢孢腔屬、地舌霉屬、毛殼菌屬、疣蠕孢屬、皮思孢屬、脈孢霉、小鏈孢屬及愛氏霉屬；兩種僅能鑒定到目，分別為黑粉目及銹菌目；能鑒定到種的僅粉紅單端孢。

2.2 2010 年北京城區(qū)氣傳真菌孢子的月份分布

北京城區(qū)全年均可收集到氣傳真菌孢子，含量月分布結(jié)果顯示6-7月為唯一高峰，主要氣傳真菌孢子為鏈格孢屬、枝孢屬、附球菌屬及假格孢屬等，占全年含量的 64.24%；8-10月次之，主要氣傳真菌孢子為鏈格孢屬、黑粉目、假格孢屬、附球菌屬及枝孢屬等，占全年含量的 25.10%(圖1)。

占全年含量前五位的真菌孢子中，鏈格孢屬在6-7月份為唯一高峰，占其全年含量的 69.47%，其中僅 6月份就占全年含量的 49.00%，8-9月份數(shù)量次之，占全年含量的 18.32%；枝孢屬月份分布與之相近，6-7月份為唯一高峰；而假格孢屬、附球菌屬、黑粉目則均表現(xiàn)兩個小高峰，第一高峰分別為6月、6月及9-10月，第二高峰分別為10月、9-10月及6月(圖2)。

2.3 北京城區(qū)氣傳真菌日分布

鏈格孢屬為北京城區(qū)絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子，高峰季節(jié)為6-7月，高峰時段為6月下旬，鏈格孢屬孢子高峰季節(jié)含量日分布見圖3。

3 討論

真菌是常見的吸入性變應(yīng)原之一。據(jù)估計，自然界中大約有150萬種真菌，其中約8萬種為人類所認(rèn)知[5]，目前已知中國有真菌約4萬種[6]。迄今為止已證實有112個屬的真菌可誘發(fā)呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病[5]。真菌變態(tài)反應(yīng)的人群患病率依地理及氣候條件的不同而異，可高達(dá)30%[7]。

表1 2010年全年北京城區(qū)各種氣傳真菌孢子數(shù)量Table 1 Amount of different kinds of airborne fungi spores in urban area of Beijing in a whole year of 2010

圖 1 2010年北京城區(qū)氣傳真菌孢子含量月份分布Fig 1 Mensal distribution of airborne fungi spores count in urban area of Beijing in 2010

圖 2 2010年北京城區(qū)含量占全年含量前五位的真菌孢子月份分布Fig 2 Mensal distribution of top 5 airborne fungi spores count in urban area of Beijing in 2010

圖 3 2010年鏈格孢屬孢子高峰季節(jié)(6-7月)日含量分布Fig 3 Daily distribution of Alternaria spore count during peak season (June to July) in 2010

明確所在地區(qū)氣傳真菌的種類、數(shù)量及飄散規(guī)律是進(jìn)行氣傳真菌過敏相關(guān)研究的前提，本研究對2010年北京城區(qū)的氣傳真菌曝片進(jìn)行分析，全年共收集到真菌孢子28種達(dá)25 118 粒/1 000 mm2，絕大多數(shù)能鑒定到屬，隸屬于25屬。本研究發(fā)現(xiàn)6-7月為真菌孢子數(shù)量的唯一高峰，占全年含量的 64.24%，其中僅 6月1個月份即占到全年含量的1/3；其次8-10月真菌孢子數(shù)量占全年含量約1/4。早在20世紀(jì)90年代初，本研究團(tuán)隊曾組織了迄今為止唯一的全國氣傳致敏真菌調(diào)查，在北京城區(qū)設(shè)置3個監(jiān)測點，包括東城區(qū)的2個點和朝陽區(qū)的1個點，其中東城區(qū)第一監(jiān)測點位于本次監(jiān)測點。當(dāng)年曝片法監(jiān)測結(jié)果顯示，全年共收集到真菌孢子 28 437粒/1 000 mm2，種類達(dá)32種，其中5-10月為高峰，占全年含量的 85.51%，當(dāng)年6月份占全年含量的 24.89%[8]。與本次監(jiān)測相近時段(2009 年10 月1 日至2010 年9 月30 日)，郝廷等[9]進(jìn)行了北京市東郊?xì)鈧髡婢盎ǚ郾O(jiān)測，曝片法結(jié)果顯示全年共收集到真菌孢子 21 146粒/1 000 mm2，分屬于38個屬，高峰期分別為2009 年10-11月和2010 年6-9月。因該文獻(xiàn)未提供氣傳真菌孢子月含量總數(shù)，故未能計算兩高峰占全年含量的百分比。分別于同一監(jiān)測點不同時期、相近時段北京城郊區(qū)不同監(jiān)測點的監(jiān)測結(jié)果顯示，收集到的真菌孢子總數(shù)差異較大，真菌高峰時段亦不相同。既往較多的報道發(fā)現(xiàn)，氣傳真菌孢子的數(shù)量與氣象因素及地理因素有關(guān)，國外的研究結(jié)果顯示，大氣中鏈格孢屬孢子數(shù)量與降雨量以及當(dāng)日平均、最高、最低氣溫、露點溫度及氣壓顯著相關(guān)[10-11]。楊辰宸等[12]的研究結(jié)果顯示，溫度是與空氣中真菌數(shù)量相關(guān)性最密切的氣象因素，天氣狀況(陰、晴、雨等)也與氣傳真菌孢子數(shù)量具有相關(guān)性，而其他氣象因素如濕度、風(fēng)向、風(fēng)力與空氣中真菌數(shù)量無顯著相關(guān)。同一監(jiān)測點不同時期的真菌孢子總數(shù)及高峰時段的差異可以用不同年份氣象學(xué)參數(shù)的差異進(jìn)行解釋，但相近時段北京城郊區(qū)不同監(jiān)測點結(jié)果之間的差異無法用氣象因素及地理因素解釋，推測與局部小環(huán)境如植被、腐殖質(zhì)暴露等有關(guān)。

本次曝片法監(jiān)測的結(jié)果顯示，北京城區(qū)大氣中鏈格孢屬孢子為本地區(qū)絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子，占全年總量的 66.65%；含量超過 5%的真菌屬還包括枝孢屬、假格孢屬、附球菌屬及黑粉目孢子。20世紀(jì)90年代初同一監(jiān)測點測得的全國氣傳致敏真菌調(diào)查曝片法結(jié)果證實鏈格孢屬孢子亦為絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子，占全年總量的 42.30%，含量超過5%的真菌屬還包括黑粉菌、大枝孢菌及銹菌[8]。相近時段北京東郊監(jiān)測點曝片法結(jié)果顯示，鏈格孢屬孢子亦為絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子，占全年總量的59.60%，含量超過5%的真菌屬僅包括黑粉菌屬，含量超過 4%的還包括枝孢屬、附球?qū)偌颁P菌屬[9]。上述分別于同一監(jiān)測點不同時期、相近時段北京城郊區(qū)不同監(jiān)測點的監(jiān)測結(jié)果表明，鏈格孢屬孢子確為本地區(qū)絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子，其他的共同優(yōu)勢氣傳真菌孢子還包括枝孢屬、黑粉目及銹菌屬，而假格孢屬、附球菌屬為近年北京城郊區(qū)新檢測到的優(yōu)勢氣傳真菌孢子。造成上述監(jiān)測結(jié)果差異的原因目前尚不明確，可能與氣象因素、局部環(huán)境的不同或改變、不同真菌的最適生長條件的差異有關(guān)。

本次研究結(jié)果顯示鏈格孢屬孢子為北京城區(qū)絕對優(yōu)勢氣傳真菌孢子。在全世界范圍內(nèi)鏈格孢屬、枝孢屬、青霉屬及曲菌屬是常見的致敏真菌[5]，其中鏈格孢屬研究的最充分[13]。鏈格孢菌在人群的致敏率目前尚不清楚，Mari等[14]對4 962例呼吸道變態(tài)反應(yīng)性疾病患者的調(diào)查結(jié)果顯示，19%的患者對一種或以上的真菌變應(yīng)原皮膚試驗陽性，真菌變應(yīng)原皮膚試驗陽性患者中，有66%的患者對鏈格孢菌皮試陽性。岳鳳敏等[15]對28種常見氣傳真菌致敏性分析的結(jié)果顯示，200例真菌過敏患者中88例鏈格孢皮試陽性。目前國外的研究結(jié)果已證實鏈格孢免疫治療安全有效[16]。對國產(chǎn)鏈格孢變應(yīng)原皮試液用于診斷鏈格孢變態(tài)反應(yīng)性疾病的研究結(jié)果顯示，應(yīng)用鏈格孢變應(yīng)原原液的1∶100 稀釋液進(jìn)行皮內(nèi)試驗可以安全、有效地診斷鏈格孢引起的變態(tài)反應(yīng)性疾病，以變態(tài)反應(yīng)?？漆t(yī)生臨床綜合診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，以皮內(nèi)試驗結(jié)果≥ +作為診斷界值，靈敏度為0.886，特異度為0.894，準(zhǔn)確度為0.894[17]。目前尚缺乏對國產(chǎn)鏈格孢變應(yīng)原制劑用于免疫治療療效及安全性評估的高水平循證醫(yī)學(xué)研究，亟待填補空白，以為今后的臨床實踐提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

青霉屬及曲菌屬等體積較小的孢子采用重力沉降法檢測易被遺漏，應(yīng)同時輔之以曝皿法。遺憾的是，由于不可抗拒的人的因素(不是人為因素)，曝皿法結(jié)果丟失，有待在今后的工作中加以彌補。郝廷等[9]在相近時段北京東郊真菌曝皿法的結(jié)果顯示培養(yǎng)的主要真菌是鏈格孢屬、青霉屬、枝孢屬及無孢群等，可供參考。

綜上所述，北京城區(qū)全年均可收集到氣傳真菌孢子，6-7月為唯一高峰，主要氣傳真菌孢子為鏈格孢屬、枝孢屬、附球菌屬及假格孢屬，其中鏈格孢屬為優(yōu)勢氣傳真菌孢子。