楊思雨，馮冰冰，蔣超陸尚明，姚國興，陳煥根

(江蘇省漁業(yè)技術(shù)推廣中心，江蘇 南京 210036)

大鱗鲃(Barbuscapito)屬鯉科(Cyprinidae)鲃亞科(Barbinae)鲃屬(Barbus)，原產(chǎn)于烏茲別克斯坦的阿姆河，主要分布于西亞的里海和咸海水域，最早為野生種，現(xiàn)已成為當(dāng)?shù)孛F的大型經(jīng)濟(jì)魚類之一[1,2]。大鱗鲃屬廣溫性魚類，與我國人工養(yǎng)殖的中華倒刺鲃(Spinibarbussinensis)、光倒刺鲃(Spinibarbushollandi)等鲃亞科魚類相比，具有抗逆性強(qiáng)、耐鹽堿性強(qiáng)等特點(diǎn)[3～4]。由于具有肉質(zhì)鮮美、食性廣、生長速度快等優(yōu)點(diǎn)，我國于2003年將其引進(jìn)，并在人工繁殖和苗種培育方面取得了成功，對(duì)大鱗鲃池塘養(yǎng)殖生物學(xué)、生理學(xué)、營養(yǎng)學(xué)及遺傳學(xué)等方面的研究已比較成熟，豐富了我國內(nèi)陸鹽堿水域的養(yǎng)殖品種[4～7]。隨著市場需求和養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，在養(yǎng)殖及運(yùn)輸過程中一些寄生蟲、病毒、細(xì)菌會(huì)對(duì)大鱗鲃進(jìn)行侵襲造成損傷和死亡，目前對(duì)其他鲃亞科魚類的病害魚藥研究已經(jīng)很多，而關(guān)于大鱗鲃的相關(guān)研究尚少[8～11]。為了確定幾種常用消毒劑在大鱗鲃養(yǎng)殖過程中的安全使用濃度，本研究選用高錳酸鉀、食鹽以及復(fù)合碘3種藥物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，觀察大鱗鲃對(duì)它們的耐受性，以為科學(xué)用藥提供一定依據(jù)，減少因用藥不當(dāng)造成的經(jīng)濟(jì)損失。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品

試驗(yàn)所用藥品規(guī)格詳見表1。

1.2 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)魚為江蘇省漁業(yè)技術(shù)推廣中心揚(yáng)中基地養(yǎng)殖的大鱗鲃魚苗，全長(6.58±0.29)cm，體重(4.41±0.36)g。挑選外觀無損傷、攝食正常、活力強(qiáng)的健康魚苗用于試驗(yàn)。試驗(yàn)魚先在水族箱中暫養(yǎng)7d，每天正常換水、喂食，試驗(yàn)開始前24h停止喂食。

1.3 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)用水為曝氣過的自來水，水溫15～20℃，pH6.8～7.2。試驗(yàn)所用容器為63cm×43cm×24cm的白色泡沫箱，每個(gè)箱子中加水30L，將藥品制成母液后根據(jù)質(zhì)量濃度比例加藥，混勻后將試驗(yàn)魚放入其中。試驗(yàn)采用靜水試驗(yàn)法，試驗(yàn)期間不喂食以免食物殘?jiān)?、糞便影響試驗(yàn)結(jié)果，每隔24h更換一次試驗(yàn)液以保持各藥物的有效濃度。

表1 各藥物規(guī)格及各處理質(zhì)量濃度

1.4 試驗(yàn)方法

正式試驗(yàn)之前先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)階段各藥物設(shè)置5個(gè)濃度梯度組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組放置6尾魚，觀察48h得到各藥物對(duì)大鱗鲃24h時(shí)100%致死濃度和48h無死亡濃度，以此確定正式試驗(yàn)時(shí)各藥物質(zhì)量濃度梯度。

正式試驗(yàn)時(shí)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果各藥物設(shè)置5個(gè)濃度梯度組和1個(gè)空白對(duì)照組(表1)，每組設(shè)置2個(gè)平行，每個(gè)平行10尾魚。加藥混勻后將試驗(yàn)魚隨機(jī)放入各個(gè)泡沫箱中，之后8h連續(xù)觀察試驗(yàn)魚狀態(tài)，記錄各組魚出現(xiàn)的游動(dòng)不平衡、呼吸困難等中毒癥狀和死亡狀況，以魚不能游動(dòng)、停止呼吸以及對(duì)玻璃棒碰觸和鑷子夾魚尾魚鰭無任何反應(yīng)為死亡狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)，以后記錄各組魚24、48h和72h的死亡率，試驗(yàn)中注意將死魚及時(shí)撈出以免破壞水質(zhì)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS軟件的Probit模塊采用概率單位法對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行處理[12]，以各藥物質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以死亡率的概率單位為縱坐標(biāo)，得到回歸方程，再分別求出3種藥物施藥24、48h和96h時(shí)對(duì)大鱗鲃的半致死濃度LC50[13]，之后計(jì)算各種藥物對(duì)大鱗鲃的安全使用濃度SC[14]，計(jì)算公式為：SC=0.3×48hLC50/(24hLC50/48hLC50)2。

2 結(jié)果與分析

表2 高錳酸鉀對(duì)大鱗鲃的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

表3 食鹽對(duì)大鱗鲃的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

2.1 高錳酸鉀對(duì)大鱗鲃的急性毒性

高錳酸鉀高質(zhì)量濃度組，試驗(yàn)魚放入水箱不久即出現(xiàn)急游亂竄的強(qiáng)烈反應(yīng)，之后運(yùn)動(dòng)能力減弱，靜止于水體下層。而7mg/L組施藥12h就出現(xiàn)死亡，死亡率為20%，施藥24h時(shí)死亡率為50%，72h死亡率達(dá)到95%。6.09mg/L組在施藥24h時(shí)死亡率為20%，48h時(shí)為40%。當(dāng)質(zhì)量濃度為4mg/L時(shí)，72h的死亡率為0，試驗(yàn)魚活動(dòng)狀況與對(duì)照組相比沒有明顯差別(表2)。

2.2 食鹽對(duì)大鱗鲃的急性毒性

大鱗鲃對(duì)于鹽堿的耐受性極高，因此食鹽高質(zhì)量濃度組的試驗(yàn)魚放入后并沒有強(qiáng)烈反應(yīng)出現(xiàn)，一段時(shí)間后出現(xiàn)輕微側(cè)翻、平衡力降低的表現(xiàn)。16000mg/L質(zhì)量濃度組12h試驗(yàn)魚死亡率為5%，24h時(shí)為70%，72h時(shí)達(dá)到80%。當(dāng)質(zhì)量濃度為14223mg/L時(shí)24h死亡率為5%，48h為10%。當(dāng)質(zhì)量濃度為12647mg/L時(shí)72h的死亡率僅為5%，而11245mg/L和10000mg/L組的試驗(yàn)魚沒有出現(xiàn)死亡，魚體活力與對(duì)照組相差無異(表3)。

2.3 復(fù)合碘對(duì)大鱗鲃的急性毒性

表4 復(fù)合碘對(duì)大鱗鲃的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)魚對(duì)高濃度復(fù)合碘的反應(yīng)較為強(qiáng)烈，放入水箱后急速竄游打轉(zhuǎn)，呼吸急促，之后游泳能力降低直至停止游動(dòng)，腹面朝上漂浮于水面，呼吸緩慢直至死亡，死亡后腹部腐爛有腸溢出，體表分泌大量粘液。當(dāng)復(fù)合碘質(zhì)量濃度為8.5mg/L時(shí)12h死亡率為50%，24h達(dá)到90%，72h時(shí)死亡率為100%。7.6mg/L濃度組12h死亡率為20%，24h時(shí)為60%，48h時(shí)達(dá)到90%。當(dāng)質(zhì)量濃度為6.84mg/L時(shí)，12h的死亡率為20%，24h的為50%，至48h時(shí)為70%(表4)。

2.4 各藥物的半致死濃度和安全濃度

攻毒試驗(yàn)中常以導(dǎo)致50%試驗(yàn)對(duì)象死亡的藥物濃度即半數(shù)致死濃度衡量該藥物毒性大小。通過對(duì)各藥物在施藥后的死亡率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到各藥物在12、24、48h和72h時(shí)對(duì)大鱗鲃的半致死濃度，進(jìn)一步得到施藥的安全濃度(表5)。通過對(duì)安全濃度的比較，可得知大鱗鲃對(duì)3種消毒劑的耐受程度由大到小順序依次為：食鹽、復(fù)合碘、高錳酸鉀。

表5 各藥物對(duì)大鱗鲃的半致死濃度及安全濃度

3 討論

3.1 各藥物對(duì)大鱗鲃毒性評(píng)價(jià)

高錳酸鉀又稱錳酸鉀、灰錳氧，俗稱“PP粉”，是一種性質(zhì)極為不穩(wěn)定的強(qiáng)氧化劑，含有的結(jié)合態(tài)氧與有機(jī)物接觸可即刻發(fā)生氧化反應(yīng)使其氧化[15]。高錳酸鉀可殺死魚鰓及體表寄生的除孢子蟲、小瓜蟲之外的原生動(dòng)物、單殖吸蟲和甲克動(dòng)物等，因其副作用小、無污染、無毒害、無殘留被廣泛用于水產(chǎn)動(dòng)物病害防治[16]。然而，作為一種強(qiáng)氧化劑，高濃度的高錳酸鉀還原生成的二氧化錳與蛋白質(zhì)結(jié)合生成的蛋白鹽復(fù)合物會(huì)對(duì)魚類造成鰓部組織損傷，使其呼吸困難，甚至中毒身亡[17]。研究表明，中華倒刺鲃對(duì)高錳酸鉀的安全濃度為0.55mg/L[8]，光倒刺鲃的為0.27mg/L[10]，金魚(Carassiusauratus)的為026mg/L[18]，唐魚(Tanichthysalbonubes)的為0.066mg/L[19]，團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)的為0.26mg/L[20]；而黑脊倒刺鲃(Spinibarbuscaldwelli)的為2.53mg/L[21]，南方大口鯰(Silurusmeridionalis)的為3.18mg/L[22]。目前生產(chǎn)上高錳酸鉀的常用潑灑濃度為2～5mg/L，本試驗(yàn)中高錳酸鉀對(duì)大鱗鲃的安全濃度為1.460mg/L，低于常用濃度，說明高錳酸鉀可以作為大鱗鲃病害防治的安全消毒劑使用。

食鹽為白色結(jié)晶顆粒，溶于水中為中性，主要成分是氯化鈉，此外還有微量氯化鎂、氯化鉀等[23]。食鹽在水產(chǎn)病害防治中常作為浸洗藥物，也可作為添加劑摻拌到飼料里使用。食鹽可迅速提高水體鹽度，從而改變病原微生物的滲透壓，抑制其生長或直接將其殺死，從而清理掉魚體外的寄生蟲和細(xì)菌，是一種安全經(jīng)濟(jì)的消毒劑[10]。本試驗(yàn)中大鱗鲃對(duì)食鹽安全濃度為4586mg/L，已有研究表明光倒刺鲃的為3555mg/L[10]，江黃顙魚的為2418mg/L[24]，倒刺鲃的為3000mg/L[25]，赤眼鱒的為1919mg/L[26]，彩鯽魚苗食鹽安全濃度為4500mg/L[27]。正是大鱗鲃對(duì)食鹽具有極高的耐受性，因此食鹽可作為浸洗藥物對(duì)魚體或水體進(jìn)行消毒。

水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的復(fù)合碘為碘酸混合液，是將碘、碘化物、鹽酸及磷酸混合制成的水溶液，為深棕色液體。碘可取代共價(jià)氫形成碘衍生物，從而破壞氫鍵，使蛋白或核酸發(fā)生致死性結(jié)構(gòu)變化或使其合成受阻[28]。由于純碘極易升華，因此水溶性較差，而酸不但可增強(qiáng)碘溶液的穩(wěn)定性和溶解度，其本身也是一種很好的消毒劑，游離氫離子可使細(xì)菌或芽孢的蛋白質(zhì)變性、水解和沉淀，因此碘和酸的混合液具有更好的消毒效果[29]。在本試驗(yàn)中，復(fù)合碘對(duì)大鱗鲃的安全濃度為1.715mg/L，而對(duì)于大口鯰，安全濃度為0.039mg/L有效碘[30]，說明大鱗鲃對(duì)復(fù)合碘的耐受性較高。

3.2 藥物的選擇和使用

水產(chǎn)養(yǎng)殖是我國農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)中重要組成部分，但養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的各種病害成為制約我國水產(chǎn)業(yè)健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵因素，使用安全有效的消毒劑殺滅水體及養(yǎng)殖動(dòng)物體表的病原體，從根本上切斷其傳播途徑是控制水產(chǎn)病害最為有效的措施。實(shí)際生產(chǎn)中往往因?yàn)槭┧幏N類和濃度選擇錯(cuò)誤不但達(dá)不到防治病害的作用，反而會(huì)造成不必要的經(jīng)濟(jì)損失，因此選擇消毒劑時(shí)，應(yīng)遵循科學(xué)原則，挑選效果好、無污染、副作用小的藥劑。在本試驗(yàn)中，高錳酸鉀、食鹽和復(fù)合碘對(duì)大鱗鲃的安全濃度均高于實(shí)際生產(chǎn)使用濃度，其中高錳酸鉀在強(qiáng)光下易分解且作用短暫、不會(huì)深入組織內(nèi)部，無殘留、無污染，可放心使用，但應(yīng)注意不可與碘或福爾馬林同時(shí)使用；由于大鱗鲃具有極強(qiáng)的鹽堿耐受性，食鹽除了消毒作用，還可增加水中溶氧，因此可在大鱗鲃運(yùn)輸或下塘前放心使用；復(fù)合碘屬于碘制劑，殺菌譜廣，不易產(chǎn)生耐藥性，成本和使用量小，因此可作為消毒藥物的首選。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，應(yīng)考慮水溫、水質(zhì)、水中生物等影響因子，根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的消毒劑和濃度，并時(shí)刻觀察魚類活動(dòng)情況，以免發(fā)生中毒等意外情況。