劉偉

[摘要] 目的 探討反復(fù)上呼吸道感染（rURTIs）患兒血清25-羥維生素D3[25（OH）D3]、白介素-10（IL-10）和白介素-17（IL-17）水平及臨床意義。 方法 選取2016年8月～2017年8月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院（以下簡稱“我院”）兒科收治的rURTIs患兒60例作為感染組，選取同期我院健康體檢兒童60例作為對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平，觀察比較兩組中血清25（OH）D3、IL-10和IL-17的表達情況、三者相互關(guān)系及對rURTIs的影響。 結(jié)果 感染組患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯低于對照組，IL-17水平明顯高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）；0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于>2～6歲患兒，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)（r = 0.647，P = 0.000），rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負相關(guān)（r = -0.774，P = 0.000），rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負相關(guān)（r = -0.467，P = 0.000）。經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、體重指數(shù)、25（OH）D3、IL-10、IL-17是rURTIs的獨立影響因素（P < 0.05）。 結(jié)論 rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10水平明顯降低，IL-17水平明顯升高，25（OH）D3缺乏可能是rURTIs患兒血清IL-10下調(diào)和IL-17表達上調(diào)的重要原因。

[關(guān)鍵詞] 反復(fù)上呼吸道感染；25-羥維生素D3；白介素-10；白介素-17；臨床意義

[中圖分類號] R725.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）06（c）-0080-04

[Abstract] Objective To investigate the levels and clinical significances of serum 25-hydroxyvitamin D3 [25（OH）D3]， interleukin-10 （IL-10） and interleukin-17 （IL-17） in children with recurrent upper respiratory infection （rURTIs）. Methods A total of 60 children with rURTIs in Beijing Luhe Hospital， Capital Medical University from August 2016 to August 2017 were selected as the infection group， 60 healthy children during the same period were selected as control group. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect levels of serum 25（OH）D3， IL-10 and IL-17. The expression levels of serum 25（OH）D3， IL-10 and IL-17 in two groups were compared. The relationships among three indices and the clinical significances with rURTIs were observed. Results The levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 in rURTIs in infected group were significantly lower than those in control group， while the level of IL-17 was significantly higher than that in the control group， the differences were all statistically significant （P < 0.01）； the levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 of rURTIs in infected children of 0-2 years old were significantly lower than those of >2-6 years old ones， the level of IL-17 was significantly higher than that of >2-6 years old ones， and the differences were all statistically significant （P < 0.01）. Pearson correlation analysis showed that the serum 25（OH）D3 was positively correlated with IL-10 in children with rURTIs （r = 0.647， P = 0.000）， and had significant negative correlation between serum 25（OH）D3 and IL-17 in children with rURTIs （r = -0.774， P = 0.000）， and had significant negative correlation between serum IL-10 and IL-17 in children with rURTIs （r = -0.467， P = 0.000）. Multivariate analysis of COX showed that age， BMI， 25（OH）D3， IL-10 and IL-17 were independent influnce factors to rURTIs （P < 0.05）. Conclusion The levels of serum 25（OH）D3 and IL-10 decrease， while the level of IL-17 increase significantly in children with rURTIs. 25（OH）D3 deficiency may be an important reason for the down-regulation of serum IL-10 and the up-regulation of IL-17 in children with rURTIs.

[Key words] Repeated upper respiratory tract infection； 25-hydroxyvitamin D3； Interleukin-10； Interleukin-17； Clinical significance

反復(fù)上呼吸道感染（recurrent upper respiratory tract infections，rURTIs）是臨床上兒科常見呼吸系統(tǒng)疾病，多見于嬰幼兒，臨床主要特征為反復(fù)呼吸道感染、扁桃體炎及咽炎等癥狀[1]。rURTIs病因較為復(fù)雜，且反復(fù)發(fā)作率高，長期反復(fù)感染會引起患兒體重下降、營養(yǎng)不良、貧血等，甚至引起肺炎、支氣管哮喘，且缺乏特殊的治療方法，嚴重影響兒童健康及生活質(zhì)量[2]。而25-羥維生素D3[25（OH）D3]是機體維生素D營養(yǎng)狀況的檢測指標，可直接反映機體維生素D是否缺乏，而有研究顯示血清25（OH）D3與反復(fù)呼吸道感染（recurrent respiratory tract infections，RRTI）患兒的免疫力有關(guān)[3]?，F(xiàn)在普遍認為rURTIs的發(fā)病機制與機體免疫防御功能異常有直接關(guān)系，而白介素-10（IL-10）和白介素-17（IL-17）分別是由輔助性T細胞2（Th2）和輔助性T細胞17（Th17）細胞分泌，與多種呼吸道感染疾病有關(guān)，在呼吸道感染時可產(chǎn)生多種相應(yīng)分子，對呼吸道感染疾病的發(fā)生發(fā)展起重要作用[4-5]。而關(guān)于血清25（OH）D3、IL-10和IL-17在rURTIs中的表達水平及相關(guān)性研究較少，三者對rURTIs發(fā)病是否有影響仍不明確。因此，本研究意在探討rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平和臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年8月～2017年8月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院（以下簡稱“我院”）兒科收治的rURTIs患兒60例作為感染組，選取同期我院健康體檢兒童60例作為對照組。感染組男39例，女21例；年齡0～5歲，平均（2.19±0.52）歲，其中0～2歲者41例，>2～6歲者19例。對照組男36例，女24例；年齡0～5歲，平均（2.35±0.42）歲，其中0～2歲者38例，>2～6歲者22例。兩組受試者性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。納入標準：①符合rURTIs診斷標準[6]；②年齡≤6歲；③受試者及家屬對本研究有詳細了解，并簽署知情同意書；④經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。排除標準：①合并支氣管哮喘等下呼吸道疾病者；②近期有維生素D服用史者；③近3個月內(nèi)使用過免疫抑制劑或免疫增強劑者；④有過敏反應(yīng)性家族史者；⑤有自身免疫性疾病或免疫缺陷者；⑥患者及家屬依從性差者；⑦拒絕參與本研究相關(guān)檢測指標者。

1.2 rURTIs診斷標準[6]

0～2歲兒童，每年發(fā)作rURTIs次數(shù)>7次；>3～5歲兒童，每年發(fā)作rURTIs次數(shù)>6次；兩次發(fā)病間隔>7 d。

1.3 樣本采集

所有受試者均在入院后24 h內(nèi)清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL于含乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-k2）抗凝管中，3000 r/min離心5 min，分離上層血清，置于-80℃冷凍保存?zhèn)溆?，待測血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平。

1.4 檢測方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒檢測血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平，25（OH）D3試劑盒購自英國IDS公司，IL-10和IL-17檢測試劑盒購自北京四正柏生物科技有限公司。血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平檢測：①加樣：加血清樣本與標準液混勻；②孵育：37℃溫箱孵育2 h（IL-10、IL-17孵育40 min）；③水洗：反復(fù)3次洗滌液沖洗，紙上拍干；④加一抗（除空白孔）：加一抗工作液100 μL，振蕩器混勻；⑤孵育：37℃溫箱孵育1 h（IL-10和IL-17孵育20 min）；⑥水洗：洗滌液沖洗3次，吸水紙上拍干；⑦加酶標抗體：每孔加入辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素工作液100 μL；⑧孵育：37℃溫箱孵育30 min（IL-10和IL-17孵育10 min）；⑨水洗：洗滌液沖洗3次，吸水紙上拍干；⑩加底物：每孔加底物工作液100 μL混勻，避光，37℃溫箱孵育15 min；{11}終止：加終止液100 μL；{12}測定OD值：45 nm波長測定。操作步驟嚴格按照說明書執(zhí)行。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；采用Pearson進行相關(guān)性分析；采用COX回歸分析進行多因素分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平比較

rURTIs感染組患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于對照組，IL-17水平顯著高于對照組，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表1。

2.2 不同年齡段rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平比較

0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于>2～6歲患兒，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01）。見表2。

2.3 rURTIs患兒血清25（OH）D3、IL-10和IL-17水平相關(guān)性分析

通過Pearson相關(guān)性分析顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)（r = 0.647，P = 0.000）。見圖1；rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負相關(guān)（r = -0.774，P = 0.000）。見圖2；rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負相關(guān)（r = -0.467，P = 0.000）。見圖3。

2.4 影響rURTIs患兒多因素分析

經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、體重指數(shù)（BMI）、25（OH）D3、IL-10、IL-17是rURTIs的獨立影響因素（P < 0.05）。見表3。

3 討論

rURTIs是指單位時間內(nèi)上呼吸道感染反復(fù)發(fā)作，超過規(guī)定次數(shù)的一種臨床綜合征，多種病原微生物如流感病毒、副流感病毒、腺病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒等都可引發(fā)該病，且在病毒感染后還可繼發(fā)細菌感染，使病情遷延[7]。rURTIs發(fā)病與環(huán)境、微量元素、維生素缺乏和濫用抗生素等外部因素及營養(yǎng)不良、自身免疫力等內(nèi)在因素有密切關(guān)系[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，采用維生素D治療RRTI具有較好療效，維生素D缺乏的兒童易發(fā)生RRTI，且自身免疫防御功能低的兒童發(fā)病率高[9]。

維生素D是人體必需的脂溶性維生素之一，可從食物中攝取，但大部分來自于皮膚經(jīng)中波紫外線照射后在肝臟、腎臟中合成。25（OH）D3在人體內(nèi)濃度較高，且含量穩(wěn)定，半衰期長，能夠較準確反映體內(nèi)維生素D水平，一般可作為檢測患者體內(nèi)維生素D水平指標。維生素D還具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠提高RRTI患兒免疫水平[10]，而IL-10和IL-17是重要的免疫細胞因子，有研究顯示IL-10和IL-17表達水平與RRTI發(fā)病機制有密切關(guān)系[11]。IL-10是一種具有廣泛免疫效應(yīng)的抗炎細胞因子，可由T淋巴細胞、肥大細胞、B細胞及單核巨噬細胞等分泌，但主要由Th2產(chǎn)生，具有抗炎作用[12]。IL-17主要由Th17細胞分泌，在呼吸道感染時IL-17能夠促進機體分泌增加促進上皮細胞防御素釋放，直接摧毀病原體，同時還能夠起到趨化因子作用，增強中性粒細胞趨化并促使炎性介質(zhì)釋放，發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，rURTIs感染組患兒血清25（OH）D3和IL-10水平明顯低于對照組，IL-17水平顯著高于對照組，這與李春等[14]研究結(jié)果基本相一致。說明rURTIs感染患兒存在維生素D缺乏及免疫水平低現(xiàn)象。這可能Th1/Th2在正常情況下是維持平衡狀態(tài)，而維生素D及其受體對其具有雙相調(diào)節(jié)作用，當(dāng)機體維生素D缺乏時，使Th1/Th2平衡遭到破壞，降低Th2分泌，引起IL-10分泌減少；維生素D還能影響Th17發(fā)育成熟，減少IL-17分泌，當(dāng)維生素D缺乏時，可促進IL-17分泌[15-16]。本研究結(jié)果還顯示，0～2歲rURTIs患兒血清25（OH）D3和IL-10水平顯著低于>2～6歲患兒，IL-17水平明顯高于 >2～6歲患兒，提示患兒年齡越小維生素D缺乏越嚴重，25（OH）D3、IL-10和IL-17可能參與rURTIs發(fā)病過程。通過Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-10呈顯著正相關(guān)，rURTIs患兒血清25（OH）D3與IL-17呈顯著負相關(guān)，rURTIs患兒血清IL-10與IL-17呈顯著負相關(guān)，提示rURTIs患兒補充維生素D能促進IL-10分泌，提高患兒免疫力。王莉莉等[17]和陸春云等[18]研究顯示哮喘患兒血清25（OH）D3與IL-10呈正相關(guān)，25（OH）D3能夠通過促進IL-10分泌和產(chǎn)生，降低哮喘患兒氣管炎性反應(yīng)，抑制哮喘發(fā)生。車向郁等[19]研究表明支氣管哮喘兒童血清25（OH）D3與IL-17呈負相關(guān)。侯善群等[20]研究顯示哮喘大鼠IL-10與IL-17呈負相關(guān)。經(jīng)COX多因素分析顯示，年齡、BMI、25（OH）D3、IL-10、IL-17是影響rURTIs的獨立因素，提示嬰幼兒提高維生素D補充量，可能對rURTIs的發(fā)病具有一定的預(yù)防作用。

綜上所述，25（OH）D3、IL-10和IL-17可能參與了rURTIs病理過程，25（OH）D3缺乏可能是rURTIs患兒血清IL-10下調(diào)和IL-17表達上調(diào)的重要原因，可以通過嬰幼兒補充維生素D的方法預(yù)防rURTIs發(fā)生。

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