陳奇 姜英子 徐雅娟 解生旭 劉悅 寶艷儒

【摘 要】 目的：建立參黃養(yǎng)陰膠囊的質(zhì)量控制方法。方法：采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)（HPLC-ELSD） 法，色譜柱為島津VP-ODS色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃；ELSD檢測(cè)器參數(shù)為漂移管溫度105 ℃，氣體流量2.8 L/min。結(jié)果：黃芪甲苷的線性范圍為0.4024～12.8768 μg（r = 0.999），平均加樣回收率為98.67%（RSD=0.87%），精密度實(shí)驗(yàn)RSD為2.20%，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD為1.65%，重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)RSD為3.90%。結(jié)論：該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可用于參黃養(yǎng)陰膠囊中黃芪甲苷含量的測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】 參黃養(yǎng)陰膠囊；質(zhì)量控制；黃芪甲苷；HPLC-ELSD 法；含量測(cè)定

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）13-0025-03

Abstract：Objective To establish the quality standard of Shenhuangyangyin capsule. Methods The HPLC - ELSD method was used for the detection of hplc-elsd， and the column of chromatographic column was the iso-jp-ods column （4.6 mm×150 mm，5 μm）， and the flow phase was acetonitrile-water （32∶68）. The flow rate was 1 mL/min， and the column temperature was 30. The ELSD detector parameter is the drift tube temperature 105， and the gas flow rate is 2.8 L/min.Result The linear range of astragaloside iv was 0.4024～12.8768 μ g （r= 0.999）. the average recovery of astragaloside iv was 98.67 % （RSD= 0.87 %）， RSD of precision experiment was 2.20 %， RSD of stability experiment was 1.65 %， RSD of reproducibility experiment was 3.90 %.Conclusion this method has the characteristics of simple and rapid reproducibility， and can be used to determine the content of astragaloside in shenhuang yangyin capsule and the method can effectively control the quality of shenhuang yangyin capsule.

Keywords：Shenhuangyangyin Capsule； Quality Control； Astragaloside iv； HPLC - ELSD Method； Content Determination

參黃養(yǎng)陰膠囊主要由人參、黃芪、黃精、麥冬、丹參、苦參、甘草等7味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血化瘀的功效，用于氣陰兩虛兼血瘀證冠心病的輔助治療[1-6]。其制法為人參、丹參粉碎成粗粉，其余黃芪等五味加水煎煮三次即得。黃芪為方中君藥之一，具有補(bǔ)氣升陽(yáng)，行滯通痹之功效[7]，黃芪甲苷為其主要成分。研究采用HPLC - ELSD 法測(cè)定參黃養(yǎng)陰膠囊中黃芪甲苷的含量，為參黃養(yǎng)陰膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津2010C高效液相色譜儀（Alltech ELSD 2000ES檢測(cè)器）；METTLER AG245 十萬(wàn)分之一天平。

1.2 材料 對(duì)照品丹參酮ⅡA、黃芪甲苷、苦參堿、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf人參皂苷Rg1、甘草酸單銨鹽購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；對(duì)照藥材麥冬、黃精購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；試驗(yàn)中所用乙腈、甲醇均為色譜純，水為雙蒸水自制，其它試劑均為分析純；參黃養(yǎng)陰膠囊由吉林吉爾吉藥業(yè)有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用島津VP-ODS色譜柱（4.6×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（32∶68）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；ELSD參數(shù)：漂移管溫度105 ℃，氣體流量2.8 L/min。

2.2 對(duì)照品溶液制備 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1 mL含黃芪甲苷0.2 mg的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取本品5 g，精密稱(chēng)定，加甲醇50 mL，加熱回流2 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0 mL，微熱使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取5次，每次50 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌3次，每次50 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻即得。

2.4 線性及范圍 精密吸取對(duì)照品溶液2、4、8、16、32、64 μL，按“2.1項(xiàng)”的方法進(jìn)樣分析，測(cè)定其峰面積。以黃芪甲苷進(jìn)樣量和峰面積的Log值為橫、縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸計(jì)算。經(jīng)計(jì)算，回歸方程為y=1.880x+4.974，相關(guān)系數(shù)r=0.999，線性范圍為0.4024～12.8768 μg。結(jié)果顯示，在線性范圍內(nèi)，其對(duì)數(shù)值和峰面積對(duì)數(shù)值呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度考察 精密吸取上述同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄黃芪甲苷峰面積，計(jì)算其RSD值為2.20%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察 取根據(jù)“2.3項(xiàng)”下方法制得的同一供試品溶液，于0、2、4、6、8h下測(cè)定，記錄黃芪甲苷峰面積，計(jì)算RSD值為1.65%，表明8 h內(nèi)黃芪甲苷穩(wěn)定性較好。

2.7 重復(fù)性考察 稱(chēng)取同一批供試品6份，精密稱(chēng)定，按“2.3項(xiàng)”下方法制成供試品溶液，按“2.1項(xiàng)”色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定其峰面積，計(jì)算黃芪甲苷的含量，得RSD值為3.90%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取同一批供試品6份，精密稱(chēng)定，加入一定量對(duì)照品，按“2.3項(xiàng)”下方法制成供試品溶液，并進(jìn)行分析，計(jì)算加樣回收率，黃芪甲苷的平均回收率為98.67%，RSD為0.87%，證明以上方法準(zhǔn)確度良好，符合要求。

2.9 樣品含量測(cè)定 取三批樣品，每批各2份，按“2.3項(xiàng)”下方法制成供試品溶液，按“2.1項(xiàng)”的方法進(jìn)樣分析，計(jì)算黃芪甲苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

對(duì)于參黃養(yǎng)陰膠囊處方中七味中藥進(jìn)行定性鑒別后，結(jié)果顯示丹參、黃芪、苦參、人參薄層鑒別具有專(zhuān)屬性，麥冬、黃精、甘草薄層鑒別不具有專(zhuān)屬性，所以本研究建立了參黃養(yǎng)陰膠囊中所含的4味中藥材的薄層色譜鑒別方法，為參黃養(yǎng)陰膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

由于中藥復(fù)方的成分多樣且復(fù)雜，待測(cè)的目標(biāo)成分經(jīng)常會(huì)受到一些其他雜質(zhì)的干擾，使觀察到的結(jié)果不清晰，因此，應(yīng)選擇合適的處理方法，既能保證結(jié)果清晰，又能去除背景干擾，如黃芪的供試品制備時(shí)，水飽合正丁醇萃取后，又用正丁醇飽和的0.3 mol/L氫氧化鈉溶液提取3次，再以正丁醇飽和的水洗滌至中性，后又通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，得到供試品溶液。

在黃芪甲苷供試品溶液的制備中，先后考察了不同的提取方法（超聲提取方法、加熱回流提取方法和索氏提取方法）發(fā)現(xiàn)加熱回流方法黃芪甲苷損失較少，方法操作簡(jiǎn)便。供試品去除雜質(zhì)干擾的方法考察了萃取與大孔樹(shù)脂洗脫的方法，發(fā)現(xiàn)萃取方法較為適合。

《中華人民共和國(guó)藥典》中黃芪含量測(cè)定采用的流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），按藥典流動(dòng)相色譜峰分離效果均好，無(wú)干擾，故選其作為含量測(cè)定流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)

[1]周承. 中藥黃芪藥理作用及臨床應(yīng)用研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥， 2014， 10 （22）：100-101.

[2]鄒月. 復(fù)方丹參滴丸藥理作用及代謝研究進(jìn)展[J].臨床合理用藥， 2018， 11（1C）：162-163.

[3]周二付.中藥材麥冬的藥理作用研究[J].中醫(yī)臨床研究， 2017，9 （9）：125-126.

[4]孫明謙.甘草中化學(xué)成分的研究[D]. 長(zhǎng)春：吉林大學(xué)， 2006.

[5]陳輝，馮珊珊，孫彥君，等.3種藥用黃精的化學(xué)成分及藥理活性研究[J].中草藥， 2015， 46（15）：2329-2338.

[6]張瑜.中藥黃芪的心血管藥理作用及臨床應(yīng)用研究[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘， 2017， 17（74）：47.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典[M]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2015：302-303.