耿兆紅,管倩倩,李忠艷

(大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院 心血管內(nèi)科，遼寧 大連 116027)

CD31，又稱血小板內(nèi)皮細胞粘附分子-1(patelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)，是一種多功能分子，近年來對其參與炎癥反應、血小板的聚集和血栓形成作用的研究成為熱點。它參與炎癥反應，介導冠狀動脈血管內(nèi)皮損傷。動脈粥樣硬化的早期階段包括從血液循環(huán)中招募炎癥細胞及其轉(zhuǎn)移。這一過程主要是由細胞粘附分子介導的，這些分子由血管內(nèi)皮和循環(huán)的白細胞介導，以響應多種炎癥刺激。CD31通過參與復雜的配體間相互作用而介導白細胞與內(nèi)皮細胞間粘附及粘附反應，導致冠脈血管內(nèi)皮損傷，加重冠脈缺血及再灌注損傷。而且CD31是參與血小板黏附和聚集[1-2]的關(guān)鍵因子，在冠心病的發(fā)生與發(fā)展中有重要作用。近年來對CHD患者血漿可溶性CD31水平的研究報道較多，但關(guān)于血小板表面CD31表達水平的研究報道尚不多見。

CRP是目前研究最多的與心血管疾病相關(guān)的炎癥標志物，是目前最有價值的急性時相蛋白。CRP被認為是獨立于糖尿病、高血壓、高血脂等危險因素之外的新的易患因素，對冠心病的發(fā)生、發(fā)展起促進作用。本研究通過檢測冠心病(coronary heart disease，CHD)患者血小板CD31表達水平及血清hs-CRP水平，探討其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年10月至2016年11月大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科住院患者60例。其中，急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)30例，包括不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina，UA)亞組16例和急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)亞組14例；穩(wěn)定型心絞痛(stable angina,SA)5例；非冠心病(non-CHD)25例。

UA診斷標準[3]：(1)靜息型心絞痛：發(fā)作于休息時，持續(xù)時間通常>20 min；(2)初發(fā)型心絞痛：通常在首發(fā)癥狀1～2月內(nèi)/很輕的體力活動可誘發(fā)(程度至少達CCS Ⅲ級)；(3)惡化型心絞痛：在相對穩(wěn)定的勞力性心絞痛基礎(chǔ)上心絞痛逐漸增強(疼痛更劇烈、時間更長或更頻繁，按CCS分級至少增加I級水平，程度至少CCS Ⅲ級)。

AMI 診斷標準[4]：心肌標志物的特征性升高大于上限，并有以下至少一項心肌缺血的證據(jù)：(1)缺血性胸痛的表現(xiàn)；(2)指示新的心肌缺血的心電圖變化，即新的 ST 段改變或左束支傳導阻滯；(3)新出現(xiàn)的病理性 Q 波；(4)影像學證據(jù)示新的心肌活力丟失或新的區(qū)域性室壁運動異常。

Non-CHD組：心內(nèi)科住院的非冠心病患者,或不明原因及不典型心前區(qū)疼痛，心電圖或動態(tài)心電圖正常，心肌標志物正常，冠狀動脈CTA或冠狀動脈造影檢查排除冠心病者。

排除標準：有下列情況之一者即排除在本研究之外：急、慢性病毒或細菌感染、免疫性疾病、惡性腫瘤、糖尿病、血液病、創(chuàng)傷及手術(shù)、高熱、支氣管哮喘、嚴重肝、腎功能不全、 應用非甾體類抗炎藥、類固醇激素及鴉片類藥物。

1.2 血小板表面CD31表達水平的測定

于清晨空腹采集肘靜脈血5 mL，枸櫞酸抗凝(輕輕混勻，勿大力振蕩,保證血液與抗凝液充分接觸,并立即進行離心)，600 r/min離心20 min，加入4%多聚甲醛固定，室溫下放置10 min，加入2.5倍體積臺氏液，2000 r/min離心10 min，去上清，臺氏液懸浮沉淀，制備富含血小板懸液(4 ℃下保存)。取血小板懸液，加入適量抗體，避光孵育20 min，從暗箱中拿出，加入2 mL 臺式液，2000 r/min離心5 min，移去上清，加入2 mL 臺氏液，再次2000 r/min 離心5 min，移去上清，加入臺氏液懸浮，加等體積4%的多聚甲醛固定。4 ℃下保存,24 h內(nèi)應用流式細胞儀檢測血小板表面CD31的表達水平，用CELLQuest軟件獲取結(jié)果。嚴格把握時間和溫度。

1.3 血清hs-CRP測定

用免疫散射比濁法測定血清中hs-CRP含量：患者晨起空腹采集肘靜脈血2 mL，分離血清，采用日立7600全自動生化分析儀測定。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 Non-CHD組、SA組、ACS,UA亞組、AMI亞組基本臨床特征比較

各組間，各亞組間患者性別、年齡、收縮壓、舒張壓、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)，高密度脂蛋白-膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDLC)、低密度脂蛋白-膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDLC)、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)、吸煙等指標均無顯著性差異。見表1。

表1 Non-CHD組、SA組、ACS,UA亞組、AMI亞組基本臨床特征比較Tab 1 Comparison of basic clinical features between non-CHD group,SA group,ACS group and UA subgroup,AMI subgroup

2.2 ACS組、SA組、non-CHD組CD31的表達水平

ACS組、SA組、non-CHD組的CD31表達水平分別為(95.24±6.29)%、(57.38±10.27)%、(54.83±8.73)%，ACS組明顯高于SA組及non-CHD組，差異有非常顯著性(P<0.01)，在SA組與非冠心病組之間差異無顯著性(P>0.05)。見圖1。ACS組中的UA亞組和AMI亞組CD31表達水平分別為(94.10±6.90)%、(96.54±5.47)%，差異無顯著性(P>0.05)。見圖2。

#兩組間比較，P<0.01圖1 ACS組、SA組與non-CHD組CD31表達水平比較Fig 1 Comparison of expression levels of platelet CD31 among ACS group,SA group and non-CHD group

* UA亞組與AMI亞組CD31比較，P>0.05圖2 UA亞組AMI亞組血小板CD31表達水平比較Fig 2 Comparison of expression levels of platelet CD31 between UA subgroup and AMI subgroup

2.3 ACS組、SA組、non-CHD組hs-CRP的表達水平

ACS組、SA組、non-CHD組的hs-CRP水平分別為(6.15±2.62 )mg/L、(0.93±0.51)mg/L、(0.76±0.52)mg/L。ACS組亦明顯高于SA組及non-CHD組，差異有非常顯著性(P<0.01)，在SA組與non-CHD組之間差異也無顯著性(P>0.05)。見圖3。ACS組中的UA亞組和AMI亞組hs-CRP水平分別為(5.69±2.32) mg/L、(6.68±2.92)mg/L，差異亦無顯著性(P>0.05)。見圖4。

#兩組間比較，P<0.01圖3 ACS組、SA組與non-CHD組hs-CRP水平比較Fig 3 Comparison of hs-CRP levels among ACS group,SA group and non-CHD group)

* UA亞組與AMI亞組hs-CRP比較，P>0.05圖4 UA亞組AMI亞組hs-CRP水平比較Fig 4 Comparison of hs-CRP levels between UA subgroup and AMI subgroup

2.4 CHD患者血小板CD31表達水平、血清hs-CRP水平相關(guān)性分析

CHD患者血小板CD31、血清hs-CRP的相關(guān)性分析:血小板CD31、血清hs-CRP因素二者呈明顯的正相關(guān)(r=0.681,P<0.01)，直線回歸方程Y=71.666+3.359X，Y代表CD31；X代表hs-CRP，見圖5。

圖5 CHD患者血小板CD31表達水平、血清hs-CRP水平線性回歸分析Fig 5 Linear regression analysis of platelet CD31 expression level and serum hs-CRP level in CHD patients

3 討 論

CHD病理基礎(chǔ)是冠狀動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展,目前研究表明，動脈粥樣硬化被認為是一種動脈血管損傷的慢性炎癥過程，AS病變的形成是從以單核細胞為主的多種白細胞在動脈血管壁上浸潤[5]開始，通過內(nèi)皮細胞間隙移入內(nèi)膜并聚集，導致冠狀動脈血管內(nèi)皮損傷，是冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展的重要始動環(huán)節(jié)。這一過程由多種細胞粘附分子、細胞因子以及趨化因子介導[6]。CD31在白細胞遷移穿越內(nèi)皮細胞間連接和血管外基底膜的過程中有重要作用。有研究表明特異性抗CD31抗體、CD31阻斷劑均可抑制白細胞的遷移，抑制白細胞的浸潤和白細胞介導的組織損傷[7-8]。本研究結(jié)果顯示，ACS患者血小板CD31的表達水平明顯高于SA組和non-CHD組(P<0.01)，提示非冠心病患者或SA患者，在發(fā)展成ACS時血小板CD31激活并顯著表達于血小板表面。ACS的主要發(fā)生機制為冠狀動脈血管壁粥樣斑塊破裂，血小板活化，繼發(fā)血小板聚集和血栓形成，引起冠狀動脈急性完全或不完全堵塞?；罨“灞磉_的膜糖蛋白種類很多，如血小板顆粒膜糖蛋白GMP-140 (P-選擇素、CD62P)及溶酶體膜蛋白LIMP(CD63)，血小板膜糖蛋白GPⅠb、GPⅡb、GPⅢa、以及GPⅠa/Ⅱa、GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ/Ⅴ復合物等?；罨难“遄鳛橐环N炎性細胞，其表達的粘附分子不僅在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用，在血栓形成的過程中也具有重要作用，而且也直接參與了缺血性損傷的發(fā)生發(fā)展過程。在正常情況下，血液循環(huán)中的血小板處于靜止狀態(tài)。CD31 在靜止血小板表面也有表達，平均每個血小板表達約8000個CD31分子。當凝血酶、組胺、氧自由基、血液流動的高剪切力等因素刺激血小板活化時，血小板顆粒膜與質(zhì)膜或表面連接小管系統(tǒng)膜融合，顆粒膜、溶酶體膜及血小板膜的糖蛋白在血小板膜表面表達大量增加。CD31在活化形成血栓的血小板表面有兩倍的表達[9]。故推測，監(jiān)測CHD患者血小板CD31表達水平，可能對ACS的診斷提供一定的參考價值。另外，在ACS組內(nèi)，UA患者與AMI患者比較，血小板CD31表達水平無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，考慮可能與UA、AMI二者共同發(fā)病機制有關(guān)，均由炎癥、免疫反應引起粥樣斑塊不穩(wěn)定，進而血小板活化、聚集導致的一系列臨床事件。

ACS組患者hs-CRP水平明顯高于SA組和non-CHD組，這表明ACS患者較SA患者存在明顯的炎癥反應。雖然SA患者冠脈斑塊內(nèi)也存在炎癥反應，但hs-CRP水平在SA組和non-CHD組差異無統(tǒng)計學意義，這表明SA患者炎癥反應程度較輕，因此其血清中的hs-CRP水平并不高于non-CHD組。故hs-CRP水平在心臟有急性炎癥反應和損傷時升高明顯，在粥樣斑塊性質(zhì)較穩(wěn)定時無明顯變化，表明hs-CRP水平的增高與冠脈炎癥反應程度和組織損傷密切相關(guān)，可反映粥樣斑斑塊的穩(wěn)定性。還有一些研究表明,血清hs-CRP 水平增高是未來心血管事件的一個強有力的獨立預測因子[10]。

本研究中，CHD患者血小板CD31的表達水平與血清hs-CRP水平通過Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)血小板CD31的表達水平與血清hs-CRP水平呈明顯正相關(guān)(r=0.487,P<0.01)，說明二者都參與了冠脈粥樣斑塊的形成,對于AS發(fā)生發(fā)展及血栓形成過程起相互促進作用。目前，血清hs-CRP被視為反映粥樣斑塊不穩(wěn)定性的重要炎癥標志物之一，本研究顯示CHD患者血小板CD31與其正相關(guān)。機制可能與內(nèi)皮微顆粒(endothelial microparticles，EMPs)有關(guān)，內(nèi)皮微顆粒是內(nèi)皮細胞在激活或凋亡脫落下來的小囊泡，是炎癥和血栓形成的生物影響因素[11-12]。hs-CRP 刺激可通過抑制 BH4，從而導致eNOs 脫偶聯(lián)，導致EMP的生成，已有研究證明[13],CD31 參與血小板的粘附和聚集反應，并介導血栓形成過程中血小板之間、血小板與內(nèi)皮細胞之間的信息傳遞。目前較廣泛用于識別 EMPs 的特異性抗體是CD31。但更具體機制有待于進一步的研究和探討。