譚 青 韓秀杰 王際英 李寶山 李學(xué)麗 郝甜甜 張利民

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n-3/n-6長鏈多不飽和脂肪酸對大菱鲆幼魚脂肪沉積、脂肪吸收及代謝相關(guān)酶活性和血清生化指標(biāo)的影響*

譚 青1,2韓秀杰1,2王際英1李寶山1李學(xué)麗1,2郝甜甜1張利民1①

(1. 山東省海洋資源與環(huán)境研究院 山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 煙臺 264006； 2. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 上海 201306)

為探討飼料中不同n-3/n-6長鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)對大菱鲆()幼魚生長性能及飼料利用、體組成和消化酶的影響，配制了6種不同n-3/n-6 LC-PUFA比值(29.54，D1組；23.04, D2組；18.97，D3組；9.06，D4組；6.86，D5組；3.87，D6組)的實(shí)驗(yàn)飼料。以大菱鲆幼魚[(12.18±0.01) g]為研究對象, 在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中開展了為期56 d的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚的成活率(SR)無顯著影響(>0.05)；增重率(WGR)隨著n-3/n-6 LC-PUFA的降低呈先上升后下降趨勢，D6組顯著低于其他各組(<0.05)；脂肪沉積率隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的降低呈下降趨勢，且D6組達(dá)到最小值，為14.80，顯著低于其他各組(<0.05)。隨著飼料中的變化，胰蛋白酶的活性呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢，且在D4組時達(dá)到最大值；脂肪酶活性呈上升趨勢。隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化, 脂肪酸合成酶活性呈先上升后下降的趨勢，最高值為D4組，顯著高于其他各組(0.05)；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的酶活呈先上升后下降的趨勢，D3組為最大值，顯著高于其他各組(0.05)。隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶呈先上升后下降的趨勢；總蛋白、白蛋白和高密度脂蛋白膽固醇均隨著飼料n-3/n-6 LC-PUFA的變化呈先上升后下降的趨勢，均在D5組時達(dá)到最大值。研究表明，飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的比例降低會導(dǎo)致大菱鲆幼魚的脂肪沉積率降低。

大菱鲆；n-3/n-6 LC-PUFA；脂肪沉積；消化酶；血清生化指標(biāo)

飼料脂肪不僅是養(yǎng)殖動物重要的能量來源，還能為機(jī)體提供必需脂肪酸(Essential fatty acid, EFAs)、磷脂、固醇類和脂溶性維生素以維持生物膜結(jié)構(gòu)和生理功能(Watanabe, 1982; Sargent, 2002)。

動物機(jī)體內(nèi)脂肪來源主要有體內(nèi)合成和飼料攝入。豬體內(nèi)脂肪主要來源于脂肪酸的合成并且脂肪組織是合成的主要部位；家禽類中雞脂肪合成主要部位為肝臟，而鴨為脂肪組織(周長海等, 2006)；魚類脂肪合成的主要場所為肝臟，飼料中脂肪直接吸收、肝臟中糖類轉(zhuǎn)化合成以及飼料中過量的蛋白質(zhì)是魚類脂肪的主要來源(王愛民, 2011)。葡萄糖代謝會產(chǎn)生甘油和脂肪酸，并通過一系列酶促反應(yīng)合成甘油三酯(TG)，所有能夠影響酶的活性或含量等酶促反應(yīng)的因素都會影響脂肪的生物合成(馬晶晶, 2008)。脂肪的分解代謝通常是在激素敏感脂酶的作用下，將脂肪分解成甘油和脂肪酸，之后釋放入血液，供組織氧化利用。肌肉與肝臟組織可以吸收和代謝游離脂肪酸(Free fatty acid, FFA)，產(chǎn)生能量供機(jī)體利用，TG 也能被肝臟轉(zhuǎn)化成為脂肪酸，并沉積在脂肪組織中(王鏡巖等, 2002)。

在水產(chǎn)品養(yǎng)殖過程中，飼料中脂類是能量的主要來源，對機(jī)體的脂肪沉積、代謝及消化都有很大的影響作用。而脂類中脂肪酸含量的不同會對脂肪的代謝及消化產(chǎn)生一定的影響，尤其是在海水魚的養(yǎng)殖過程中，長鏈不飽和脂肪酸(LC-PUFA)的含量變化也會造成一定的影響。大菱鲆()是典型的底棲性冷水魚類，原產(chǎn)于歐洲的大西洋北部海域。1992年從英國引進(jìn)，成為我國海水養(yǎng)殖中的一個重要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖種類。目前，尚無n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆脂肪代謝及脂肪沉積的影響。本研究配制不同比例n-3/n-6 LC-PUFA飼料，探究其對大菱鲆脂肪代謝及脂肪沉積的影響，為飼料中適宜的n-3/n-6 LC-PUFA提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計與飼料制作

以魚粉、大豆?jié)饪s蛋白為主要蛋白源，魚油為主要脂肪源配制基礎(chǔ)飼料，在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0、0.5、1.5、4.5、6.5、12.5 g/kg的花生四烯酸油脂，配成n-3/n-6 LC-PUFA為29.54(D1 組)、23.04(D2 組)、18.97(D3 組)、9.06(D4 組)、6.86(D5 組)、3.87(D6組)6種等氮等能實(shí)驗(yàn)飼料。飼料配方、營養(yǎng)組成見表1，魚油脂肪酸的組成見表2。

魚粉等飼料原料粉碎過80目篩，按配方從小到大逐級定量均勻混合，將魚油和花生四烯酸油脂用超聲波震蕩儀充分混勻后加入提前混勻的粉料，加適量水混勻。經(jīng)螺旋擠壓機(jī)加工成直徑為3 mm左右的飼料顆粒，60℃烘干后，–20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 飼養(yǎng)管理及樣品采集

大菱鲆幼魚于2015年11月購自山東蓬萊市宗哲養(yǎng)殖有限公司，實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)為山東省海洋資源與環(huán)境研究院循環(huán)水養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)周期為56 d。實(shí)驗(yàn)開始前，大菱鲆幼魚投喂商品飼料，暫養(yǎng)14 d并進(jìn)行分組，每組隨機(jī)挑選體質(zhì)健壯、體格大小一致的大菱鲆幼魚35尾養(yǎng)殖于高為80 cm、直徑為70 cm、水深為50 cm的圓柱塑料養(yǎng)殖桶內(nèi)，共18組，每3組使用同一種飼料。每天定時進(jìn)行飽食投喂2次，投喂后0.5 h清理殘餌并記錄殘餌量。實(shí)驗(yàn)期間，水中溶解氧>5 mg/L，水溫為(17±1)℃，鹽度為28~32，pH為7.6~8.2，氨氮和亞硝酸≤0.1 mg/L。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，停食24 h。記錄每桶魚的數(shù)量并稱重，計算成活率、增重率，隨機(jī)選取5尾實(shí)驗(yàn)魚用于全魚體組成常規(guī)分析。剩下10尾進(jìn)行尾靜脈取血，4℃離心分離(4000 r/m, 10 min)，取上清液，保存于–80℃冰箱中，用于測定血清生理生化指標(biāo)；取血后的實(shí)驗(yàn)魚分離肝臟和腸道，用于脂肪酶、胰蛋白酶、脂肪酸合成酶及?；o酶A氧化酶的測定。

1.3 樣品分析

實(shí)驗(yàn)飼料常規(guī)成分分析均參照AOAC(2002)方法進(jìn)行。

谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspertate aminotransferase, AST)、總蛋白(Total protein, TP)、白蛋白(Albumin, ALB)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphate, ALP)、總膽固醇(Cholesterol,TCHO)、甘油三酯(Triacyglycerol, TG)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)含量的測定均采用日立自動生化分析儀(7020型，Hitachi，日本)；葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose 6-phosphatedehydrogenase, G6PD)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase, FAS)、酰基輔酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase, ACO)購自上海江萊生物科技有限公司；胰蛋白酶(Trypsin)和脂肪酶(Lipase)均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 測定指標(biāo)

成活率(Survival rate, SR, %)=S/S× 100；

增重率(Weight gain rate, WGR, %) = (W–W)/W× 100；

表1 飼料配方及營養(yǎng)組成

Tab.1 Composition and nutrient levels of the experimental diets

a：花生四烯酸油脂購自嘉必優(yōu)生物工程(武漢)有限公司，成分為51.69% ARA；6.56% C16:0；5.59% C18:0；5.62% C18:1n-9；9.50% C18:2n-6；8.02% C24:0 b：維生素預(yù)混料(mg/kg飼料)：維生素A 38.0 mg；維生素D313.2 mg；維生素K310.0 mg；硫胺素115.0 mg；核黃素380.0 mg；鹽酸吡哆醇88.0 mg；泛酸 368.0 mg；煙酸1030.0 mg；生物素10.0 mg；葉酸20.0 mg；維生素B121.3 mg；肌醇 4000.0 mg；抗壞血酸500.0 mg c：礦物質(zhì)預(yù)混料(mg/kg飼料)：NaCl 100.0 mg；KCl 3020.5 mg；KAl(SO4)211.3 mg；ZnSO4·7H2O 363.0 mg；CuSO4·5H2O 8.0 mg；MgSO4·7H2O 3568.0 mg；MnSO4·4H2O 65.1 mg；Na2SeO32.3 mg；CoCl228.0 mg；KI 7.5 mg；NaF 4.0 mg；NaH2PO4·2H2O 25558.0 mg；Ca-lactate 15978.0 mg；C6H5O7Fe·5H2O 1523.0 mg d：其他：魚粉45%；大豆?jié)饪s蛋白25%；α-淀粉12%；磷酸二氫鈣0.5%；抗氧化劑0.05%；氯化膽堿0.5%；羧甲基纖維素鈉4.95%

a: Arachidonic acid oil were purchased from CABIO Bioengineering (Wuhan) Co.,Ltd, the concentration of 51.69 % ARA, 6.56 % C16:0, 5.59 % C18:0, 5.62 % C18:1n-9,9.50 % C18:2n-6, 8.02 % C24:0 b: Vitamin mixture (mg/kg diet): Retinol acetate 38.0 mg; Cholecalciferol 13.2 mg; Vitamin K310.0 mg; Thiamin 115.0 mg; Riboflavin 380.0 mg; Pyridoxine HCl 88.0 mg; Pantothenic acid 368.0 mg; Niacin acid 1030.0 mg; Biotin 10.0 mg; Folic acid 20.0 mg; Vitamin B121.3 mg; Inositol 4000.0 mg; Ascorbic acid 500.0 mg c: Mineral mixture (mg/kg diet): NaCl 100.0 mg; KCl, 3020.5 mg; KAl(SO4)2, 11.3 mg; ZnSO4·7H2O, 363.0 mg; CuSO4·5H2O 8.0 mg; MgSO4·7H2O 3568.0 mg; MnSO4·4H2O 65.1 mg; Na2SeO32.3 mg; CoCl228.0 mg; KI 7.5mg; NaF, 4.0 mg; NaH2PO4·2H2O, 25558.0 mg; Ca-lactate,15978.0 mg; C6H5O7Fe·5H2O, 1523.0 mg d: Others: Fish meal 45%; Soy protein concentrate 25%; α-starch 12%, Ca(H2PO4)20.5%; Antioxidant 0.05%; Choline chloride 0.5%; CMC 4.95%

表2 魚油脂肪酸的組成(總脂肪酸)

Tab.2 Fatty acid composition of fish oil (Total fatty acid) (%)

脂肪沉積效率(Lipid deposition rate, LR, %) = (W×L–W×L)/L

式中，S為養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)開始前實(shí)驗(yàn)魚數(shù)量，S為養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)魚數(shù)量，W為實(shí)驗(yàn)初始魚體重(g)，W為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時魚體重(g)，L為實(shí)驗(yàn)飼料中粗脂肪的含量，L為實(shí)驗(yàn)開始前魚體中粗脂肪的含量，L為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后魚體中粗脂肪的含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)，差異顯著時(<0.05)采用Duncan’s檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較分析。統(tǒng)計結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean ± SE)表示。

2 結(jié)果

2.1 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚成活率、增重率、脂肪沉積效率影響

n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚生長性能及脂肪沉積率見表3。從表3可以看出，n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚的SR無顯著影響(>0.05)；WGR隨著n-3/n-6 LC-PUFA的降低呈先上升后下降趨勢，D6組顯著低于其他各組(<0.05)；LR隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化呈下降趨勢，且D6組達(dá)到最小值，為14.80，顯著低于其他各組(<0.05)。

2.2 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼脂肪代謝酶的影響

不同 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚脂肪代謝酶的影響見表4。從表4可以看出，脂肪酸合成酶活性隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化呈先上升后下降的趨勢，D4組達(dá)到最大值，顯著高于其他各組(0.05)，而D1、D2、D3組無顯著差異(0.05)，D6組顯著低于其他各組(0.05)。隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的酶活性呈先上升后下降的趨勢，在D3組達(dá)到最大值，顯著高于其他各組(0.05)，在D1、D2組之間及D5、D6組之間無顯著性差異(0.05)。隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，?；o酶A氧化酶呈先增加后下降的趨勢，且在D5組達(dá)到最大值，顯著高于其他各組(0.05)。

2.3 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚消化酶的影響

不同 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚消化酶的影響見表5。從表5可以看出，隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，胰蛋白酶的活性呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢，在D4組時達(dá)最大值，與D5組無顯著差異(0.05)，D6組為最小值，與D2組無顯著差異(0.05)，與其他各組之間均呈顯著性差異(0.05)。隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，脂肪酶活性呈上升趨勢，D1和D2組之間無顯著差異(0.05)，其他各組之間均呈顯著性差異(0.05)。

2.4 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚血清生化指標(biāo)的影響

不同n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚血清生化指標(biāo)的影響見表6。從表6可以看出，隨著飼料中n-3/ n-6 LC-PUFA的變化，谷草轉(zhuǎn)氨酶呈先上升后下降的趨勢，D5組達(dá)到最大值，為301.67，與D4組無顯著差異(0.05)，顯著高于其他各組(0.05)，D1組為最小值，與D2組無顯著差異(0.05)?？偟鞍?、白蛋白和高密度脂蛋白膽固醇均隨著飼料的變化呈先上升后下降的趨勢，均在D5組時達(dá)到最大值。

表3 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚生長性能及脂肪沉積效率的影響

Tab.3 Effects of dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios on growth performance and lipid deposition rate of juvenile turbot

注：同行數(shù)值上標(biāo)英文字母不同表示差異顯著(<0.05)，下同

Note: Values in the same row with different superscripts show significant difference (<0.05), the same as below

表4 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚脂肪代謝酶的影響

Tab.4 Effects of dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios on fat metabolic enzymes of whole fish in juvenile turbot

表5 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚消化酶的影響

Tab.5 Effects of dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios on digestive enzyme of juvenile turbot

表6 n-3/n-6 LC-PUFA對大菱鲆幼魚血清生化指標(biāo)的影響

Tab.6 Effects of dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios on serum biochemical indices of juvenile turbot

其中，D5組的總蛋白顯著高于D1、D6組(0.05)，白蛋白和高密度脂蛋白膽固醇D5組顯著高于D1、D2和D6組(0.05)?？偰懝檀茧S著飼料的變化呈先上升后下降的趨勢，在D4和D5組時達(dá)到最大值，顯著高于D1和D6組(0.05)。甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇各組之間均無顯著性差異(0.05)。

3 討論

李思萌等(2015)研究表明，飼料中不同脂肪源不影響大菱鲆幼魚的成活率。本研究結(jié)果顯示，大菱鲆幼魚的生長隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA變化呈劑量效應(yīng)反應(yīng)，與徐后國(2013)在鱸魚()中的研究結(jié)果一致。魚類的脂類一般以脂肪的形式累積于腹腔、頭蓋腔、皮下、腹側(cè)等脂肪組織(Toussaint, 2005)，也可存在于肝臟等其他器官。魚體組織中脂肪的過量沉積可能會影響魚肉的品質(zhì)及經(jīng)濟(jì)價值。魚體過度的脂肪沉積，嚴(yán)重時甚至?xí)?dǎo)致大量脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)堆積(張春暖等, 2013)，引起肝細(xì)胞變性、壞死，導(dǎo)致肝功能下降，甚至造成衰竭。實(shí)際生產(chǎn)過程中，在一定范圍內(nèi)提高飼料的脂肪水平有利于增加魚類對飼料的利用效果(Hansen,2008)，而飼料中過高的脂肪含量會引起魚體過量的脂肪沉積。LC-PUFA能抑制脂類合成，促進(jìn)脂類分解，降低肝脂和血脂(馬晶晶等, 2014)。其中，ARA及其代謝物前列腺素(PGE)，特別是PGEJ2可通過活化脂肪細(xì)胞促進(jìn)脂肪代謝進(jìn)而降低機(jī)體體脂水平(Duplus,2002)，還能抑制FAS基因表達(dá)(蔡雙蓮等, 2003)。這可能是本研究中大菱鲆幼魚脂肪沉積率隨著飼料的變化下降的原因，具體的機(jī)理有待進(jìn)一步探究。

脂肪酸合成酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和?；o酶 A 氧化酶等都是肝臟脂質(zhì)代謝酶，其活性高低直接影響脂肪的合成與分解。脂肪酸合成酶在動物體脂生成、沉積中發(fā)揮重要作用，而不同動物的器官和組織中FAS的活性、反應(yīng)時間和作用機(jī)理并不一樣(韓光明, 2009)。本研究發(fā)現(xiàn)，脂肪酸合成酶活性的變化隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化呈先上升后下降的趨勢，D4 組為最大值，最能促進(jìn)脂肪合成酶的活性。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶是戊糖磷酸途徑的關(guān)鍵酶，為脂肪的合成提供NADPH(趙紅霞等, 2008)。本研究中，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，在 D3 組時達(dá)到最大值，顯著高于其他各組，低于18.97 (D2組)時，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶酶活迅速下降，說明過量的ARA對其有抑制作用。研究表明，?；o酶 A 氧化酶活性降低導(dǎo)致肝細(xì)胞的嚴(yán)重脂肪變性，因此，本研究飼料中，n-3/n-6LC-PUFA 為D5 組時達(dá)到最大值，說明肝細(xì)胞的脂肪發(fā)生變性，影響正常生長。胃和腸道是動物機(jī)體消化吸收食物的場所(麥康森, 2011)，主要依賴消化酶消化分解飼料中的能量物質(zhì)，進(jìn)而有效地吸收(Furné, 2005)。因此，消化酶活性在一定程度上可以作為魚類對營養(yǎng)物質(zhì)消化分解能力的指標(biāo)。消化酶的活性不僅與動物自身生理狀態(tài)有關(guān)，還與其食性及所采食的飼料成分、含量等多因素相關(guān)(戚常樂, 2016)。胰蛋白酶是動物機(jī)體內(nèi)主要的蛋白水解酶之一，它不僅可以分解食物中的蛋白質(zhì),而且迅速激活肝胰臟分泌的其他酶原促進(jìn)機(jī)體的消化功能。本研究中，大菱鲆幼魚腸道中胰蛋白酶的活性隨著飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化，呈先增強(qiáng)后減弱的趨勢，在n-3/n-6 LC-PUFA為9.06 (D4組)時，胰蛋白酶活性最強(qiáng)，說明此時腸道對蛋白質(zhì)的消化吸收能力最好；但是，n-3/n-6 LC-PUFA為9.06時(D4組)，大菱鲆幼魚WGR的D1、D2和D3組無顯著差異而顯著高于D5、D6組。其可能的原因是過量的ARA會對魚體產(chǎn)生一定的炎癥反應(yīng)(左然濤等, 2015)，從而導(dǎo)致以下原因：首先是通過改變膜脂成分影響了酶活性表達(dá)(許友卿等, 2010a)；其次是因?yàn)楫?dāng)飼料中n-3/n-6 LC-PUFA為9.06 (D3組)時，ARA對大菱鲆幼魚造成的炎癥反應(yīng)已經(jīng)超出其對免疫調(diào)節(jié)的范圍，造成機(jī)體對蛋白質(zhì)的消化吸收能力下降。

脂肪酶活性的變化可顯示出魚體對脂肪的利用能力(曲木等, 2016)。戚常樂(2016)在關(guān)于卵形鯧鲹()ARA的最適研究中發(fā)現(xiàn)，ARA顯著影響了卵形鯧鲹脂肪酶活性，0.51%組和 0.96%組的脂肪酶活顯著高于0.15%組和0.36%組，與本研究結(jié)果不一致。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化使大菱鲆幼魚腸道中脂肪酶的活性呈上升趨勢。目前，尚無較多關(guān)于ARA影響脂肪酶活性的報道，推測可能是因?yàn)锳RA及其代謝物前列腺素(PGE)，特別是PGEJ2可與脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(PPARr)迅速反應(yīng)并激活它,從而活化脂肪細(xì)胞,促進(jìn)其代謝使機(jī)體體脂水平下降(Duplus,2002)，也可能是因?yàn)楸狙芯克O(shè)計配方n-3/n-6 LC-PUFA的變化增加了PUFAs的含量，而PUFAs促進(jìn)脂類在消化道中的乳化而增加與消化酶的接觸面積，促進(jìn)脂肪酶消化的緣故(許友卿等, 2010b)。具體原因需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。

血清中的蛋白質(zhì)具有重要的生理作用，直接關(guān)系到魚體代謝及抗病能力，是魚類機(jī)體健康狀況的重要指標(biāo)之一(強(qiáng)俊等, 2012)。白蛋白的生理作用主要體現(xiàn)在維持魚體血量和滲透壓方面。正常生理狀況下，攝食情況會影響機(jī)體血清蛋白含量(蔣明等, 2015)。葉劍雄(2016)研究表明，血清中蛋白質(zhì)含量受環(huán)境和飼料的種類及含量影響。本研究表明，飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化對血清中蛋白質(zhì)有顯著影響，總蛋白和白蛋白在n-3/n-6 LC-PUFA為6.86 (D5組)時均為最大值，且在D6組有下降趨勢，說明飼料中n-3/n-6 LC-PUFA對飼料的機(jī)體健康產(chǎn)生重要的作用，在一定的范圍內(nèi)起到促進(jìn)作用。AST是動物細(xì)胞線粒體中的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，對機(jī)體蛋白質(zhì)代謝具有重要作用，AST的活性變化是肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)(王香麗等, 2015)。當(dāng)機(jī)體在正常情況下，血清中AST活性較低。組織病變會造成細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，血漿中的AST活性升高。本研究中，AST呈先上升后下降的趨勢，說明飼料中ARA增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性，另外，谷草轉(zhuǎn)氨酶在D6組時呈下降趨勢，綜合在WGR等方面的結(jié)果來看，D6組大菱鲆幼魚處于不健康的狀態(tài)，AST活性下降。高密度脂蛋白膽固醇主要由肝臟合成，有利于預(yù)防心血管疾病，過量的低密度脂蛋白易引發(fā)動脈硬化(李新等, 2016)，韓宏毅等(2010)研究認(rèn)為,不飽和脂肪酸能夠降低LDL-C含量并升高HDL-C含量。而本研究中，飼料中n-3/n-6 LC-PUFA的變化對低密度脂蛋白膽固醇各組之間無顯著影響，說明本研究中ARA對大菱鲆幼魚的低密度脂蛋白膽固醇無降低作用。高密度脂蛋白膽固醇均隨著飼料的變化呈先上升后下降的趨勢，說明本研究中ARA對大菱鲆幼魚的高密度脂蛋白膽固醇有升高作用。

在本研究條件下，飼料中n-3/n-6 LC-PUFA比值在適宜范圍(18.97~23.04)能促進(jìn)大菱鲆幼魚的生長，同時，飼料中ARA對消化呈先上升后降低的趨勢，在n-3/n-6 LC-PUFA為9.06 (D4組)時，胰蛋白酶酶活達(dá)到最大值。n-3/n-6 LC-PUFA的比例過低會對大菱鲆幼魚存在降脂作用，具體機(jī)理需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

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(編輯 陳嚴(yán))

Effects of n-3/ n-6 LC-PUFA on Fat Deposition, Digestion, and Lipid Metabolism in Juvenile Turbot ()

TAN Qing1,2, HAN Xiujie1,2, WANG Jiying1, LI Baoshan1, LI Xueli1,2, HAO Tiantian1, ZHANG Limin1①

(1. Shandong Marine Resource and Environment Research Institute, Shandong Key Laboratory of Marine Ecological Restoration, Yantai 264006; 2. College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306)

An 8-week feeding trial was conducted in a recirculated system to study the effect of dietary n-3/n-6 long-chain polyunsaturated fatty acid (LC-PUFA) ratios (29.54, D1; 23.04, D2; 18.97, D3; 9.06, D4; 6.86, D5; 3.87, D6) on growth performance, whole-body fatty acid composition, and serum biochemical indices in turbot (). Six diets were formulated to feed six groups of juvenile turbots [mean initial weight (12.18±0.01) g]. Each diet was randomly fed to triplicate groups of 35 fish per tank. There were no significant differences in the survival rate (SR) of turbot (>0.05). With decreasing dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios, the weight gain rate (WGR) first increased and then decreased. The WGR of the D6 group was significantly lower than that of the other groups (<0.05). The lipid deposition rate (LR) reduced with decreasing dietary n-3/n-6 fatty acid ratios, and the D6 group achieved 14.80, which was significant lower than that of the other group (<0.05). The trypsin content increased as the dietary n-3/n-6 LC-PUFA level decreased from 29.54 to 9.06, and then decreased. Lipase increased with decreasing n-3/n-6 LC-PUFA. As the dietary n-3/n-6LC-PUFA level decreased, fatty acid synthetase and glucose-6-phosphate dehydrogenase first increased and then decreased. When the dietary n-3/n-6 LC- PUFA level was 9.06, fatty acid synthetase levels were significantly higher than those in the other groups (<0.05). Additionally, glucose-6-phosphate dehydrogenase levels were significantly higher than those in the other groups (<0.05) when the dietary n-3/n-6 LC-PUFA level was 18.97. Aspartate aminotransferase, total protein, albumin, and high-density lipoprotein cholesterol first increased and then decreased with increasing dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios.These results indicate that, with decreasing dietary n-3/n-6 LC-PUFA ratios, resulting in reduced lipid deposition rate of juvenile turbot.

; n-3/n-6 LC-PUFA; Fat deposition;Digestive enzyme; Serum biochemical indices

ZHANG Limin, E-mail: zhanglimin@126.com

10.19663/j.issn2095-9869.20170417001

* 國家海洋生物產(chǎn)業(yè)–水生動物營養(yǎng)與飼料研發(fā)創(chuàng)新示范平臺(201701002)、山東省重點(diǎn)研發(fā)計劃(2016GSF115005)和山東省自然科學(xué)基金(ZR2015CQ023; 201701002)共同資助[This work was supported by the Marine Bio-Industry Innovation and Development Regional Demonstration Service Platform(201701002),Shandong Province Key Research and Development Program of China (2016GSF115005), and Shandong Provincial Natural Science Foundation, China (ZR2015CQ023; 201701002)]. 譚 青，E-mail:1242192819@qq.com

張利民, 研究員, E-mail: zhanglimin@126.com

2017-04-17,

2017-05-27

S963.1

A

2095-9869(2018)04-0066-08

譚青, 韓秀杰, 王際英, 李寶山, 李學(xué)麗, 郝甜甜, 張利民. n-3/n-6長鏈多不飽和脂肪酸對大菱鲆幼魚脂肪沉積、脂肪吸收及代謝相關(guān)酶活性和血清生化指標(biāo)的影響. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(4): 66–73

Tan Q, Han XJ, Wang JY, Li BS, Li XL, Hao TT, Zhang LM. Effects of n-3/n-6 n-3/ n-6 LC-PUFA on fat deposition, digestion, and lipid metabolism in juvenile turbot (). Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(4): 66–73