盧繼華

（朝陽市朝牧種畜場(chǎng)有限責(zé)任公司，遼寧 朝陽 122000）

發(fā)展現(xiàn)代肉羊產(chǎn)業(yè)，改進(jìn)經(jīng)營管理方式，完善產(chǎn)業(yè)鏈條和提升肉羊品牌，對(duì)進(jìn)一步促進(jìn)農(nóng)牧業(yè)結(jié)構(gòu)優(yōu)化升級(jí)、保護(hù)生態(tài)、增加農(nóng)民收入、加快綠色農(nóng)畜產(chǎn)品生產(chǎn)建設(shè)具有戰(zhàn)略意義和現(xiàn)實(shí)意義。朝陽市種羊場(chǎng)于2012年引進(jìn)了鮮胚移植技術(shù)，其優(yōu)點(diǎn)為：統(tǒng)一飼養(yǎng)、整齊度高，減少勞動(dòng)力，有利于市場(chǎng)銷售，利于訂單農(nóng)業(yè)的發(fā)展。本著為國家肉羊核心育種場(chǎng)提供技術(shù)資料儲(chǔ)備，同時(shí)培訓(xùn)改良服務(wù)分站技術(shù)人員的目的，我場(chǎng)進(jìn)行了不同年齡不同品種肉羊鮮胚移植妊娠率比對(duì)試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供體羊 選擇遺傳素質(zhì)優(yōu)秀、繁殖性能良好、營養(yǎng)狀況良好、體格健壯、沒有疾病的羊作為供體羊。本試驗(yàn)選取了50只不同月齡的白頭杜泊羊和50只白頭薩?？搜蜃鳛楣w羊分組并標(biāo)記：3月齡白頭杜泊羊10只，分為第一組；5月齡白頭杜泊羊10只，分為第二組；9月齡白頭杜泊羊10只，分為第三組；11～23月齡白頭杜泊羊20只，分為第四組；11～23月齡白頭薩?？搜?0只，分為第五組。

1.2 藥品及器材 藥品：胚胎培養(yǎng)液、冰袋、生理鹽水、苯扎氯銨、碘酒、獸用青霉素、黃嘌呤粉、FSH、孕馬血清、CIDR、羊用陰道海綿塞、氯前列醇（PG）、黃體酮、麻醉劑（2%安靜松）、蘇醒靈等。器材：高壓滅菌器、20 mL注射器、10 mL注射器、5 mL注射器、1 mL注射器、胚胎移植手術(shù)架、手術(shù)刀片、醫(yī)用縫合線、立體顯微鏡、紅胚管、收集方盤、培養(yǎng)玻璃皿、衛(wèi)生紙、醫(yī)用小噴壺、有色標(biāo)記筆、宮頸擴(kuò)張器、胚胎移植裝置、獸用剪刀、獸用手術(shù)剪、獸用解剖刀、長(zhǎng)止血鉗、毛巾夾、持針器、獸用手術(shù)銼、獸用縫合針、傷口巾、止血紗布、脫脂棉、臉盆等。

1.3 時(shí)間和地點(diǎn)2017年8～10月在朝陽市朝牧種羊場(chǎng)進(jìn)行。

1.4 超數(shù)排卵處理 供體母羊超排采用促卵泡素（FSH）遞減注射配合PMSG的方法。在同期發(fā)情后第10天開始，連續(xù)3 d，2次/d，間隔12 h注射FSH。第1次注射FSH的同時(shí)注射PMSG。第5次注射FSH的同時(shí)撤栓并肌肉注射PG。第6次注射FSH之前對(duì)供體母羊進(jìn)行試情，對(duì)發(fā)情的供體母羊頸靜脈注射黃體生成素（LH）。

1.5 供體受體羊發(fā)情鑒定 受體母羊取出海綿塞后，將公羊放入母羊群中，通過試情方法測(cè)試母羊發(fā)情情況，每天早晚各1次。挑選發(fā)情母羊，登記耳號(hào)，標(biāo)記后分組；供體母羊撤去CIDR栓后采用同樣的試情方法進(jìn)行發(fā)情鑒定，挑出發(fā)情母羊，記錄耳號(hào)，同時(shí)頸靜脈注射促黃體生成素，并在12 h后人工輸精。

1.6 子宮角輸精 手術(shù)前1 d停止喂食，自由飲水，并清潔手術(shù)部位。術(shù)前采用硬膜外麻醉聯(lián)合局部浸潤麻醉。手術(shù)部位皮膚先用2%～4%碘酒消毒，干燥后，用75%酒精棉擦去碘酒。將創(chuàng)巾固定在手術(shù)區(qū)域并暴露手術(shù)區(qū)域。使用外科手術(shù)刀將皮膚切開4～6 cm切口，沿著肌纖維的方向通過鈍性分離剝開肌肉，最后切開腹膜。切口時(shí)注意及時(shí)止血。操作者將食指和中指從切口插入腹腔中以接觸子宮角，用兩個(gè)手指夾住并將子宮角引導(dǎo)至傷口表面。觀察卵巢表面的排卵點(diǎn)和卵泡發(fā)育情況并記錄。子宮拉出切口，將稀釋的高質(zhì)量精液送入子宮角。在輸精前觀察卵巢的卵泡發(fā)育情況和排卵點(diǎn)情況，以確定輸精量是否輸精。子宮角一側(cè)通常推入0.2～0.6 mL精液。

1.7 閉合手術(shù) 行子宮角受精后，手術(shù)部位，特別是出血或凝血部位，用含有青霉素的生理鹽水沖洗。凝塊清除后，進(jìn)行縫合。在第一層中，用10～12根絲線縫合腹膜，然后散布少量青霉素。在第二層中，對(duì)皮膚和肌肉進(jìn)行結(jié)扎和縫合?？p合過程要注意傷口封閉以避免傷口退化和外翻?？p合針和針之間的距離約為0.5 cm，距離應(yīng)均勻，所有結(jié)打在同一側(cè)。最后，用鑷子處理切口中的真空皮膚以對(duì)齊傷口邊緣，然后切口用5%碘酒消毒。

1.8 胚胎移植 將母羊放在保定架上仰臥保定，切開乳房一側(cè)的腹壁，將子宮角和輸卵管拔出切口。如果胚胎來自供體的輸卵管，將包含胚胎的細(xì)吸管插入受體的輸卵管口中，緩慢注入輸卵管。從供體子宮角的頂端獲得的胚胎，在距離子宮角頂端12 cm處用鈍針刺破子宮，然后將連接了細(xì)導(dǎo)管的注射器裝載胚胎后插入子宮中，輕輕將含有胚胎的注射液推送入子宮，迅速使子宮和輸卵管復(fù)位，然后縫合腹壁。

1.9 數(shù)據(jù)處理 使用軟件檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種類和不同月齡的綿羊沖胚效果

表1 不同品種和不同月齡供體羊沖胚情況統(tǒng)計(jì)Table 1 Statistics of embryo flushing in different breeds and ages of donors

沖胚結(jié)果表明，使用130～140 IU的促卵泡素，10只3月齡的白頭杜泊羊，獲得的頭均胚胎數(shù)為3.8個(gè)，可用胚胎數(shù)為3.6個(gè)。使用145～155 IU促卵泡素處理的10只5月齡的白頭杜泊羊平均獲得5.5個(gè)胚胎，平均可用胚胎數(shù)為5.1枚。使用155～160 IU的促卵泡素處理的10只9月齡的白頭杜泊羊頭均獲得胚胎數(shù)是6.6個(gè)，可用胚胎數(shù)5.8個(gè)。使用170～180 IU促卵泡素處理的20只11～23月齡的白頭杜泊羊，頭均獲得胚胎數(shù)為7.0個(gè)，可用胚胎數(shù)為6.8。使用160～170 IU促卵泡素處理的50只11～23月齡的白頭薩?？搜?，頭均獲得胚胎8.3個(gè)，可用胚胎8.1個(gè)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，與11～23月齡供體相比，3月齡時(shí)的頭均獲得胚胎數(shù)可用胚胎數(shù)相比，差異顯著（P＜0.05）。其他各月齡組之間相比，獲得的胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)均無顯著差異（P＞0.05）。11～~23月齡的白頭薩福克羊和11～23月齡白頭杜泊羊之間，獲得的胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)沒有顯著差異（P＞0.05）。

2.2 移植結(jié)果

表2 不同月齡不同品種鮮胚移植妊娠率統(tǒng)計(jì)Table 2 Statistics of pregnancy rates in different ages and breeds

3月齡10只白頭杜泊羊共沖出38枚胚胎，可用胚胎為33枚，33枚鮮胚移植33只受體母羊，移植妊娠率為40%。5月齡10只白頭杜泊羊共沖出36枚胚胎，可用胚為33枚，33枚鮮胚移植33只受體母羊，移植妊娠率為48%。9月齡10只白頭杜泊羊共沖出52枚胚胎，可用胚胎為50枚，45枚鮮胚移植45只受體母羊，移植妊娠率為55%。11～23月齡20只白頭杜泊羊共沖出188枚胚胎，可用胚為184枚，184枚鮮胚移植184只受體母羊，移植妊娠率為71%。11～23月齡50只白頭薩?？搜蚬矝_出355枚胚胎，可用胚為346枚，346枚鮮胚移植346只受體羊，移植妊娠率為64%。

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)于不同月齡的白頭杜泊進(jìn)行沖胚，結(jié)果表明，3月齡、5月齡、9月齡和11～23月齡白頭杜泊頭均沖胚數(shù)和可用胚數(shù)分別為4.6枚和4.5枚、5.7枚和5.4枚、6.8枚和5.9枚、8.0枚和7.6枚。移植妊娠率分別為40%、48%、55%、71%。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，3月齡白頭杜泊的沖胚數(shù)和可用胚數(shù)與11～23月齡白頭杜泊沖胚數(shù)和可用胚數(shù)之間存在顯著差異（P＜0.05）。不同月齡白頭杜泊移植妊娠率差異不顯著（P＞0.05）。成年白杜泊沖胚數(shù)和可用胚數(shù)比3月齡和5月齡杜泊高的原因可能是3月齡和5月齡杜泊均為初產(chǎn)母羊，且生殖系統(tǒng)發(fā)育不成熟或處于發(fā)育旺盛期，影響其卵泡發(fā)育數(shù)量及卵母細(xì)胞質(zhì)量。不同年齡階段母羊?qū)λ幬锏拿舾行圆煌?1～23月齡白頭杜泊胚胎移植妊娠率相對(duì)較高的主要原因可能是成年母羊的卵巢發(fā)育好，沖胚數(shù)高，胚胎質(zhì)量好。成年母畜生殖系統(tǒng)發(fā)育成熟，易于胚胎著床。

4 結(jié)論

從本試驗(yàn)結(jié)果可以得出對(duì)于11～23月齡白頭杜泊羊和白頭薩?？搜蚴褂?70～180 IU促卵泡素進(jìn)行超數(shù)排卵效果較好。白頭薩福克羊作供體母羊比白頭杜泊羊利用價(jià)值高，胚胎移植潛力大。對(duì)于3月齡白頭杜泊羊使用130～140 IU促卵泡素進(jìn)行超數(shù)排卵效果不佳，移植妊娠率相對(duì)較低。