趙嘉晶 岳瑤函 施永美 高書榮 汪穎玨

（上海市普陀區(qū)人民醫(yī)院，上海 200232）

隨著我國經(jīng)濟(jì)水平的不斷提高，居民日常脂肪類食物的攝入量出現(xiàn)明顯上升，飲食習(xí)慣也發(fā)生了重大轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致脂代謝紊亂的發(fā)生率明顯上升［1-3］。因此由脂代謝紊亂所繼發(fā)的高脂血癥、非酒精性脂肪肝以及糖尿病等相關(guān)疾病的發(fā)生率呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢［4-6］。中醫(yī)藥在脂代謝紊亂類疾病的治療方面有著千年經(jīng)驗(yàn)的積累，具有獨(dú)特的優(yōu)勢。其中茵陳蒿湯通過多途徑發(fā)揮調(diào)節(jié)清脂祛濕、護(hù)肝利膽等作用，是高脂血癥、脂肪肝等疾病的重要方劑之一。本次研究旨在明確經(jīng)方茵陳蒿湯對于脂代謝紊亂的治療效果及其作用機(jī)制。筆者通過建立動物模式的方式進(jìn)行深入探討?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 40只潔凈級SD雄性大鼠，周齡為6～8 周，體質(zhì)量（120.34±11.49） g，購于西普爾必凱實(shí)驗(yàn)動物公司，動物許可證號：SCXK2013-0002。

1.2 試藥與儀器 茵陳蒿湯，組方：茵陳、大黃、梔子，3味藥物按2∶2∶1的配比制備為質(zhì)量濃度0.6 g/mL的中藥湯劑。藥材購自同仁堂健康藥業(yè)公司。自制高脂飼料（普通大鼠專用飼料83.25%，豬油10%，糖5%，膽固醇1.5%，脫氧膽酸鈉0.2%，丙硫氧嘧啶0.05%），屈臣氏蒸餾水，購自屈臣氏專賣店。主要試劑：三酰甘油（TAG）試劑盒（100 mL/盒，F(xiàn)001），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒（80 mL/盒，F(xiàn)004），高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）試劑盒 （80 mL/盒，F(xiàn)003-1），膽固醇（CH）試劑盒（80 mL/盒，F(xiàn)002），丙硫氧嘧啶（批號：20080304），脫氧膽酸鈉（批號：20160311）均購自南京建成生物制品研究所。主要儀器：電熱恒溫DKZ-2型恒溫水浴振蕩水槽、DHG-9123A型電熱恒溫干燥箱（上海精宏試驗(yàn)設(shè)備有限公司出品），WK-600A高速藥物研磨機(jī)（青州市精誠機(jī)械公司出品）1-15K型微量冷凍離心機(jī)、2-16K冷凍離心機(jī) （Sigma公司出品），ULT1386-3-V39超低溫（-80℃）冰箱）（美國 Thermo Scientific Revco公司出品），M2多功能酶標(biāo)儀 （美國Molecular Devices公司出品），AL104電子天平 （梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司出品），QT-2漩渦混合儀（上海琪特分析儀器公司出品），SP-400大容量生化培育箱（南昌新長征醫(yī)療科技公司出品）。

1.3 分組與造模 采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白對照組、模型組、陰性對照組和中藥組各10只，飼養(yǎng)于18～25℃、40%～50%相對濕度條件下的專用喂養(yǎng)室，自然光照，每日上午加水，更換墊料?？瞻讓φ战M給予正常大鼠專用飼料喂養(yǎng)，每日7～10 g，期間自由飲食、活動。模型組、陰性對照組與中藥組高脂飼料喂養(yǎng)，每日3次，每日7～10 g，限制活動，連續(xù)喂養(yǎng) 4周，期間保持喂養(yǎng)室內(nèi)清潔，仔細(xì)觀察全部大鼠的健康狀態(tài)，保證大鼠健康。建模后尾靜脈血樣3 mL，離心分離得血清，檢測血脂指標(biāo)（TAG、LDL-C、HDL-C、CH），炎性因子［腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）］，相關(guān)指標(biāo)［補(bǔ)體 3（C3）、補(bǔ)體 5（C5）、酚化刺激蛋白（ASP）、游離脂肪酸（FFA）］。 大鼠取血后妥善包扎，防止感染。以建模后TG、LDL-C、CH均高于空白對照組為建模成功［7］。

1.4 給藥方法 造模成功后，中藥組改用正常專用飼料喂養(yǎng)，同時(shí)按1 mL/100 g鼠體質(zhì)量 （生藥質(zhì)量0.6 g/mL）給予茵陳蒿湯灌胃［8］。陰性對照組改用正常專用飼料喂養(yǎng)，給予等劑量蒸餾水灌胃；模型組持續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，限制運(yùn)動量，不予任何干預(yù)，正常自由飲水，不給予任何液體灌胃。每日1次，持續(xù)5周。

1.5 標(biāo)本采集與檢測 末次給藥結(jié)束后，模型組、陰性對照組、中藥組再次取血檢測上述各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行組間對比。以空白對照組與模型組、陰性對照組、中藥組建模后檢測數(shù)據(jù)為基礎(chǔ)分析血脂指標(biāo)與相關(guān)指標(biāo)間的相關(guān)性，分析脂代謝紊亂與炎性因子、相關(guān)指標(biāo)間的相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，其中多組計(jì)量資料采取單因素方差分析，兩兩對比采取LSD（L）檢驗(yàn)；非連續(xù)變量相關(guān)性采取Spearman檢驗(yàn)，連續(xù)變量相關(guān)性采取Pearson檢驗(yàn)；校驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組血脂指標(biāo)比較 見表1。建模后治療前空白對照組、模型組、陰性對照組、中藥組各組間TAG、LDL-C、CH、HDL-C水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）；空白對照組大鼠血清TAG、LDL-C、CH表達(dá)水平均低于其他3組，HDL-C高于其他3組 （P<0.05），模型組、陰性對照組、中藥組3組間TAG、LDL-C、CH、HDL-C均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。治療后模型組、陰性對照組、中藥組 3組間 TAG、LDL-C、CH、HDL-C 水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）；中藥組HDL-C高于模型組、陰性對照組，中藥組TAG、LDL-C、CH均低于模型組、陰性對照組（P<0.05），陰性對照組TAG及CH低于模型組、HDL-C高于模型組 （P<0.05），模型組與陰性對照組LDL-C水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表1 各組血脂指標(biāo)比較（mg/dL，±s）

表1 各組血脂指標(biāo)比較（mg/dL，±s）

與空白對照組治療前比較，*P＜0.05；與模型組治療后比較，☆P＜0.05；與陰性對照組比較，★P＜0.05。 下同

組別 時(shí)間空白對照組 治療前TAG LDL-C HDL-C CH 51.92±4.58 2.51±1.08 1.29±0.04 1.89±0.23（n＝10） 治療后 - - - -模型組 治療前 66.99±4.46* 10.97±1.09* 0.61±0.04* 10.74±0.66*（n＝10） 治療后 73.11±2.18 11.44±1.71 0.51±0.02 11.5±1.08陰性對照組 治療前 66.89±5.08* 10.82±1.05* 0.61±0.05* 10.7±0.64*（n＝10） 治療后 65.78±0.02☆ 10.63±0.01 0.69±0.02☆ 10.24±0.01☆中藥組 治療前 66.97±4.95* 10.82±1.12* 0.61±0.06* 10.71±0.66*（n＝10） 治療后 52.73±6.23☆★ 6.19±0.89☆★ 0.87±0.05☆★ 6.97±0.26☆★

2.2 各組炎性因子水平比較 見表2。治療前空白對照組、模型組、陰性對照組、中藥組四組間TNF-α、IL-6表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；空白對照組大鼠血清TNF-α、IL-6表達(dá)水平低于其他3組（P<0.05），模型組、陰性對照組、中藥組組間 TNF-α、IL-6差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療后模型組、陰性對照組、中藥組組間大鼠血清TNF-α、IL-6表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；經(jīng)兩兩比較驗(yàn)證，中藥組TNF-α、IL-6表達(dá)水平低于模型組、陰性對照組（P<0.05），模型組與陰性對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表2 各組炎性因子水平比較（ng/L，±s）

表2 各組炎性因子水平比較（ng/L，±s）

組 別 時(shí)間空白對照組 治療前TNF-α IL-6 26.65±2.78 49.37±2.36（n＝10） 治療后 - -模型組 治療前 73.51±6.69* 137.21±6.18*（n＝10） 治療后 74.59±1.05 142.2±3.82陰性對照組 治療前 73.53±5.21* 139.01±6.01*（n＝10） 治療后 73.14±0.01☆ 138.82±0.03☆中藥組 治療前 73.52±6.85* 139.02±6.87*（n＝10） 治療后 63.83±6.66☆★ 120.13±5.94☆★

2.3 各組 C3、C5、ASP、FFA表達(dá)水平比較 見表 3。治療前空白對照組、模型組、陰性對照組、中藥組組間C3、C5、ASP、FFA表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）； 空白對照組大鼠 C3、C5、ASP、FFA 表達(dá)水平低于其他3組（P<0.05），模型組、陰性對照組、中藥組組間 C3、C5、ASP、FFA 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P>0.05）。治療后模型組、陰性對照組、中藥組組間C3、C5、ASP、FFA表達(dá)水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；經(jīng)兩兩比較驗(yàn)證，中藥組 C3、C5、ASP、FFA 低于模型組、陰性對照組（P<0.05），陰性對照組C3低于模型組（P<0.05），模型組與陰性對照組C5、ASP、FFA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

表 3 各組 C3、C5、ASP、FFA 表達(dá)水平比較（±s）

表 3 各組 C3、C5、ASP、FFA 表達(dá)水平比較（±s）

組 別 時(shí)間空白對照組 治療前C3（g/L） C5（mg/L） ASP（nmol/L） FFA（mol/L）0.36±0.14 50.12±2.67 25.87±2.69 213.76±17.84（n＝10） 治療后 - - - -模型組 治療前 1.87±0.17* 85.31±6.07* 45.96±2.8* 508.87±37.47*（n＝10） 治療后 1.99±0.05 85.98±0.05 46.43±0.02 510.59±0.02陰性對照組 治療前 1.86±0.17* 85.31±6.61* 45.89±2.46* 508.17±36.42*（n＝10） 治療后 1.69±0.02☆ 85.09±0.02 45.16±0.02 507.89±0.03中藥組 治療前 1.87±0.2* 85.37±6.93* 45.96±2.55* 508.24±42.97*（n＝10） 治療后 0.98±0.17☆★ 69.22±6.24☆★ 34.72±2.07☆★ 459.81±39.39☆★

2.4 血脂指標(biāo)與 C3、C5、ASP、FFA相關(guān)性 見表 4。TAG、LDL-C、CH 與 C3、C5、ASP、FFA 間均具有高度正相關(guān)性（0.8

表4 血脂指標(biāo)與相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性分析統(tǒng)計(jì)值表（r/p）

2.5 脂代謝紊亂與炎性因子、C3、C5、ASP、FFA 相關(guān)性 見表5。脂代謝紊亂與炎性因子、相關(guān)指標(biāo)間均具有中度正相關(guān)性（0.8

表5 脂代謝紊亂與炎性因子、相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性分析統(tǒng)計(jì)值表

3 討 論

脂代謝紊亂的形成機(jī)制較為復(fù)雜，通常認(rèn)為與飲食結(jié)構(gòu)、生活習(xí)慣、遺傳因素等多種因素有關(guān)。脂代謝紊亂可誘發(fā)多種相關(guān)疾病，主要可見高脂血癥、脂肪肝、糖尿病等。盡早調(diào)節(jié)脂肪代謝可有效預(yù)防或延緩高脂血癥、脂肪肝、糖尿病等繼發(fā)疾病的發(fā)生［9］。脂代謝紊亂的主要發(fā)病機(jī)制為：外周脂肪增多，誘導(dǎo)FFA的入肝量顯著上升，提高了TAG的合成功能；HDL-C的分泌與合成降低導(dǎo)致LDL-C的分泌升高，CH的含量明顯上升，從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)運(yùn)出肝的TAG量顯著減少，最終形成脂代謝紊亂的病理演進(jìn)過程。FFA的異常升高可為脂質(zhì)的過氧化性反應(yīng)提供充足的反應(yīng)基質(zhì)。C3、C5在脂代謝紊亂及相關(guān)疾病患者中均可見顯著升高。有研究表明C3、C5與脂代謝紊亂及非酒精性脂肪肝的形成具有密切關(guān)系［10-12］。脂代謝紊亂導(dǎo)致血脂水平顯著上升，TAG、LDL-C等升高可致使CH轉(zhuǎn)動受限，從而均可誘發(fā)血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致心腦血管意外發(fā)生。TNF-α、IL-6作為重要的炎性因子在這一病變過程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的促進(jìn)作用。本次研究結(jié)果表明，模型組大鼠血清中的LDL-C、TAG、CH等含量異常上升而HDL-C的含量明顯下降，說明高脂飲食能夠有效誘導(dǎo)脂代謝紊亂形成及演進(jìn)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脂代謝紊亂屬于痰濕雍盛之證。主要誘因?yàn)檫^食厚味、肥甘，久之導(dǎo)致脾失運(yùn)化、聚濕生痰，或遇情志失調(diào)致使氣滯血瘀、肝郁痰凝、燥熱糾結(jié)而成疾病。經(jīng)方茵陳蒿湯以茵陳為君，可有效清肝利膽；以梔子為臣可清三焦之熱，引熱下行經(jīng)小便排出體外；佐以大黃起到逐瘀活血，蕩滌胃腸、通便清熱之功［13-17］。三藥共用，能夠起到清熱降燥、活血化瘀、疏肝利膽，引熱下行之功。本次研究中我們對模型組大鼠給予茵陳蒿湯治療，結(jié)果表明灌喂茵陳蒿湯后中藥組大鼠血清中的TAG、LDL-C、CH含量均可見明顯下降，同時(shí)HDL-C的含量明顯上升，均優(yōu)于模型組與陽性藥物組；證明茵陳蒿湯能夠有效調(diào)節(jié)脂代謝紊亂大鼠的血脂水平。同時(shí)灌胃茵陳蒿湯后中藥組大鼠血清中的炎性因子TNF-α、IL-6的表達(dá)水平顯著降低；相關(guān)因子C3、C5、ASP、FFA的表達(dá)水平均可見明顯改善，均優(yōu)于模型組與陽性藥物組。通過相關(guān)性分析證明，TNF-α、IL-6、C3、C5、ASP、FFA 的表達(dá)水平均與脂代謝紊亂發(fā)生具有正相關(guān)性，因此可知 TNF-α、IL-6、C3、C5、ASP、FFA的異常升高提示脂代謝紊亂的發(fā)生。本次研究中我們對血脂指標(biāo)與C3、C5、ASP、FFA的表達(dá)水平進(jìn)行了相關(guān)性分析，結(jié)果血脂指標(biāo)與C3、C5、ASP、FFA的表達(dá)水平間具有明確的相關(guān)性，提示血脂水平越高C3、C5、ASP、FFA的表達(dá)也可出現(xiàn)明顯升高，脂代謝紊亂相關(guān)疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)也明顯升高。因此，筆者認(rèn)為茵陳蒿湯能夠有效改善脂代謝紊亂大鼠的血脂水平、炎性狀態(tài)并由此降低高脂血癥、脂肪肝等相關(guān)疾病發(fā)生的概率。

綜上所述，茵陳蒿湯對于脂代謝紊亂大鼠的血脂指標(biāo)、炎性因子以及相關(guān)指標(biāo)均具有明確的改善作用，因此可有效預(yù)防或延緩脂代謝紊亂相關(guān)疾病的發(fā)生。