楊 超，程紅亮，薛曉婕，殷恒斌，耿 飛，李 娜

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，合肥 230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，合肥 230061）

血管性癡呆（VD）是由缺血性、出血性腦卒中或缺血缺氧性腦損害所引起的一種綜合征，其最主要的表現(xiàn)為認(rèn)知障礙[1]。近年來，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，人口老齡化進(jìn)程不斷加快及環(huán)境污染問題日益加重，我國(guó)老年人群患上癡呆的概率急劇上升，并且有呈年輕化的趨勢(shì)[2]。而隨著近年來腦血管病發(fā)病率的逐年增高，血管性癡呆發(fā)病也在呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。目前，已成為引起老年期癡呆中僅次于阿爾茨海默癥的第2大病因[3-4]。由于血管性癡呆主要以認(rèn)知障礙為主要表現(xiàn)癥狀，患者通常會(huì)喪失日常生活能力。因此，往往給家庭和社會(huì)造成嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[5]。但是到目前為止，在治療血管性癡呆的藥物當(dāng)中還沒有哪種藥物能達(dá)到令人滿意的療效。血管性癡呆與阿爾茲海默癥不同，它是一種完全可以預(yù)防、改善甚至可逆的病癥。血管性癡呆的預(yù)防與治療已越來越被人們所重視。本研究通過復(fù)制血管性癡呆的模型，治療予以針刺百會(huì)、四神聰、大椎等穴位，通過檢測(cè)血管性癡呆大鼠血清中的TNF-α含量和對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，來闡明針刺對(duì)血管性癡呆的作用效果。以期為針灸在防治血管性癡呆中提供更為豐富和堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 選取4月齡SPF級(jí)Wistar健康雄性大鼠90只。

1.2 造模 將4月齡Wistar大鼠采用頸總動(dòng)脈結(jié)扎反復(fù)缺血再灌注法制備模型[6]，將大鼠放于電子秤上稱重，按體質(zhì)量以0.3 mL/100 g計(jì)算10%水合氯醛用量，

腹腔注射麻醉，待大鼠完全麻醉昏迷后，將大鼠放置于大鼠固定板上，仰臥，四肢頭部固定，剃毛后皮膚消毒，采取頸正中切口，使用鈍性玻璃分針，將雙側(cè)頸總動(dòng)脈分離，并使用動(dòng)脈夾夾閉兩側(cè)頸總動(dòng)脈，以阻斷血流20 min，同時(shí)在尾部放血0.3 mL，放血完畢后熱凝止血，松開動(dòng)脈夾以恢復(fù)血流10 min，然后再次夾閉血管阻斷血流20 min，如此重復(fù)3次，待第3次血流再灌注后30 min，觀察大鼠的呼吸、心跳是否正常，如若正常，則在切口處注入適量的慶大霉素以預(yù)防感染。皮膚縫合后消毒切口，大鼠保溫處理，待大鼠蘇醒后放于鼠籠中常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3 分組 將90 只Wistar雄性大鼠按電腦隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分成正常對(duì)照組24只，其余66只進(jìn)行血管性癡呆模型的復(fù)制，由于麻醉過量、頸動(dòng)脈分離失敗等原因在造模復(fù)制中死亡18只，將剩余的48只隨機(jī)分為VD模型組和針刺治療組。每組24只。

1.4 治療方法 針刺治療于造模5 d后即開始進(jìn)行。按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[7]穴位的標(biāo)準(zhǔn)定位選取百會(huì)、大椎、四神聰[8]。操作方法：將大鼠放置于鼠板上，四肢固定，頭部用特制的大鼠頭部固定器進(jìn)行固定，保持其清醒狀態(tài)下，常規(guī)消毒，用0.25 mm×25 mm天協(xié)牌毫針針刺四神聰、百會(huì)，平刺0.25 cm，大椎斜刺0.5 cm。施以捻轉(zhuǎn)手法，持續(xù)3 min。1次/d，30 min/次。正常對(duì)照組不做任何處置，模型組與針刺組平行，但模型組只綁于固定臺(tái)上而不做其他處理。

1.5 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 在造模完成后于第4天進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，以鑒定造模是否成功。并于治療結(jié)束后第3天開始進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按Longa E Z等[9]制定的 5 級(jí)評(píng)分法改進(jìn)：無神經(jīng)功能喪失為0 級(jí)，評(píng)分為0 分；右前肢或左前肢不能充分伸展評(píng)為1級(jí)，評(píng)分為1 分；大鼠向右或向左環(huán)行運(yùn)動(dòng)評(píng)為2 級(jí)，顯示輕度局灶神經(jīng)功能喪失，評(píng)分為2 分；若大鼠向右側(cè)或向左側(cè)傾倒則評(píng)為3 級(jí)，顯示中度局灶神經(jīng)功能喪失，評(píng)分為3 分；大鼠不能自然行走，喪失行走能力的評(píng)為4級(jí)，重度局灶神經(jīng)功能喪失，評(píng)分為4 分。評(píng)分需要達(dá)到 1～4 分才能鑒定模型為成功。

1.6 大鼠血清中TNF-α含量的測(cè)定 選取開始治療后第6、12、18天 3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別對(duì)3個(gè)實(shí)驗(yàn)組大鼠經(jīng)心臟取血，取血后放置于無菌干燥的試劑管內(nèi)靜置2 h，高速離心2 500 r/min，離心 10 min，待試管內(nèi)3組大鼠血清完全分離后，放置于恒溫為- 20 ℃的冰箱中備檢。大鼠血清中TNF-α的含量檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（Elise）[10]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用國(guó)際通用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，各實(shí)驗(yàn)組所得的結(jié)果均使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示（x±s），數(shù)據(jù)要先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，取齊性檢驗(yàn)水平α = 0.10。同一試驗(yàn)組的各不同時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，不同實(shí)驗(yàn)組的同一時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)比較選用t檢驗(yàn)，結(jié)果顯著性水平均取 α = 0.05。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分

2.1.1 造模后第4天各組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較 見表1。

表1 造模后第4天各組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較（x± s ，n = 24） 分

從表1中可以看出，造模結(jié)束4 d后，模型組和針刺組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯高于對(duì)照組，且模型組與針刺組行為學(xué)評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明血管性癡呆大鼠模型制作成功。

2.1.2 治療結(jié)束后第3天各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較 見表2。

表2 治療結(jié)束后第3天各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分比較（x± s，n = 24） 分

結(jié)果如表2所示，針刺組在治療結(jié)束3 d后的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯低于治療前（P＜0.05），且治療結(jié)束3 d后針刺組與模型組相比神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著降低（P＜0.01）。表明針刺治療能顯著改善大鼠神經(jīng)功能。

2.2 治療后不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠血清 TNF-α含量變化比較 見表3。

表3 治療后不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠血清 TNF-α含量變化比較（x± s，n = 24） ng/L

3 討論

血管性癡呆病位在腦，督脈與腎、腦、心等臟器及膀胱經(jīng)、腎經(jīng)、心經(jīng)、任脈等經(jīng)絡(luò)密切相關(guān)[11-14]。百會(huì)、大椎均為督脈穴位，其中大椎為三陽、督脈之會(huì)，百會(huì)為督脈、足太陽之會(huì)，四神聰位于頭部，百會(huì)四方，具有健腦調(diào)神，醒腦開竅的作用，針刺諸穴能貫通督脈，開竅醒腦，引氣血上行，既能醒腦養(yǎng)神，又可通絡(luò)化瘀，故治療血管性癡呆可收到標(biāo)本兼治之效。

現(xiàn)代研究[15-17]表明，腦缺血后炎癥反應(yīng)是造成腦缺血后遺癥的重要原因之一。缺血性癡呆作為腦缺血后遺癥之一，其發(fā)生與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。TNF-α作為腦缺血后重要炎性因子之一[18-19]，在腦缺血后，其含量在機(jī)體血清中迅速升高，而控制并降低TNF-α含量可有效改善并防治血管性癡呆。本研究通過采用頸總動(dòng)脈結(jié)扎反復(fù)缺血再灌注法制備血管性癡呆模型，給予針刺百會(huì)、大椎、四神聰治療，以各組大鼠血清中TNF-α含量高低，揭示針刺對(duì)TNF-α的影響。在表1和表2中可見，對(duì)照組的神經(jīng)功能評(píng)分為0，這是由于對(duì)照組的大鼠未有腦血管損傷，而模型組和針刺組皆有神經(jīng)功能缺損的癥狀，但在表2中針刺組通過針刺治療后2組的神經(jīng)功能評(píng)分存在明顯差異，因此，神經(jīng)功能評(píng)分不僅能鑒定血管性癡呆模型是否制作成功，還能通過神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分表明針刺對(duì)血管性癡呆大鼠神經(jīng)功能的改善作用。結(jié)果表明，針刺可以有效降低腦缺血后血清中TNF-α的含量，改善血管性癡呆的神經(jīng)精神癥狀，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。