陶柳

摘要 目的：探討貴州遵義地區(qū)婦女感染人乳頭瘤病毒與年齡、基因亞型的關(guān)系，為當(dāng)?shù)豀PV感染分子流行病學(xué)和婦女宮頸病變的篩查與預(yù)防提供理論依據(jù)。方法：1655例婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本，均行HPV實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（pCR）法檢測(cè)，分析檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：HPV陽(yáng)性277例（HPV陽(yáng)性率16.73%》。HPV感染在21-25歲年齡段最高（陽(yáng)性率28.46%》。其中以高危型感染為主，檢出214例（感染率12.93%》。居前3位的基因型分別為HPV16型81例（陽(yáng)性率34.91%》，HPV52型50例（陽(yáng)性率21.550x》，HPV18型39例（陽(yáng)性率16.810x》。感染結(jié)果中多重感染占42.24%），以二重感染為主，單一感染例數(shù)為多重感染的1.37倍。結(jié)論：HPV感染以高危型及單一感染為主，多見(jiàn)分型為HPV16、52、18型。其中年齡與HPV感染有很大相關(guān)性。應(yīng)加強(qiáng)健康意識(shí)、自我保護(hù)和定期篩查，及時(shí)防治HPV，預(yù)防宮頸癌。

關(guān)鍵詞 人乳頭瘤病毒；感染；分析

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種乳頭瘤空泡病毒A屬的球形DNA病毒。其在世界范圍內(nèi)有著較高的流行水平，主要通過(guò)直接或間接接觸污染性物品或性傳播感染人類的皮膚和黏膜上皮細(xì)胞，引起人類皮膚的多種乳頭瘤狀或疣及宮頸上皮增生性損害[1]。長(zhǎng)期反復(fù)感染HPV甚至?xí)l(fā)展為宮頸癌。早在1995年WHO已將HPV確定為宮頸癌的病因[2]。目前，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)有液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)、熒光PCR檢測(cè)、二代雜交捕獲法等。本研究通過(guò)熒光PCR法對(duì)HPV進(jìn)行檢測(cè)分析，預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)生危險(xiǎn)度，對(duì)決定治療方案、檢查間隔、追蹤隨訪和宮頸癌預(yù)防有重要意義。

資料與方法

選擇2016年3月-2017年3月于遵義市貴州航天醫(yī)院婦科門診、住院部以及體檢中心檢測(cè)HPV的受檢者共1 655例有性生活史的女性作為本次研究的對(duì)象，年齡16 - 65歲，平均（37.9±10.3）歲。樣本為宮頸分泌物，采樣時(shí)用于棉球擦凈宮頸口分泌物，將專用宮頸毛刷前半部置于宮頸管內(nèi)1 cm，適當(dāng)加壓，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈左右，收集宮頸管內(nèi)及外口的脫落上皮細(xì)胞，放人專用細(xì)胞保存液管。

方法：①提取核酸。將所取樣本經(jīng)過(guò)漩渦法震蕩，洗凈刷頭上的細(xì)胞，離心沉淀，吸取上清液沉淀宮頸脫落細(xì)胞。如遇紅細(xì)胞過(guò)多的樣本還需加入適量的紅細(xì)胞裂解液進(jìn)行處理，再加入相應(yīng)裂解液，用人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒，提取并保存DNA。②引物和探針設(shè)計(jì)經(jīng)序列分析。各型HPV的非編碼區(qū)及E1、E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。通用引物選擇在E1和L1區(qū)，型特異引物選擇在E6和E7區(qū)。單鏈引物長(zhǎng)度15 - 20 hp，G/C含量20%-30%。Taq-Man引物的Tm值在68 - 70℃。③PCR反應(yīng)將提取的核酸由PCR儀，經(jīng)過(guò)變性（94 - 95℃）、退火（50 - 55℃）、延伸（72-73℃）共40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，最后通過(guò)相應(yīng)PCR軟件采集熒光探針信號(hào)完成試驗(yàn)?？蓪?duì)18種高危型（HPV16、18、31、59、 53、 33、 58、 56、 52、 51、 82、73、68）及3種低危型（6、11、81）核酸予以分類檢測(cè)。④結(jié)果判定。標(biāo)本核酸提取全過(guò)程嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書操作，對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。定量檢測(cè)的擴(kuò)增曲線呈S型且CT值< 36為陽(yáng)性結(jié)果（見(jiàn)圖1）。陽(yáng)性結(jié)果中有≥2個(gè)類型屬于多重感染，同時(shí)出現(xiàn)高危型和低危型結(jié)果為混合型。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 19.0分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，采用f檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，采用x-檢驗(yàn)；P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

不同年齡段女性患者感染HPV高危型、低危型、混合型陽(yáng)性率變化情況：18類高危型和低危型均在陽(yáng)性患者中檢出，其中高危型214例，陽(yáng)性率12.93%（214/1655）；低危型45例，陽(yáng)性率2.72%（45/1655）；混合型18例，陽(yáng)性率1.08%（18/1655），見(jiàn)表1。

FQ-PCR法檢測(cè)HPV感染在患不同亞型女性患者的分布情況：在232例高危型結(jié)果中，前3位高危型感染由高到低依次是HPV16型f34.91）%，HPV52型（21.55%），HPV18型（16.81%）。中國(guó)地區(qū)常見(jiàn)的HPV52、58、33型分別為21.55%，14.66%，5.17%。其中HPV16型在< 31歲最多；HPV52型隨年齡增高逐漸下降；HPV18型在各年齡段分布差異不大，見(jiàn)圖1。

不同年齡段女性HPV單一感染與多重感染狀況：感染標(biāo)本中單一感染較多，為57.76% （160/277）；多重感染42.24%（117/277），包括二重感染31.41%（87/277），三重感染10.83%（30/277），見(jiàn)表2。

討論

宮頸癌嚴(yán)重危害婦女的健康與生命，是目前女性高發(fā)惡性腫瘤之一。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全世界每分鐘都有確診新發(fā)病例，每2分鐘就有1例婦女死于宮頸癌，在中國(guó)每天約有80例婦女死于此疾病，并從1994年至今任呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[3]。女性HPV感染有較大的地區(qū)差異，總體報(bào)告范圍在6.4%- 25.6%，其中南美洲12.3%，非洲22.1%，北美洲20.4%，歐洲8.1%，亞洲18.0%[4]。分析認(rèn)為形成感染差異的原因可能是不同地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、健康意識(shí)和生活方式不同造成的。中國(guó)感染率在16%- 30%，不同省份略有差異，如四川21.98%，重慶27.3%，貴州23.76%[5]。本調(diào)查顯示感染率16.73%，較其他地區(qū)少，可能是由于居民意識(shí)較好、體檢人數(shù)偏多所致。

依據(jù)HPV危險(xiǎn)程度可以分為高危型和低危型。本研究中高危型占感染數(shù)的12.93%，低危型占2.72%，混合型占1.08%。據(jù)國(guó)內(nèi)外流行病學(xué)發(fā)現(xiàn)HPV感染隨年齡呈兩頭高的‘V形，國(guó)外報(bào)告高危年齡在16 - 24歲，40 - 49歲；國(guó)內(nèi)報(bào)告在20 - 24歲，40 - 44歲[6]。本文報(bào)告高危年齡在16 - 25歲，40 - 44歲，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)一致。其中< 30歲的HR-HPV陽(yáng)性率最高為16.78%，隨年齡增高有所下降；30 - 40歲LR-HPV為3.35%，年齡沒(méi)有差異。針對(duì)此類情況，提示16 - 25歲和40 - 44歲感染HPV概率較高，應(yīng)引起警示。

現(xiàn)研究已發(fā)現(xiàn)HPV感染型有>150種，HPV感染陽(yáng)性的婦女在2年內(nèi)有15% - 28%進(jìn)展為宮頸鱗狀上皮病變，尤其是HPV16、18型感染危險(xiǎn)性更高[7]。HPV感染亞型分類研究發(fā)現(xiàn)，高危型HPV16、18型無(wú)明顯地區(qū)差異，是最常見(jiàn)的感染型，感染率約64%，在亞洲以52、33、58型居多[8，9]。我國(guó)南方地區(qū)調(diào)查發(fā)現(xiàn)主要為16、18、52型，北方為HPV16、58、33型。本研究地區(qū)處于中國(guó)南方，基因分型前5位由高到低依次是HPV16型、HPV52型、HPV18型、HPV58型和HPV51型，與參考文獻(xiàn)符合。HPV的多重感染危害較大，較單一感染更易造成宮頸病變：本研究是以單一感染為主，占感染數(shù)的57.76%，是多重感染的1.3倍，多重感染中二重感染占感染數(shù)的74.36%，與大部分報(bào)告相似。

綜上所述，HPV感染是一個(gè)比較漫長(zhǎng)的過(guò)程，具有可逆性，連續(xù)感染HPV>2年，會(huì)造成官頸上皮內(nèi)瘤變，8 - 12年就會(huì)發(fā)展為癌變[10]。因此，宮頸癌的發(fā)生具有一定的可控性。本研究希望通過(guò)對(duì)遵義地區(qū)HPV感染情況、年齡與基因類型的了解和分析，有針對(duì)性地對(duì)婦女行相關(guān)檢測(cè)和預(yù)防，加強(qiáng)早期篩查和治療，為防治宮頸癌提供有利依據(jù)。