黃春梅 盧童 周治軍 徐康 龔娟

腎癌(renal cell tumors, RCC)是腎臟最常見的實質(zhì)性腫瘤，其中腎透明細胞癌最為多見，據(jù)統(tǒng)計其發(fā)病率每年約增長2%～4%[1-3]。目前，外科手術(shù)(腎癌根治性切除或保留腎單位的腎部分切除)仍然是RCC最常用的治療手段。但是，RCC的發(fā)生和發(fā)展表現(xiàn)非常多樣化，不同患者的預后差異很大，由于缺乏預測患者預后的方法，給臨床工作中為患者制定個體化治療方案帶來諸多困難。因此，找到一種適用于評估RCC預后的生物學指標顯得非常重要。

熱休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)是一種鈣結(jié)合蛋白，在細胞質(zhì)功能蛋白的折疊、轉(zhuǎn)運和降解中發(fā)揮著重要作用。有研究表明，HSP70在腫瘤組織中的高表達往往提示此類腫瘤具有更強的增殖能力和侵襲性，可作為腫瘤預后判斷的指標[4-5]。本研究中，我們采用免疫組化方法對腎透明細胞癌組織中HSP70的表達水平進行了檢測，并結(jié)合患者的臨床進展情況初步探討HSP70在判斷RCC患者預后中的作用。

對象與方法

一、研究對象

選取天門市第一人民醫(yī)院2011年5月至2012年5月期間收治的51例RCC患者手術(shù)標本，其中男39例，女12例；平均年齡(66.5±7.1)歲，臨床分期均為Ⅰ～Ⅱ期(AJCC分期)。所有患者均接受手術(shù)治療切除腫瘤病灶(腎癌根治或腎部分切除)，術(shù)后病檢均確診為腎透明細胞癌，其中Fuhrman分級Ⅰ～Ⅱ級17例，Ⅲ～Ⅳ級34例，術(shù)后均接受了規(guī)范的免疫治療(烏苯美司30 mg/次，每周2～3次，使用10個月；或重組人白細胞介素-2 50萬IU皮下注射，每周2次，共4周)。同時選取5例癌旁組織作為免疫組化對照組。

二、免疫組化檢測

采用SABC法對腫瘤標本進行免疫組化檢測，所用標本經(jīng)固定、包埋、切片后，經(jīng)脫蠟入水并阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，隨后微波處理進行抗原修復。所有切片經(jīng)兔抗人HSP70抗體(CST公司，美國)孵育過夜(1∶1 000)，再經(jīng)洗脫處理后，使用SABC試劑盒(博士德公司，武漢)按二抗孵育流程處理后顯色，并在顯微鏡下觀察HSP70表達情況，HSP70主要表達于細胞質(zhì)，每張切片隨機選取5個視野，以高倍鏡下呈中度到深度棕黃顯色，并且此類細胞在視野中超過25%定為HSP70高表達，其余定為低表達[6]。

三、隨訪

所有患者經(jīng)過5～60個月隨訪，每2～3個月復查泌尿系及肝臟B超，每6個月復查胸片及腹部CT，觀察并記錄患者無進展生存時間(progress free survival, PFS)，然后統(tǒng)計患者的無進展生存率。其中PFS為患者以接受手術(shù)時間為起點，直至發(fā)生腫瘤進展(如復發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡等)的時間間隔。

四、統(tǒng)計學方法

統(tǒng)計軟件采用SPSS 19.0，免疫組化表達率的比較采用卡方檢驗，患者無進展生存率的比較采用Kaplan-Meier生存分析法進行比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、HSP70在RCC中的表達及其與病理分級的關(guān)系

在51例RCC標本中，有30例HSP70呈高表達，21例呈低表達，高表達率為58.8%。其中Fuhrman Ⅰ～Ⅱ級RCC組織中有6例呈高表達(35.3%)，F(xiàn)uhrman Ⅲ～Ⅳ級RCC組織中有24例呈高表達(70.6%)，兩組間高表達率差異有統(tǒng)計學意義(P=0.016，表1)，而所有癌旁組織中HSP70均為低表達(圖1)。

表1 HSP70表達與RCC病理分級的關(guān)系[例(%)]

二、RCC中HSP70表達水平與患者無進展生存率的關(guān)系

經(jīng)過5～60個月隨訪，所有患者的中位PFS為35個月，至隨訪結(jié)束時，HSP70高表達患者的無進展生存率為22.6%，HSP70低表達患者的無進展生存率為55.0%，兩組患者的無進展生存率差異有統(tǒng)計學意義(P=0.004，圖2)。

A：部分RCC組織中呈低表達；B：多數(shù)RCC組織中呈高表達；C：在所有對照組癌旁組織中呈低表達

圖1 HSP70在RCC組織及癌旁組織中的表達(SABC法，×100)

圖2 HSP70高表達與低表達患者無進展生存率對比

討 論

當前，RCC的首選治療是手術(shù)切除病灶，由于腎透明細胞癌對于放療及化療并不敏感，因此術(shù)后多采用免疫治療。但是，RCC的預后在不同的患者表現(xiàn)差異很大，在臨床工作中缺乏合適的預后判斷指標，為制定合理的治療方案帶來許多困難，本研究中我們以HSP70為指標初步探討其與腎透明細胞癌預后的關(guān)系。

HSP70是一類主要存在于胞質(zhì)內(nèi)的可溶性蛋白，是一類結(jié)構(gòu)高度保守的蛋白質(zhì)分子，基于表達情況可分為結(jié)構(gòu)型HSP70和應激型HSP70，細胞內(nèi)所表達的主要為結(jié)構(gòu)型HSP70，亦稱為葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78[7]。HSP70的N端結(jié)構(gòu)域具有ATP酶活性，C端的疏水結(jié)構(gòu)可結(jié)合多種新合成肽鏈，可幫助蛋白分子完成折疊及轉(zhuǎn)運[8]。HSP70在細胞內(nèi)發(fā)揮著分子伴侶、抗氧化、抗細胞凋亡等重要作用，在很多腫瘤細胞中呈高表達，并常常對腫瘤的進展和增殖起促進作用[9-10]。

本研究中，我們首先采用免疫組化染色對腎透明細胞癌組織中HSP70的表達進行了檢測，結(jié)果顯示，多數(shù)RCC組織中HSP70呈高表達，而且，較高病理分級的RCC組織中HSP70的高表達率(70.6%)明顯高于較低病理分級的RCC組織(35.3%)，表明腫瘤細胞的分化越差、惡性度越高，其HSP70表達越強。同時，我們研究了HSP70表達水平與患者無進展生存率之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，HSP70高表達的患者，其無進展生存率明顯低于HSP70低表達患者。上述結(jié)果說明，HSP70高表達提示患者細胞分化程度較低，而其預后則較差，因此，HSP70可以作為判斷腎透明細胞癌預后的一項生物指標。

綜上所述，HSP70與RCC的預后密切相關(guān)，且具備成為RCC治療靶點潛在價值，可在今后的研究中進一步加以探索。