江歡，李曉紅，朱偉杰

(1.深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院生殖內(nèi)分泌科，深圳 518172；2.暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生殖免疫研究所，廣州 510632)

肥胖是體內(nèi)脂肪細(xì)胞(adipocyte)數(shù)目增多或體積增大，脂肪堆積過多，使體重超過標(biāo)準(zhǔn)體重20%以上的病理狀態(tài)。隨著現(xiàn)代生活水平的提高和生活方式的改變，以及體內(nèi)激素代謝變化的影響，育齡婦女的肥胖率逐漸升高[1]。肥胖參與了女性不孕的病因?qū)W發(fā)生和發(fā)展[2]。脂肪細(xì)胞具有內(nèi)分泌作用，通過分泌多種脂肪細(xì)胞因子(ACK)影響女性生殖激素的合成和代謝。肥胖婦女卵巢內(nèi)雄激素合成增加，性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)分泌減少，可導(dǎo)致卵巢的卵泡發(fā)育受阻或閉鎖，發(fā)生排卵障礙和不孕[3]。

脂肪細(xì)胞與免疫反應(yīng)關(guān)系密切，多種ACK可以影響機(jī)體的免疫功能，參與機(jī)體內(nèi)炎性反應(yīng)的過程[4]。肥胖通常伴隨著機(jī)體的慢性炎癥狀態(tài)，這種炎癥的發(fā)生發(fā)展與多種免疫細(xì)胞密切相關(guān)，如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，因此，肥胖者普遍存在不同程度的免疫紊亂[5]?？咕涌贵w(ASA)是機(jī)體免疫系統(tǒng)針對精子抗原產(chǎn)生的特異性抗體，是引起女性免疫不孕的原因之一[6]。肥胖婦女體內(nèi)多種免疫因子高表達(dá)，機(jī)體處于亞炎癥狀態(tài)，是否更易被精子抗原激起免疫反應(yīng)尚無統(tǒng)一觀點(diǎn)。本研究檢測了肥胖及超重不孕婦女體內(nèi)的ASA水平，為探討ASA是否介導(dǎo)肥胖婦女的生育力降低提供參考資料。

資料與方法

一、研究對象

收集2017年2～12月于深圳市龍崗區(qū)婦幼保健院生殖內(nèi)分泌科的就診的190例不孕婦女為研究對象，年齡26～35歲，不孕年限2～7年。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)診斷標(biāo)準(zhǔn)，按照不同的體重指數(shù)(BMI)分成3組：體重正常組(A組)：BMI≤24 kg/m2，90例；超重組(B組)：24 kg/m2

二、研究方法

收集3組婦女的血清標(biāo)本，進(jìn)行血清性激素水平檢測，并采用間接免疫珠試驗(yàn)(iIBT)檢測血清ASA水平。免疫珠為抗IgG和IgA型(Irvine Scientific，美國)。ASA檢測程序按WHO精液分析手冊方法進(jìn)行。洗滌后精子懸液進(jìn)行1∶5稀釋，37℃孵育60 min，用含0.3%牛血清白蛋白的DMEM培養(yǎng)液(GIBICO，美國)洗滌孵育后精子2次，調(diào)節(jié)精子懸液為20×106/ml(指活動(dòng)精子)。取5 μl精子懸液置于玻片上，加入5 μl免疫珠，混勻。采用相差顯微鏡400倍鏡檢查，觀察200個(gè)活動(dòng)精子，以黏附免疫珠的活動(dòng)精子數(shù)>50%為陽性；以活動(dòng)精子數(shù)20%～49%為弱陽性，<20%為陰性。每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽性及陰性對照。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、3組患者一般資料的比較

3組患者的平均年齡、不孕年限比較，C組有略高于其他兩組的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；3組患者的BMI比較，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1 三組患者一般資料比較(-±s)

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

二、3組患者血清ASA水平比較

A組90例患者中檢出1例ASA-IgG陽性者，陽性率為1.1%；B組和C組沒有檢出ASA-IgG陽性者。A、B和C組分別檢出2例、1例和1例ASA-IgG弱陽性者，弱陽性率分別為2.2%、1.6%和2.6%。3組的弱陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。3組均沒有檢出ASA-IgA陽性者。

表2 三組患者血清ASA水平比較 [n(%)]

討 論

人體內(nèi)的脂肪細(xì)胞分泌逾百種ACK[7]，其中大部分ACK具有激素和免疫刺激作用，可以干擾女性正常生殖內(nèi)分泌功能，改變機(jī)體的免疫功能[8]，導(dǎo)致肥胖婦女處于不同程度的亞炎癥狀態(tài)。精子對女性而言是一種同種異體抗原，ASA是女性免疫不孕的原因之一[9-12]，當(dāng)女性生殖道的防御機(jī)制受到破壞或機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡時(shí)，免疫系統(tǒng)可針對精子抗原發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，產(chǎn)生ASA。闡明肥胖婦女是否更易對精子抗原致敏，有助于進(jìn)一步分析肥胖不孕婦女的不孕原因及開展針對性治療。

根據(jù)WHO精液檢查與處理手冊的標(biāo)準(zhǔn)，只有當(dāng)50%或更多的活動(dòng)精子黏附有免疫珠時(shí)，ASA介導(dǎo)的免疫不育的診斷方可成立。本研究中超重及肥胖組婦女血清ASA-IgG陽性率為0，且這兩組ASA-IgG弱陽性率也較低(分別為1.6%和2.6%)，提示ASA可能不是介導(dǎo)肥胖婦女不孕發(fā)生的主要因素，肥胖婦女不孕癥的發(fā)生可能與肥胖引起的免疫功能紊亂關(guān)系不大。正常情況下女性對精子抗原的多重防御機(jī)制及生殖道粘膜上皮的完整性，能夠避免進(jìn)入生殖道的精子誘發(fā)免疫反應(yīng)。當(dāng)炎癥、損傷等理化因素使生殖道局部黏膜的通透性增加，精子抗原暴露于免疫系統(tǒng)，而且免疫防御機(jī)制受到破壞或失平衡時(shí)，精子抗原則可以刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)誘發(fā)局部或全身免疫反應(yīng)，產(chǎn)生ASA[13-15]。肥胖可改變細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)[5]，引起內(nèi)分泌和代謝紊亂，但如果沒有引起女性生殖道損傷或粘膜損傷，可能并不增加女性對精子抗原的體液免疫反應(yīng)。另一方面，本研究中的3組婦女，其平均年齡和不孕年限比較，差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；體重正常組檢出了1例ASA-IgG陽性患者，2例ASA-IgG弱陽性患者；且3組間的ASA-IgG弱陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示不論婦女肥胖與否，均存在被精子致敏的可能性[13]。因此，雖然本研究結(jié)果并未提示ASA產(chǎn)生與肥胖婦女不孕癥相關(guān)，但因?yàn)闃颖玖枯^少，結(jié)果可能存在一定偏倚，且體內(nèi)低水平的ASA是否對女性生殖存在潛在干擾，尚需后期擴(kuò)大樣本量后深入探討。

子宮頸是精子在女性生殖道中遷移的第一道選擇性生理屏障，也是女性生殖道中局部精子免疫的主要活性部位。若子宮頸的局部免疫防御機(jī)制受到破壞或失平衡時(shí)，可以對外部抗原包括精子抗原失去中和及調(diào)理作用[16]。臨床上一些不孕婦女的宮頸黏液中檢出ASA，ASA可以抑制精子穿過宮頸黏液[17-18]。本研究中沒有對3組不孕婦女獲取宮頸黏液檢測ASA，是出于以下考慮：(1)宮頸局部ASA檢測需收集患者排卵期宮頸黏液標(biāo)本，肥胖不孕婦女多數(shù)存在排卵障礙，短期內(nèi)難以收集合適的標(biāo)本用于檢測；(2)雖然精子抗原刺激女性生殖道粘膜產(chǎn)生局部ASA與循環(huán)性ASA產(chǎn)生并不一致，但不孕女性外周血循環(huán)中ASA陽性率及滴度多高于宮頸粘液中的檢測值，且更易于操作[19]。此外，本研究中超重及肥胖組婦女外周血ASA的檢測結(jié)果均為陰性，故未再行3組不孕婦女宮頸黏液ASA水平的檢測，所存在的不足亦有待于今后進(jìn)一步完善實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)加以探討。

綜上所述，本研究結(jié)果提示ASA不是介導(dǎo)肥胖不孕婦女生育力下降的主要因素，但個(gè)別正常體重和超重、肥胖的不孕婦女外周血標(biāo)本中可檢測出低水平的ASA。體內(nèi)低水平的ASA是否對女性生殖存在潛在干擾，以及脂肪細(xì)胞的分泌和免疫功能狀態(tài)與肥胖不孕婦女生育力的相互關(guān)系均有待于后期進(jìn)一步研究探討。