楊金穎

(天津市武清區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 301700)

頭痛滴丸是由川芎、藁本、菊花等8味中藥組成的復(fù)方制劑，具有疏風(fēng)止痛、涼肝熄風(fēng)之功，臨床用于治療血管性頭痛。阿魏酸是川芎、藁本的共有成分，木犀草苷是菊花的有效成分，二者均有一定的抗炎和鎮(zhèn)痛作用[1，2]，均為頭痛滴丸的主要活性成分。中藥制劑涉及多個成分，單一指標成分不足以代表處方的整體作用，本試驗采用HPLC法同時測定阿魏酸和木犀草苷兩指標成分，為建立頭痛滴丸的質(zhì)量標準提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀：安捷倫液相色譜儀1100系列(包括安捷倫色譜工作站、G1310A四元液相梯度泵、G1313A自動進樣器、G1314AVWD檢測器、CO-201柱溫箱)；分析柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；BD211D型電子天平 (十萬分之一，Sarlorius提供)；AB204-N型電子分析天平(萬分之一，Mettler-Toledo提供)。

1.2試藥 阿魏酸對照品(批號110773-201313，含量以99.6%計)、木犀草苷對照品(批號111720-201408，含量以94.9%計)均購自中國食品藥品檢定研究院。頭痛滴丸為自制樣品(批號100001，100002，100003)。乙腈、磷酸為色譜純；水為娃哈哈純凈水。

2 含量測定方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫程序：0～15 min A-B(18∶82)，15～30 min A-B(18∶82→20∶80)，30～35 min A-B(20∶80→30∶70)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：328 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1混合對照品溶液的制備 分別稱取阿魏酸和木犀草苷對照品適量，精密稱定，各置于50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別得儲備液；各取適量儲備液置50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得1 ml含阿魏酸19.74 μg和木犀草苷26.38 μg的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取研細的本品約0.15 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入15 ml流動相，密塞，稱定重量，然后超聲處理30 min，放至室溫，用流動相補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。

2.2.3陰性對照溶液的制備 按處方比例分別稱取本處方中缺菊花藥材的陰性對照和缺川芎及藁本藥材的陰性對照，經(jīng)提取、萃取后，按照滴丸成型工藝用相應(yīng)輔料制備陰性供試品，按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.3專屬性試驗 分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，依“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果在該方法下樣品分離度好，陰性對照對測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.4線性關(guān)系的考查 分別稱取阿魏酸和木犀草苷對照品適量，精密稱定，各置于50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別得儲備液；再配成系列濃度混合對照品溶液(分別含阿魏酸2.01、4.02、12.05、20.08、32.13和40.16 μg/ml，含木犀草苷2.20、4.40、13.19、21.98、44.96和65.94 μg/ml)。依“2.1”項下色譜條件進樣檢測分析，分別以阿魏酸和木犀草苷的峰面積值為縱坐標(Y)，對照品濃度(μg/ml)為橫坐標(X)繪制標準曲線，得阿魏酸回歸方程為Y=52.069X-0.111 7(r=0.999 9)，線性范圍為2.01～40.16 μg/ml；木犀草苷回歸方程為Y=12.279X+17.947(r=0.999 8)，線性范圍為2.20～65.94 μg/ml。

1.木犀草苷 2.阿魏酸

2.5精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10 μl，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，分別計算阿魏酸和木犀草苷峰面積的RSD值，結(jié)果分別為0.63%和0.57%，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液(批號100001)，室溫放置，分別于0、2、4、8、12和24 h，依“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果阿魏酸和木犀草苷峰面積的RSD分別為0.89%和1.17%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗 取同一批號供試品(批號100001)6份，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，依“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，結(jié)果阿魏酸RSD為0.79%，木犀草苷RSD為1.22%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.8回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品(批號100001)9份，每份約0.075 g，精密稱定，分別置于9個具塞三角瓶中，各取3份分別精密加入混合對照品(含阿魏酸濃度為0.032 8 mg/ml，木犀草苷濃度為0.031 6 mg/ml)4、5和6 ml，最終加溶劑為15 ml，超聲提取30 min，放至室溫，用流動相補足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液10 μl，依“2.1”項下色譜條件進行測定，計算回收率，阿魏酸和木犀草苷的平均回收率分別為100.33%和100.06%，RSD%分別為1.12%和1.27%。結(jié)果見表1和表2。

表1 阿魏酸加樣回收率試驗測定結(jié)果(n=9)

表2 木犀草苷加樣回收率試驗測定結(jié)果(n=9)

2.9樣品的測定 取3批頭痛滴丸樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積并計算3批樣品中阿魏酸和木犀草苷的含量，結(jié)果見表3。

表3 頭痛滴丸的含量測定結(jié)果

3 討論

3.1提取方法的考查 在供試品溶液制備方法中，提取溶媒研究中曾使用甲醇、70%甲醇、乙醇、70%乙醇和流動相進行提取，比較后發(fā)現(xiàn)用流動相超聲提取的樣品得到的阿魏酸和木犀草苷的含量高，因此采用流動相提取。研究中還對提取時間進行了考查，分別超聲提取20、30、45和60 min，結(jié)果表明提取30 min時木犀草苷已提取完全，且雜質(zhì)較少。

3.2流動相的選擇 本試驗分別考查甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液、甲醇-水溶液和乙腈-水溶液對色譜峰的分離能力，也考查等度洗脫和梯度洗脫，結(jié)果表明采用乙腈-磷酸水溶液進行梯度洗脫，可以將阿魏酸和木犀草苷實現(xiàn)較好的分離。對于檢測波長的選擇，綜合考慮《中國藥典》[3]、DAD檢測器、紫外全波長掃描的結(jié)果，最終選擇328 nm為最佳檢測波長。

本試驗采用高效液相色譜法同時對阿魏酸和木犀草苷進行含量測定，并進行了方法學(xué)研究及3批樣品的含量測定，結(jié)果表明該法簡便準確、重現(xiàn)性好、專屬性較強，可有效地控制頭痛滴丸的質(zhì)量，為完善其質(zhì)量標準提供了參考依據(jù)，對中藥復(fù)方新藥研究及質(zhì)量控制提供參考。

1 鄒全飛,馬坤,陸榕.阿魏酸藥動學(xué)研究進展[J].藥物評價研究,2013,36(4):297-301

2 劉圓,李園園,馮婷婷,等.木犀草素鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010,31(15):2368-2370

3 中國藥典[S].一部.2015：41,311,38