張 森，龍征榮，歐 婧，熊紹斌，楊昌海，趙嬋娟

(1.黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州凱里 556000； 2.貴州省雷山縣丹江鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，貴州雷山557100；3.重慶三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，重慶萬州)

豬致病性大腸桿菌常引發(fā)豬場(chǎng)發(fā)生仔豬黃痢、白痢和水腫病，尤其仔豬黃痢，發(fā)病日齡小，發(fā)病急，常引起豬腹瀉、脫水、電解質(zhì)紊亂，甚至死亡。日齡越小發(fā)病率越高，情況越嚴(yán)重，管理不善的豬場(chǎng)極易引起仔豬大量死亡，給豬場(chǎng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，是威脅我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疾病之一。近幾十年來，抗生素和抗菌藥在畜牧生產(chǎn)上長期或不規(guī)范使用，導(dǎo)致生產(chǎn)中大腸桿菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重。病原菌長期處于抗生素和抗菌藥的選擇壓力下，可能會(huì)通過質(zhì)粒和整合子將耐藥基因在相同或不同種屬細(xì)菌之間廣泛轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致獸醫(yī)臨床上不斷出現(xiàn)多重耐藥的“超級(jí)”大腸桿菌菌株[1-3]，極大的增加了該病的防控難度。中草藥的應(yīng)用在我國已有千年的歷史，現(xiàn)代藥理研究表明，中草藥中的某些活性成分具抗菌、抗炎、提高免疫、抗氧化等多種活性作用，與抗生素和抗菌藥相比，中草藥成分復(fù)雜，各成分之間具有一定的相互作關(guān)系，通常會(huì)表現(xiàn)為整體量效作用，而且呈現(xiàn)多作用靶點(diǎn)，不易產(chǎn)生耐藥性[4]。中草藥來源廣泛，安全性高，毒性小，因此，在畜牧生產(chǎn)上有良好的應(yīng)用前景。苗藥與中藥具有很高的相似性，是苗族人民長期以來對(duì)苗族生存環(huán)境中植物藥用作用的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，具有很高的臨床應(yīng)用參考價(jià)值。白接骨為爵床科白接骨屬草本植物，是黔東南苗族地區(qū)廣泛用于止血、扭傷、癤腫等疾病的民間常用草藥，《貴州民間藥物》記載了該草藥的主要療效，但其現(xiàn)代藥理研究尚未見報(bào)道，本試驗(yàn)觀察白接骨醇提物對(duì)豬大腸桿菌的體外抑制作用，以期為開發(fā)利用白接骨這一苗藥防治豬大腸桿菌病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試藥物與菌株 試驗(yàn)藥物：白接骨(全草，2016年8月份采集)由黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院植物組織培養(yǎng)中心鑒定為正品。試驗(yàn)菌株：質(zhì)控菌 豬大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)株[CVCC1510，血清型O9：K88ac]，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；臨床分離菌株：豬腹瀉致病大腸桿菌[EC1]，由貴州大學(xué)獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定、保存、提供。

1.2 主要儀器與試劑 SW-CJ-2D凈化工作臺(tái)(蘇州凈化)；LS-30高壓滅菌鍋(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)；KJ14麥?zhǔn)媳葷峁?北京哲成科技有限公司)；JA003電子秤(上海舜宇橫平科學(xué)儀器有限公司)；DHP-500電熱恒溫培養(yǎng)箱(金壇大地自動(dòng)化儀器廠)；DHG-9075A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(杭州百思生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20170508001)，95%乙醇為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，微生物藥敏試紙(溫州市康泰生物科技有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 藥液制備 將采集的藥物置恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，在45 ℃條件下烘干。將烘干的藥物粉碎成粗粉，準(zhǔn)確稱取10 g，放入三角燒瓶中，加100 mL 80%乙醇，置于超聲波機(jī)中超聲助溶1 h，減壓抽濾提取液。按此方法提取3次，合并3次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇，給濃縮液中加入吐溫-80 0.5 mL助溶，用蒸餾水定容至50 mL。最終藥液生藥濃度為200 mg/mL。過濾除菌，備用。

1.3.2 菌液的制備 按無菌操作法，將保存的菌種劃線接種于1%瓊脂營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，37 ℃條件下培養(yǎng)18 h，挑取單個(gè)菌落接種于5 mL無菌營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，37 ℃條件下培養(yǎng)12 h，用滅菌的肉湯培養(yǎng)基稀釋至0.5麥?zhǔn)蠞岫?，即約1.5×108CFU/mL。取適量菌液用滅菌肉湯培養(yǎng)基進(jìn)行100倍稀釋，菌懸液濃度約1.5×106CFU/mL，備用。

1.3.3 耐藥性分析 采用試紙擴(kuò)散法(K-B法)，分別吸取150 μL各配制備用的細(xì)菌液至1%的瓊脂肉湯培養(yǎng)板上，用“L”棒涂布均勻，在超凈工作臺(tái)上室溫條件下放置5 min，等距離放置藥敏試紙片(藥敏試紙直徑為6.35 mm)，靜置10 min使其和培養(yǎng)板表面嚴(yán)實(shí)無縫。將培養(yǎng)皿置37 ℃培養(yǎng)18 h，觀察其抑菌圈有無及直徑大小。

1.3.4 苗藥白接骨醇提物抑菌作用分析 采用管碟法[5]，按無菌操作要求，分別吸取150 μL各配制備用的細(xì)菌液至1%的瓊脂肉湯培養(yǎng)板上，用“L”棒涂布均勻，在超凈工作臺(tái)上室溫條件下放置5 min，等距離放置滅菌牛津杯(規(guī)格10 mm×8 mm×6 mm)，靜置10 min使其和培養(yǎng)板表面嚴(yán)實(shí)無縫。給每個(gè)牛津杯中加入相應(yīng)的藥物100 μL，4 ℃放置8 h，使藥物擴(kuò)散，然后將培養(yǎng)皿置37 ℃培養(yǎng)18 h，觀察，并用游標(biāo)卡尺十字法測(cè)量抑菌圈直徑，取平均值。每種藥物和菌株平行做3次重復(fù)。結(jié)果判定：抑菌圈<10 mm為不敏感，10～19 mm為中度敏感，≥20 mm為高度敏感[6]。

1.3.5 苗藥白接骨MIC和MBC的測(cè)定 采用微量法[7]。按操作方法，取一次性無菌96孔培養(yǎng)板，每列8孔，每孔加100 μL肉湯培養(yǎng)基，吸取100 μL藥物加入第1孔，混勻后，吸取100 μL到第2孔，以此類推至第10孔，混勻后，棄100 μL，每孔接種10 μL菌液；第11孔加入10 μL無菌蒸餾水，為陰性對(duì)照，第12孔接種10 μL菌液，為細(xì)菌生長對(duì)照。將96孔培養(yǎng)板加蓋置37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h，觀察細(xì)菌生長情況。結(jié)果判定：與陰性對(duì)照對(duì)比，如渾濁或有沉淀，則判斷為有菌生長；如透明度與陰性對(duì)照相同，則判斷無菌生長。以無菌生長所對(duì)應(yīng)的最低藥物濃度為該藥物對(duì)此菌的MIC。然后，將每孔培養(yǎng)液劃線接種1%瓊脂營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)板，37 ℃培養(yǎng)18 h，觀測(cè)細(xì)菌生長情況，無菌落生成對(duì)應(yīng)的最低藥物濃度為該藥物對(duì)此菌的MBC。每種菌株做3次平行重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬大腸桿菌耐藥性分析 通過K-B試紙法觀察了EC1對(duì)4種常用抗菌藥物的敏感性，結(jié)果如圖1所示，4種抗菌藥物對(duì)CVCC1510標(biāo)準(zhǔn)株均出現(xiàn)了直徑不小的抑菌圈，而在EC1，僅慶大霉素出現(xiàn)抑菌圈，甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、頭孢曲松、環(huán)丙沙星均無抑菌圈出現(xiàn)。測(cè)量統(tǒng)計(jì)如表1所示，4種抗菌藥物對(duì)CVCC1510抑菌圈平均直徑均超過了20 mm，表現(xiàn)高度敏感。而對(duì)EC1的抑菌圈平均直徑除慶大霉素達(dá)到了22.56±0.63 mm外，其余均≤6.35 mm。由此說明，臨床上分離的EC1菌株具有多重耐藥性。

左為CVCC1510標(biāo)準(zhǔn)菌株，右為EC1臨床分離菌株；"1"為慶大霉素，"2"為甲氧芐啶/磺胺甲惡唑，"3"為頭孢曲松，"4"為環(huán)丙沙星，中間為生理鹽水對(duì)照。Note: The result of left dish is CVCC1510, and right is EC1; "1"is the result of gentamicin, "2"is methoxybenzymidine/sulfamethoxazole, "3"is ceftriaxone, "4"is ciprofloxacin and the middle is negative control.圖1 常用抗生素對(duì)豬大腸桿菌抑菌效果Fig 1 The effect of common antibiotics on E.coli from swine

藥物抑菌圈直徑CVCC1510EC1慶大霉素24.10±0.3822.56±0.63甲氧芐啶/磺胺甲惡唑27.39±0.65≤6.35頭孢曲松32.66±0.56≤6.35環(huán)丙沙星33.38±0.39≤6.35對(duì)照≤6.35≤6.35

2.2 苗藥白接骨醇提物對(duì)大腸桿菌抑菌作用 采用管碟法觀察白接骨對(duì)大腸桿菌抑菌作用，結(jié)果如圖2所示，白接骨醇提物對(duì)CVCC1510菌株和EC1菌株具有較大的抑菌圈，并且3個(gè)重復(fù)的結(jié)果重復(fù)性高。1%吐溫-80溶液對(duì)2菌株均無明顯的抑菌圈。經(jīng)測(cè)量統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表2所示，白接骨醇提物對(duì)CVCC1510標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈直徑平均值達(dá)33.20±0.82 mm，對(duì)EC1的抑菌圈直徑平均值達(dá)33.78±0.38 mm，而1%吐溫-80溶液和滅菌蒸餾水對(duì)照在牛津杯內(nèi)徑內(nèi)也有細(xì)菌生長，說明1%濃度的吐溫-80對(duì)細(xì)菌的生長沒有明顯的影響。因此圖2、表2結(jié)果表明，白接骨醇提物對(duì)致病性大腸桿菌有較強(qiáng)的體外抑制作用。

2.3 MIC測(cè)定結(jié)果 采用微量稀釋法定量測(cè)定白接骨對(duì)大腸桿菌的MIC，結(jié)果如表3所示，CVCC1510和EC1與倍比稀釋的白接骨醇提物共育，第8個(gè)稀釋度(生藥濃度0.78 mg/mL)培養(yǎng)液透明度眼觀基本與對(duì)照相似，在第9個(gè)稀釋度呈現(xiàn)明顯的肉眼可見的渾濁，三個(gè)重復(fù)結(jié)果一致，因此判定白接骨對(duì)兩株大腸桿菌的MIC均為0.78 mg/mL，表現(xiàn)較強(qiáng)的抑菌效果。

2.4 MBC測(cè)定結(jié)果 對(duì)2.2項(xiàng)結(jié)果中每孔培養(yǎng)液無菌操作下進(jìn)行劃板接種，在37 ℃培養(yǎng)12 h，結(jié)果如圖3所示，第8孔培養(yǎng)液劃線接種的細(xì)菌生長相對(duì)于第9孔減少，但也有明顯的肉眼可見的細(xì)菌生長。而第7孔(含生藥濃度1.56 mg/mL)則基本無細(xì)菌生長，因此，判定白接骨對(duì)CVCC1510和EC1的MBC均為1.56 mg/mL。

表2 苗藥白接骨醇提物對(duì)大腸桿菌抑菌作用(mm)Tab 2 the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau alcohol extraction on E.coli (unit: mm)

上排為白接骨對(duì)CVCC1510抑菌作用3個(gè)重復(fù)，下排為白接骨對(duì)EC1抑菌作用3個(gè)重復(fù)；"1"為白接骨醇提物(200mg/mL)；"2"為1%吐溫-80溶液對(duì)照；"3"為滅菌蒸餾水對(duì)照。Note: Above row is the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau on CVCC1510 for 3 times repetitions, bottom row is the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau on EC1 for 3 times repetitions. "1"is Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau alcohol extraction (200mg/mL), "2"is 1% tween-80 control, "3"is negative control.圖2 白接骨醇提物對(duì)大腸桿菌的抑菌作用Fig 2 the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau alcohol extraction on E.coli

組別123456789101112MIC/(mg·mL-1)CVCC1510-1 --------++-+0.78CVCC1510-2--------++-+0.78CVCC1510-3--------++-+0.78EC1-1--------++-+0.78EC1-2--------++-+0.78EC1-3--------++-+0.78

"1～10"是藥物從1:2(100mg/mL)-1:2048(0.20mg/mL)濃度倍比稀釋；"11"為陰性對(duì)照；"12"為細(xì)菌生長對(duì)照；"-"為培養(yǎng)液澄清；"+"為培養(yǎng)液渾濁。

"1～10"were the medicine dilutions from 1:2(100mg/mL)-1:2048(0.20mg/mL),"11" was negative control,"12"was positive control.

上排為白接骨對(duì)CVCC1510的3個(gè)重復(fù)，下排為白接骨對(duì)EC1的3個(gè)重復(fù)；1～12分別對(duì)應(yīng)2.2項(xiàng)部分1～12孔培養(yǎng)物Above row is the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau on CVCC1510 for 3 times repetitions, bottom row is the effect of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau on EC1 for 3 times repetitions；"1～12" were the culture result of suspension from 2.2 part 1～12 culture hole.圖3 苗藥白接骨醇提物對(duì)大腸桿菌MBC結(jié)果Fig 3 the MBC of Asystasiella neesiana (Wall.) Lindau alcohol extraction on E.coli

3 討論與小結(jié)

大腸桿菌耐藥性問題凸顯，多重耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。岳秀英等[8]報(bào)道四川省2009-2014年共2954株豬、雞源大腸桿菌對(duì)抗生素的耐藥率依次為四環(huán)素(92.32%)>磺胺異噻唑(91.96%)>氨芐西林(91.25%)>復(fù)方新諾明(87.56%)>多西環(huán)素(77.67%)>氟苯尼考(73.97%)>大觀霉素(69.91%)>恩諾沙星(66.00%)>阿莫西林/克拉維酸(61.10%)>氧氟沙星(59.39%)>慶大霉素(57.82%)>多粘菌素E(42.53%)>頭孢噻呋(40.40%)。彭苗苗等[9]從湖南株洲、益陽豬場(chǎng)分離9株大腸桿菌，均含有耐藥基因GyrA、ParC、TetA和TetB，其中7株大腸桿菌對(duì)10種以上抗生素耐藥，對(duì)氨芐西林、青霉素、阿莫西林、紅霉素的耐藥率達(dá)100%。對(duì)四環(huán)素、多西環(huán)素的耐藥率達(dá)到88.9%。本試驗(yàn)所用大腸桿菌(EC1)菌株是貴州大學(xué)在貴州豬場(chǎng)分離的豬腹瀉致病菌。雖然僅檢測(cè)了其對(duì)慶大霉素、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、頭孢曲松、環(huán)丙沙星的敏感性，但該菌株僅對(duì)慶大霉素出現(xiàn)抑菌圈，其余3種均無明顯的抑菌圈，可定性說明該分離菌株具有多重耐藥性。

近年來，中藥體外抑菌大腸桿菌的研究較多，黃連、大黃、白花蛇舌草、五倍子、丁香、黃芩、夏枯草、虎杖等均有體外抑制大腸桿菌的報(bào)道，在眾多報(bào)道中，黃連、大黃、五倍子的作用較強(qiáng)，黃連、大黃水煎劑對(duì)大腸桿菌MIC為7.81 mg/mL)[10-11]，五倍子醇提液MIC為0.39 mg/mL[12]，但也有報(bào)道其MIC僅為15.6 mg/mL[13]。本試驗(yàn)通過管蝶法聯(lián)合微量法稀釋法和瓊脂平板計(jì)數(shù)法研究了苗藥白接骨對(duì)大腸桿菌的體外抑制作用，結(jié)果顯示，白接骨醇提物對(duì)標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌和耐藥性大腸桿菌表現(xiàn)了較強(qiáng)體外抑制作用，MIC和MBC分別達(dá)到了0.78 mg/mL和1.56 mg/mL，其體外抑菌效果明顯優(yōu)于報(bào)道的常見中藥。李君華[14]通過觀察24種常用中藥飲片水煎液對(duì)大腸桿菌多重耐藥菌株和敏感菌株的抑菌效果，得出結(jié)論，相對(duì)于敏感菌，耐藥菌對(duì)中藥更為敏感。但是，本試驗(yàn)中白接骨醇提物對(duì)EC1菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC和MBC結(jié)果一致，并沒有表現(xiàn)出對(duì)耐藥菌株更敏感。

目前常采用K-B試紙法、打孔法和管碟法定性觀察藥物的體外抑菌效果。中草藥成分復(fù)雜，其具有抗菌作用的成分可能僅是其眾多化學(xué)成分中的極少數(shù)，含量有限，用直徑6.35 mm左右的濾紙直接浸泡入中草藥水提或醇提粗提液制作藥敏試紙，試紙藥物量少，而且藥量不精確。管碟法藥量控制范圍大，而且加藥量比較準(zhǔn)確，與打孔法相比更便捷。

中藥醇提液在蒸餾乙醇濃縮后往往會(huì)出現(xiàn)渾濁和濃稠現(xiàn)象，影響藥物在瓊脂培養(yǎng)板上的擴(kuò)散，在微量法或試管法測(cè)定MIC時(shí)，影響培養(yǎng)液的透明度，不利于細(xì)菌生長情況觀察，所以有效解決中藥提取液透明度是中藥抑菌試驗(yàn)的重要環(huán)節(jié)。大多數(shù)中藥體外抑菌文獻(xiàn)對(duì)此問題表述不清楚，劉瑤[15]等在觀察苗藥大烏泡葉提取物的體外抑菌作用時(shí)，用10%二甲基亞砜(DMSO)助溶，本試驗(yàn)中白接骨醇提物在蒸餾乙醇后出現(xiàn)渾濁，用DMSO助溶，效果不理想，使用1%吐溫-80助溶，藥物透明度大大提高，基本解決了藥物對(duì)培養(yǎng)基透明度的影響和藥物在瓊脂培養(yǎng)基上的擴(kuò)散問題，并且設(shè)置1%吐溫-80對(duì)照，結(jié)果顯示，1%濃度的吐溫-80對(duì)細(xì)菌生長沒有明顯的影響。

本試驗(yàn)僅是對(duì)苗藥白接骨藥理作用的初步探討，結(jié)果顯示，白接骨具有很強(qiáng)的體外抑制豬源敏感和耐藥大腸桿菌的作用，具有很好的開發(fā)應(yīng)用前景。現(xiàn)代研究表明，中草藥體外抑菌是通過其某些活性成分直接作用于細(xì)菌結(jié)構(gòu)和干擾細(xì)菌代謝而抑菌殺菌[16]，白接骨的抑菌活性成分和抗菌機(jī)理尚需進(jìn)一步的研究。此外，中藥抗耐藥菌的作用機(jī)制主要有抑制菌體內(nèi)酶的活性；改變細(xì)菌細(xì)胞膜通透性；抑制細(xì)菌外排泵系統(tǒng)，抑制細(xì)菌生物被膜的形成及對(duì)細(xì)菌質(zhì)粒的消除作用[17]，白接骨是通過何種途徑實(shí)現(xiàn)抑制耐藥大腸桿菌的，尚需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王永芬，席 磊，邊傳周,等. 豬致病性大腸桿菌耐藥質(zhì)粒檢測(cè)及其中藥消除作用研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，33(12)：932-935.

Wang Y F, Xi L, Bian C Z,etal. Drug resistance plasmid detection in pathogenic swineEscherichiaColiand elimination with traditional Chinese herbs[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2011，33(12)：932-935.

[2] 段玉平，徐興然，曾忠良，等. 豬源大腸桿菌整合子與耐藥性的相關(guān)性研究[J]. 中國獸藥雜志，2009，43(5)：24-26.

Duan Y P, Xu X R, Zeng Z L,etal. Incestigation of the relationship between integrons and resistance ofE.colifrom swine farms[J]. Chinese Journal of Veterinary Drug, 2009，43(5)：24-26.

[3] 李金清. 致病性大腸桿菌耐藥性與其質(zhì)粒相關(guān)性研究[J]. 青海畜牧獸醫(yī)雜志，2011,41(3)：7-9.

Li J Q. Study on correlation of resistance to drugs of pathogenicEscherichiacoliwith its plasmid[J]. Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary Science, 2011,41(3)：7-9.

[4] 韓 飛，幸仁匯，陳琳琦，等. 中藥抗細(xì)菌耐藥性的研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2016，41(5)：813-817.

Han F, Xing R H, Chen L Q,etal. Research progress of anti-drug resistance in traditional Chinese medicine[J]. China Journal of Chinese Material Medica, 2016，41(5)：813-817.

[5] 馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社，2000：265.

Ma X R, Su D M. Manual of medicinal microbiological detection[M]. Beijing: China Science Publishing, 2000：265.

[6] 杜 銳、韓文瑜、雷連成. 金黃色葡萄球菌中草藥抑制劑的篩選研究[J]， 中國獸藥雜志，2006，40(9)：10-13.

Du R, Han W Y, Lei L C. Screening the Chinese herbal medicine bacterial inhibitor onStaphylococcusaureus[J]. Chinese Journal of veterinary Drug, 2006，40(9)：10-13

[7] 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2011: 333-334.

Chen Q. Research methods in pharmacology of Chinese materia medica[M].Beijing: People's Medical Publishing House, 2011: 333-334.

[8] 岳秀英，葛 榮，吳曉嵐，等. 四川省豬、雞源大腸桿菌對(duì)抗生素耐藥性研究[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2017,53(1)：93-95.

Yue X Y, Ge R, Wu X L,etal. Research of drug resistance ofEscherichiacolifrom swine and chicken in Sichuan province[J]. Chinese Journal of Veterinary medicine, 2017,53(1)：93-95.

[9] 彭苗苗，邱美珍，王 慧，等. 豬源大腸桿菌耐藥質(zhì)粒圖譜及耐藥性分析[J]. 激光生物學(xué)報(bào)，2017,26(2)：183-1888.

Peng M M, Qiu M Z, Wang H,etal. Analysis of resistance plasmid profiles and drug resistance ofEscherichiacolifrom swine[J]. Acta Laser Biology Sinica, 2017,26(2)：183-1888.

[10] 司紅彬，梁松林，許桂芹，等.4味中藥及其與抗菌藥的復(fù)方制劑的MIC測(cè)定[J]. 中國獸藥雜志，2006,40(2)：31-34.

Si H B, Liang S L, Xu G Q,etal. MICs of Chinese traditional medicine and their compounds with antibiotics determined by bacteriostatic testinvitro[J]. Chinese Journal of veterinary Drug, 2006,40(2)：31-34.

[11] 王俊麗，張要齊，孫雪峰，等.18種中藥對(duì)豬大腸桿菌的體外抑菌活性的測(cè)定方法比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(26)：12947-12948.

Wang J L, Zhang Y Q, Sun X F,etal. Study on theinvitrobacteriostatic test of 18 kinds of traditional Chinese herbs against swineE.coli[J].Journal of Anhui Agri. Sci, 2012，40(26)：12947-12948.

[12] 王亞萍，陳 鍇，李寶莉，等.中藥體外抑制大腸桿菌實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2017，32(4)：606-609.

Wang Y P, Chen K, Li B L,etal. Experimental study on the inhibitory effect of some Chinese herbal medicine onEscherichiacoliinvitro[J]. Acta Chinese Medicine, 2017，32(4)：606-609.

[13] 肖莉春，孔祥峰，黃明錢，等. 中藥提取物對(duì)豬源耐藥大腸桿菌分離株的抑制作用[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013,35(6)：1248-1254.

Xiao L C, Kong X F, Huang M Q,etal. Antimicrobial activities of Chinese herb extracts against antibiotic-resistant isolates ofE.colifrom swine farms[J]. Acta Agriculture Universitatis Jiangxiensis, 2013,35(6)：1248-1254.

[14] 李君華.中藥飲片對(duì)多重抗生素耐藥細(xì)菌的抑菌作用[J].中國保健營養(yǎng)，2014，5：2418-2419.

Li J H. The bacteriostasis of Chinese medicine in multiple-resistant bacteria[J]. China Health Care﹠Nutrition, 2014，5：2418-2419.

[15] 劉 瑤，蔡 進(jìn)，陳 瑞，等. 苗藥大烏泡葉提取物的體外抑菌作用考察[J].中國藥房，2017，28(1)：72-75.

Liu Y, Cai J, Chen R,etal. Study oninvitroantibacterial effect of extracts form Miao medicine Rubus multibracteatus leaves[J]. China Pharmacy, 2017，28(1)：72-75.

[16] 王德志，張 敏，武 瑞. 中草藥抑制耐藥性大腸桿菌的研究進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī)，2009,36(3)：140-142.

Wang D Z, Zhang M, Wu R. Advance of the inhibition effects of Chinese medicine on drug-resistanceEscherichiacoli[J]. China Animal Husbandry﹠Veterinary Medicine, 2009,36(3)：140-142.

[17] 崔煦然，趙京霞，郭玉紅，等.細(xì)菌耐藥背景下中藥抗菌作用研究進(jìn)展[J].世界中醫(yī)藥，2016，11(10)：1940-1944.

Cui X R, Zhao J X, Guo Y H,etal. Advances of researches on antibiosis function of traditional Chinese medicine with background of bacterial resistance[J]. World Chinese Medicine, 2016，11(10)：1940-1944.