□ 陳 勇 自貢檢驗檢測院

糕點在我國生產和食用的歷史悠久，南北糕點種類繁多，制作工藝差異大，生產者通常會加入各種色素，這些色素一般分為天然色素和合成色素。天然色素價格昂貴，合成色素價格低廉，為控制生產成本、吸引消費者眼球，生產者往往會在所生產的糕點中加入過量的合成色素，但如果食用合成色素過量，對人體具有毒害作用，因此，我國對合成色素的添加量有著嚴格規(guī)定。我國準許使用的人工合成色素有11種，最常見的有檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍等8種色素。本文通過對前處理方法的改進，采用液相色譜法測定糕點中的合成色素，該方法簡單、快速、準確、穩(wěn)定，解決了回收率不理想、穩(wěn)定性差、操作繁瑣等問題。

1 實驗部分

1.1 主要儀器和試劑

主要儀器包括高效液相色譜：Agilent 1200；檢測器：DAD；電子天平：AL204；純水機：優(yōu)普 UPH-1-10T；高速離心機：Xiang Yi H-1650；恒溫水浴鍋。

試劑有乙酸銨（優(yōu)級純）；亞鐵氰化鉀（分析純）；乙酸鋅（分析純）；甲醇（HPLC級）

標準品有檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍（國家標準物質中心）。

1.2 色譜條件

色譜柱：welch xtimate C18（150 mm×4.6 mm×5 mm）；柱溫：35℃；流動相為甲醇、0.02 mol/L乙酸銨溶液；梯度洗脫程序如下：時間/min分 別 是（0 min、9 min、11 min、12 min、16 min、19 min、19 min）； 甲 醇 /%（4%、4%、10%、20%、40%、90%、4%）；乙酸 銨 溶 液/%（96%、96%、90%、80%、60%、10%、96%）；流量為1.0 mL/min；進樣量為10 μL；檢測波長430～625 nm。

1.3 標準溶液配制

將標準品（檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍）分別用高純水配制成1.000 g/L的標準儲備液，精密吸取各標準儲備液配制成濃度為0.05 g/L的標準使用液，再經過膜稀釋后，按照1.2的色譜條件進行實驗。

1.4 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.0 001 g）已制備處理好的樣品，用20 mL水分數次將樣品轉移入100 mL燒杯中，超聲提取10 min，取出后加入106 g/L的亞鐵氰化鉀溶液2 mL，搖勻，然后再加入220 g/L的乙酸鋅溶液2 mL，搖勻后加熱至沸，收集煮沸后的液體，然后再加水煮沸，直至無色為止。收集的液體放入蒸發(fā)皿中，在100℃水浴鍋中加熱濃縮至5 mL左右，后經離心機（10 000 r/min）離心10 min，取出上清液，用微孔濾膜過濾后上機待測。

2 結果與討論

2.1 波長的選擇

通過紫外-可見光譜掃描，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅的最大吸收波長在400～600 nm，經過反復試驗比較：其中檸檬黃在430 nm處具有最大吸收波長，亮藍在625 nm處具有最大吸收波長，新紅在530 nm處具有最大吸收波長，其他幾種色素在500 nm處都能很好地被吸收。因此，本實驗最終選擇在檸檬黃430 nm、亮藍625 nm、新紅530 nm、其他5種500 nm處進行檢測。

2.2 樣品前處理的選擇

由于全國各地的糕點各類繁多，其以含高蛋白的產品居多，所以怎樣沉淀蛋白，使其不干擾樣品的檢測，是一個關鍵點。筆者通過反復多次試驗及選取不同的沉淀劑進行處理、測試，最后選擇了亞鐵氰化鉀和乙酸鋅，再通過多次加水煮沸，收集沸水，濃縮，離心后過濾。這種方法處理過程簡單，結果穩(wěn)定，回收率高。

2.3 流動相的選擇

本實驗以甲醇和0.02 mol/L乙酸銨溶液作為流動相，流速為1.0 mL/min。通過調整溶液比例，分別采用下面三種體積比（甲醇:乙酸銨）4:96、8:92、12:88進行試驗，得到實驗結果，當比例在4:96時，可以得到較好的峰面積，靈敏度也最高，見圖1。

2.4 方法線性和檢出限

在方法優(yōu)化的條件下，這八種合成色素的質量濃度在1～20 mg/L范圍內與色譜峰面積均呈良好的線性關系，相關系數為0.9 993～0.9 998，檢出限（SN）為0.07～0.16 mg/kg，對10 mg/L的混合標準溶液進行測定，重復進樣10次，其相對標準偏差在0.10%～1.0%。

八種合成色素的定量限（mg/L）、線性回歸方程、相關系數、方法檢出限（S/N≥3）（mg/L）分別是：檸檬黃（1.0、y=706.70x+0.2 830、0.9 993、0.0 005）；日 落 黃（1.0、y=622.27x+0.3 214、0.9 997、0.0 005）；莧菜紅（1.0、y=461.03x+0.4 338、0.9 996、0.0 005）；胭脂紅（1.0、y=478.28x+0.4 182、0.9 997、0.0 005）；誘惑紅（1.0、y=744.64x+0.2 686、0.9 995、0.0 005）；赤蘚紅（1.0、y=108 5.1x+0.1 080、0.9 997、0.0 002）；新紅（1.0、y=1 526.2x+0.3 276、0.9 999、0.0 005）； 亮 藍（1.0、y=185 1.7x+0.1 080、0.9 995、0.0 002）

圖1 八種色素標準色譜圖

表1 精密度和回收率測定結果

2.5 方法回收率和精密度

稱取5g樣品，分別做高中低3個濃度標樣，添加檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅、赤蘚紅、亮藍8種合成色素標準品，每個濃度重復6次，按試品制備方法處理后，進行測定，結果見表1，表明該方法準確可靠。

3 結論

對糕點類樣品中常用的8種食用合成色素進行研究，大大減少了樣品處理步驟和工作量，可有效降低誤差，優(yōu)化樣品前處理條件。通過對測定波長進行確認，能達到很良好的基線分離，方法回收率在95～101之間，相對標準偏差RSD＜2，檢出限檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、誘惑紅為0.0 005 mg/kg，赤蘚紅、亮藍為0.0 002 mg/kg，完全能滿足樣品的分析要求。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2760-2014 食品安全國家標準 食品添加劑使用衛(wèi)生標準[S].北京：中國標準出版社，2014.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 5009.35-2016 食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定[S].北京：中國標準出版社，2016.