鄒小雅，譚梅英，廖麗錦，黃 霞，蘇高翔

(1.湛江市第二中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，廣東 湛江 524013； 2.廣東省第二中醫(yī)院/廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院藥學(xué)部，廣東 廣州 510095)

心力衰竭由各類心臟病變引起，主要表現(xiàn)為呼吸困難、乏力及液體潴留等[1]。而強(qiáng)心類西藥用于心力衰竭患者，存在副作用大、易產(chǎn)生耐藥性等問題[2]。參芪扶正注射液由黨參、黃芪提取制備而成，具有益氣扶正之功效,臨床常用于治療肺脾氣虛引起的神疲乏力、少氣懶言及自汗眩暈，和胃癌、肺癌的預(yù)后恢復(fù)等[3]。有研究結(jié)果顯示，參芪扶正注射液聯(lián)合常規(guī)西藥治療心力衰竭的療效較好[4]。皂苷類成分是參芪扶正注射液發(fā)揮相關(guān)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，目前，有關(guān)黨參、黃芪藥理活性及化學(xué)成分的研究較多見[5]，但其含量測定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究仍局限于單一成分或總皂苷[6]。本研究建立了多種活性成分同時(shí)測定的方法，進(jìn)行參芪扶正注射液的質(zhì)量控制。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀，DAD檢測器(美國Agilent公司)；Mettler-Toledo電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

1.2 藥品與試劑

參芪扶正注射液(麗珠集團(tuán)利民制藥廠，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z19990065，批號：170341、170509、170540、170612、170641、170707、170711、170713、170715及170739)；乙腈、磷酸為色譜純，購自德國Sigma-Alderich公司；黨參炔苷(批號：111732—201206)和毛蕊異黃酮葡萄糖苷(批號：111920—201203)對照品購自中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液：精密稱取黨參炔苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品適量，置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得上述對照品含量均為200 μg/ml的溶液。

2.1.2 供試品溶液：取參芪扶正注射液適量，過0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為Dikema C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫(0～5 min，5%～5%A；5～20 min，5%～15%A；20～40 min，15%～25%A；40～59 min，25%～95%A；59～60 min，95%～5%A)；流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μl，檢測波長203 nm。高效液相色譜圖見圖1。

A.供試品溶液；B.對照品溶液(50 μg/ml)；1.毛蕊異黃酮葡萄糖苷；2.黨參炔苷A.test solution B. reference solution (50 μg/ml); 1.calycosine glycosides; 2.dangshenol

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察：精密吸取混合對照品溶液適量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分別制成含黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷均為500、200、100、50、20及10 μg/ml的溶液。取上述溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，代入Excel中進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為，黨參炔苷：Y=1.528X+10.690(R2=0.999 3)和毛蕊異黃酮葡萄糖苷Y=1.303X+5.386(R2=0.999 5)。結(jié)果表明，黨參炔苷在10～500 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，毛蕊異黃酮葡萄糖苷在10～500 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 準(zhǔn)確度考察：精密吸取參芪扶正注射液(批號：170612)5 ml，置于10 ml容量瓶中，分別加入對照品溶液適量，加甲醇定容至刻度，即得含黨參炔苷10、20及30 μg/ml和毛蕊異黃酮葡萄糖苷30、60及90 μg/ml的供試品溶液。取上述溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，每個(gè)濃度連續(xù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積，計(jì)算上述兩種成分的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的平均加樣回收率分別為97.12%、101.42%，RSD分別為2.71%、3.10%，表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.3 精密度考察：精密吸取參芪扶正注射液(批號：170612)適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD分別為2.47%、1.95%，表明方法精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取參芪扶正注射液(批號：170612)適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，平行制備6份，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD分別為1.49%、2.53%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取參芪扶正注射液(批號：170612)適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，置于自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)，分別在室溫(25 ℃)下放置0、1、2、4、6、8及12 h時(shí)進(jìn)樣，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰面積的RSD分別為1.68%、2.98%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 含量測定

取10批參芪扶正注射液，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量。結(jié)果顯示，各批參芪扶正注射液中，黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量均達(dá)到或超過文獻(xiàn)報(bào)道的治療心力衰竭所需量或質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)所述總皂苷折算量，但各批之間差異顯著，且10批樣品RSD較大，見表1。

3 討論

3.1 含量測定指標(biāo)成分的選擇

黨參具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺之功效，黃芪則有益氣固表、利水消腫的作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明，黨參皂苷

表1 10批參芪扶正注射液中黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量Tab 1 Content of dangshenol and calycosine glycosides in 10 batches of shenqifuzheng injection

具有抗氧化、抑制細(xì)胞凋亡及改善供血等作用[6-9]，其中黨參炔苷作為指標(biāo)性成分，具有較好的活性和較強(qiáng)的代表性。而黃芪中的毛蕊異黃酮葡萄糖苷除具有相似功效外，還有較好的抗氧化活性[10-13]。選取上述2種成分作為參芪扶正注射液質(zhì)量評價(jià)的指標(biāo)性成分，能更好地反應(yīng)該制劑在抗心力衰竭方面的功效，為基于功效主治的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)細(xì)分及優(yōu)化奠定基礎(chǔ)[14-15]。

3.2 指標(biāo)性成分含量差異及其來源分析

對多批參芪扶正注射液進(jìn)行含量測定，結(jié)果黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量的RSD分別為19.859 6%、20.723 1%。同時(shí)，同一批樣品，其中一種成分含量較低時(shí)，另一成分含量未必會發(fā)生相同變化。其原因可能與制備該批樣品所用藥材有關(guān)。由于目前中藥材資源存在過度種植和以次充好等問題，質(zhì)量均一性難以把控；即使是采用規(guī)范化生產(chǎn)的中藥飲片，也較難妥善解決上述問題。為實(shí)現(xiàn)中藥特別是中成藥穩(wěn)定、可靠的療效，建議在各類中藥制劑的制備中采用規(guī)范化精制，使用指標(biāo)性成分含量及相關(guān)質(zhì)量信息較為明確的中藥材等。

本研究同時(shí)測定了參芪扶正注射液中黨參炔苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量，方法快速、準(zhǔn)確，為后續(xù)研究提供了依據(jù)。

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