鄧飛 韓惠云 來(lái)祝檁

[摘要] 目的 對(duì)比進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)幾種不同廠家品牌的試劑對(duì)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP傳染病四項(xiàng)的檢測(cè)結(jié)果，觀察分析不同試劑對(duì)傳染病四項(xiàng)檢測(cè)弱反應(yīng)性結(jié)果的差異。方法 2017年1—12月無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本47 586份，應(yīng)用不同全自動(dòng)酶免分析儀進(jìn)行ELISA 2次檢測(cè)，并對(duì)除梅毒以外的167份弱反應(yīng)性樣本利用NAT檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果 47 586份樣本中HBsAg弱反應(yīng)性120份（伯樂(lè)71份;萬(wàn)泰49份）;抗-HCV弱反應(yīng)性20份（麗珠5份;萬(wàn)泰15份）;抗-HIV1/2弱反應(yīng)性27份（麗珠5;伯樂(lè)22）;抗-TP弱反應(yīng)性98份（麗珠41;萬(wàn)泰57），167份弱反應(yīng)性樣本NAT檢測(cè)結(jié)果HBV DNA有反應(yīng)性5份（其中伯樂(lè)3;萬(wàn)泰2）;HCV RNA有反應(yīng)性0份;HIV-1 RNA有反應(yīng)性0份;梅毒螺旋體離體存活時(shí)間短不進(jìn)行核酸檢測(cè)。結(jié)論 不同試劑對(duì)傳染病四項(xiàng)檢測(cè)弱反應(yīng)性結(jié)果存在差異，盡管存在假反應(yīng)性結(jié)果的可能，但核酸檢測(cè)發(fā)現(xiàn)仍有輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，單獨(dú)使用都有可能存在漏檢。為了進(jìn)一步提高臨床輸血安全水平，2次ELISA檢測(cè)在血液篩查中仍有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] ELISA;NAT;傳染病四項(xiàng);弱反應(yīng)性;血液篩查

[中圖分類號(hào)] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2018）08（c）-0162-02

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)[1-2]。其方法簡(jiǎn)單，方便訊速，特異性強(qiáng)，目前仍廣泛應(yīng)用于醫(yī)療及采供血機(jī)構(gòu)[3]。國(guó)內(nèi)絕大部分采供血機(jī)構(gòu)對(duì)獻(xiàn)血者篩查可經(jīng)血傳播感染的檢測(cè)項(xiàng)目和方法的模式，仍主要以選擇2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測(cè)為主，進(jìn)行2次ELISA方法的血液篩查。目前我國(guó)采供血機(jī)構(gòu)已普遍開(kāi)展NAT檢測(cè)，血液篩查策略下一步可能有所改進(jìn)。為此，選取2017年1—12月無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本47586份將不同ELISA試劑對(duì)傳染病四項(xiàng)檢測(cè)弱反應(yīng)性結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析和比較，并利用NAT檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行確認(rèn)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 材料與方法

1.1? 標(biāo)本來(lái)源

采集的無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本475 86份，EDTA-K2和肝素鈉抗凝真空采血管（各1支，每管5 mL）用于ELISA檢測(cè)，帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管（1支5 mL）用于核酸檢測(cè)。所有標(biāo)本均嚴(yán)格按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》采集、保存。

1.2? 試劑

初檢試劑：法國(guó)伯樂(lè)乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、珠海麗珠丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、珠海麗珠人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、珠海麗珠梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。復(fù)檢試劑：北京萬(wàn)泰乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、北京萬(wàn)泰丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、法國(guó)伯樂(lè)人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、北京萬(wàn)泰梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。HBV DNA、HCV RNA、HIV-1RNA核酸檢測(cè)試劑盒（PCR熒光法）（上海浩源生物科技有限公司）。經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.3? 主要儀器

Uranus AE 200全自動(dòng)酶免分析儀2臺(tái)（深圳愛(ài)康公司），ChiTas BSS1200 全自動(dòng)核酸純化儀（上海浩源生物科技有限公司），ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)（美國(guó)ABI公司），TDL5B臺(tái)式大容量低溫離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰公司）。

1.4? 方法

將采集的血液標(biāo)本離心后，由不同的檢驗(yàn)人員采用2種試劑使用不同的設(shè)備進(jìn)行2遍ELISA項(xiàng)目（HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP）平行檢測(cè)，均按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，四項(xiàng)檢測(cè)s/co值<0.7為無(wú)反應(yīng)性; 1>s/co≧0.7為灰區(qū)，判為弱反應(yīng)性;s/co值≥1.0為有反應(yīng)性。

1.5? NAT檢測(cè)

應(yīng)用NAT 檢測(cè)方法將167份（HBsAg 120;抗-HCV 20;抗-HIV1/2 27）弱反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。無(wú)反應(yīng)性的判為NAT陰性，有反應(yīng)性的判為NAT陽(yáng)性。

2? 結(jié)果

無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本弱反應(yīng)性檢測(cè)結(jié)果（除去兩種試劑都弱反應(yīng)性），見(jiàn)表1、2、3、4。

3? 討論

自從ELISA試驗(yàn)建立以來(lái)，隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，加之自動(dòng)化程度極高的ELISA檢測(cè)儀的使用，使ELISA更為簡(jiǎn)便實(shí)用和標(biāo)準(zhǔn)化，從而使其成為最廣泛應(yīng)用的檢測(cè)方法之一[4-5]。該采供血機(jī)構(gòu)采用部分為國(guó)產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑聯(lián)合使用對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)2次篩查的弱反應(yīng)性結(jié)果不一致，從上述結(jié)果可以看出，每一相同項(xiàng)目不同試劑所檢測(cè)的弱反應(yīng)性結(jié)果相差較大。其中存在假反應(yīng)性結(jié)果的可能，因ELISA測(cè)定中影響因素較多，操作過(guò)程中每個(gè)環(huán)節(jié)都會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，試劑、樣本以及操作因素都可能影響檢測(cè)結(jié)果。但從表5可以看出，167份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV弱反應(yīng)性結(jié)果經(jīng)NAT檢測(cè)后，有5份HBV DNA陽(yáng)性（其中伯樂(lè)3;萬(wàn)泰2），說(shuō)明經(jīng)過(guò)兩家試劑ELISA檢測(cè)后，仍存在輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，特別是HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)，在兩家試劑ELISA檢測(cè)弱反應(yīng)性結(jié)果中均存在HBV DNA陽(yáng)性。另外，NAT檢測(cè)不進(jìn)行梅毒螺旋體病毒檢測(cè)，所以從血液安全角度考慮，用ELISA方法實(shí)施2次HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的血液篩查更有利于保障血液安全。

ELISA國(guó)產(chǎn)試劑與進(jìn)口試劑弱反應(yīng)性檢測(cè)結(jié)果也存在較大差異，國(guó)產(chǎn)試劑的檢出率較進(jìn)口試劑低。HBsAg弱反應(yīng)性國(guó)產(chǎn)試劑檢出率49/47 586，進(jìn)口試劑檢出率71/47 586;抗-HIV弱反應(yīng)性國(guó)產(chǎn)試劑檢出率5/47 586，進(jìn)口試劑檢出率22/47 586。檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明進(jìn)口試劑靈敏度更高，在我國(guó)現(xiàn)有經(jīng)濟(jì)條件下結(jié)合使用國(guó)產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑，重復(fù)2次ELISA方法篩查對(duì)保障血液安全仍有意義。開(kāi)展核酸檢測(cè)后是否減去一遍酶免檢測(cè)需經(jīng)過(guò)更加充分深入的研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 白潔，何靈，周建，等.傳染病四項(xiàng)不同檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用價(jià)值對(duì)比分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，3（6）：688-690.

[2]? 《血站技術(shù)操作規(guī)程》2015版.

[3]? 王良華，鄔旭群，鮑自謙，等.不同ELISA試劑HBsAg初復(fù)檢結(jié)果的比較[J].中國(guó)輸血雜志，2007，20（2）：124-125.

[4]? 劉玉強(qiáng).FAME試劑槽對(duì)不同ELISA試劑檢測(cè)結(jié)果的影響分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2017（14）：256-257.

[5]? 李榮.不同HIV—ELISA診斷試劑檢測(cè)結(jié)果比較[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2011，13（22）：248-249.

（收稿日期：2018-05-23）