谷春艷 蘇賢巖 楊雪 臧昊昱 陳雨 王學(xué)峰

摘要 通過(guò)室內(nèi)測(cè)定8種化學(xué)藥劑和拮抗細(xì)菌解淀粉芽胞桿菌WH1G對(duì)草莓炭疽病菌的毒力，將毒力最強(qiáng)的化學(xué)藥劑與WH1G進(jìn)行復(fù)配，探討復(fù)配劑對(duì)草莓炭疽病菌的室內(nèi)毒力及田間防治效果。室內(nèi)生物測(cè)定結(jié)果表明，8種常見(jiàn)化學(xué)藥劑中咪鮮胺對(duì)草莓炭疽病菌的毒力最強(qiáng)，其EC50為0.045 3 mg/L，在較低濃度下能有效抑制草莓炭疽病菌的生長(zhǎng)，與生防菌有較好的生物相容性；解淀粉芽胞桿菌WH1G對(duì)草莓炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用，含菌量為1.0×1010cfu/mL時(shí)抑制率達(dá)89%；將咪鮮胺（0.045 3 mg/L）與解淀粉芽胞桿菌WH1G（2.3×106 cfu/mL）復(fù)配，V（咪鮮胺）∶V（WH1G）配比為5∶5時(shí)對(duì)病菌抑制的增效作用和防治效果最好，毒性比率為1.432，防效為69.94%。復(fù)配劑對(duì)草莓炭疽病的田間防效達(dá)67.91%，顯著高于單劑防效，且咪鮮胺使用量只有單劑使用量的1/2，表明二者復(fù)配不僅可以提高防效，還能有效減少化學(xué)藥劑的使用量。

關(guān)鍵詞 草莓炭疽?。?解淀粉芽胞桿菌； 咪鮮胺； 協(xié)同防治

中圖分類號(hào)： S 668.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2017209

Abstract Toxicities of 8 fungicides and Bacillus amyloliquefaciens WH1G against strawberry anthracnose were tested in this study. The mixture of the fungicide with the strongest toxicity and antagonistic bacteria WH1G was detected for its laboratory toxicity and control effect in the fields against strawberry anthracnose. The results showed that the toxicity of prochloraz was the strongest among 8 fungicides with the EC50 value of 0.045 3 mg/L. It could effectively inhibit the mycelia growth of C.gloeosporioides under lower dosage， and was compatible with strain B.amyloliquefaciens WH1G. 1.0×1010cfu/mL WH1G could strikingly inhibit the growth of C.gloeosporioides with the inhibition ratio of 89%. By combining 0.045 3 mg/L prochloraz with 2.3×106 cfu/mL B.amyloliquefaciens WH1G fermentation broth at the volume ratio of 5∶5， the toxicity ratio and the control efficacy were 1.432 and 69.94%， respectively， prior to the rest of the tested reagent combinations. The control efficacy of compound biopesticide was 67.91% against strawberry anthracnose in the field， which was better than that when each of them used alone. Meanwhile， the amount of prochloraz was reduced by 50% compared to that when used alone. Therefore， the combination of prochloraz and strain WH1G can not only reduce the usage of chemicals， but also promote the biocontrol efficacy.

Key words strawberry anthracnose； Bacillus amyloliquefaciens WH1G； prochloraz； synergistic control

由炭疽菌Colletotrichum spp.引起的草莓炭疽病是草莓苗期和移栽期的重要病害，該病主要危害匍匐莖和根冠，造成根冠腐爛，最終導(dǎo)致植株萎蔫死亡[1]。近幾年來(lái)，由于草莓地連作現(xiàn)象普遍、復(fù)種年限延長(zhǎng)以及抗病品種缺乏，炭疽病蔓延迅速，已成為草莓苗期的主要病害，嚴(yán)重制約了草莓種植業(yè)的健康發(fā)展[2]。

目前對(duì)草莓炭疽病的防治主要以化學(xué)防治為主，多采用咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯等化學(xué)藥劑進(jìn)行防治。使用化學(xué)藥劑雖在短時(shí)期內(nèi)能達(dá)到很好的防效，但同時(shí)也會(huì)造成果實(shí)農(nóng)藥殘留、環(huán)境污染及病菌產(chǎn)生抗藥性等問(wèn)題[34]。據(jù)報(bào)道，草莓炭疽病菌已對(duì)多種化學(xué)藥劑產(chǎn)生了抗藥性[57]。生物防治不僅對(duì)人畜安全，而且具有綠色、環(huán)保、作用時(shí)間長(zhǎng)、病菌不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)，因而日益受到人們的關(guān)注，但其也存在一些不足，如田間施用后藥效發(fā)揮較慢、防治效果及防效穩(wěn)定性差等，這些缺點(diǎn)嚴(yán)重制約了生防制劑的推廣[8]。目前針對(duì)草莓炭疽病生防菌的研究多數(shù)停留在拮抗菌的篩選、鑒定及生物學(xué)特性方面[1，3，9]，開(kāi)發(fā)并已登記的生防菌中田間防治效果好的菌株屈指可數(shù)[1011]。

利用生物防治與化學(xué)防治相結(jié)合的防治策略，既能減少化學(xué)藥劑的施用量、提高生物防治的穩(wěn)定性，又能達(dá)到有效控制病害的效果，綜合運(yùn)用了生物防治與化學(xué)防治方法的優(yōu)點(diǎn)，因此在植物病害防治領(lǐng)域日益受到重視，且取得了較好的進(jìn)展[1215]，但目前利用生防菌與化學(xué)藥劑協(xié)同防治草莓病害的研究還少有報(bào)道[8，16]。據(jù)此，本研究擬從農(nóng)業(yè)生產(chǎn)常用的化學(xué)藥劑中篩選出對(duì)草莓炭疽病防效較好并和解淀粉芽胞桿菌生物相容性好的化學(xué)藥劑進(jìn)行復(fù)配，探討化學(xué)藥劑與解淀粉芽胞桿菌協(xié)同防治草莓炭疽病的效果，為生產(chǎn)中生物農(nóng)藥與化學(xué)農(nóng)藥的綜合防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

解淀粉芽胞桿菌Bacillus amyloliquefaciens WH1G，由安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所水稻病害防治課題組分離獲得[17]。采用改良的NA培養(yǎng)基（1.0 g牛肉浸膏，5.0 g酵母膏，5.0 g蛋白胨，5.0 g NaCl，10.0 g蔗糖，20.0 g瓊脂和1 000 mL蒸餾水，pH 6.8～7.0），在恒溫恒濕培養(yǎng)箱28℃中培養(yǎng)。

草莓炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides CF8G，由安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所水稻病害防治課題組分離獲得。病菌用PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200.0 g，葡萄糖20.0 g，瓊脂20.0 g和蒸餾水1 000 mL），在恒溫恒濕培養(yǎng)箱28℃中培養(yǎng)。

化學(xué)藥劑：9種化學(xué)藥劑的含量、劑型及生產(chǎn)廠家見(jiàn)表1。

1.2 藥劑毒力測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法[18]。分別用97%咪鮮胺原藥等8種供試藥劑配制含不同梯度濃度藥劑的PDA平板。其中97%咪鮮胺原藥、98%氟啶胺原藥在PDA培養(yǎng)基中的系列梯度濃度設(shè)計(jì)為0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/L；97%氟環(huán)唑原藥及97%戊唑醇原藥的梯度濃度設(shè)計(jì)為0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mg/L；96%苯醚甲環(huán)唑原藥的梯度濃度設(shè)計(jì)為0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mg/L； 95%啶酰菌胺原藥、95%腈菌唑懸浮劑及97%吡唑醚菌酯原藥的梯度濃度設(shè)計(jì)為1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L，將草莓炭疽病菌菌塊（直徑5.0 mm）放在含藥平板中央，放置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用無(wú)菌水作為對(duì)照，各處理重復(fù)3次。待對(duì)照菌落長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿2/3時(shí)，采用十字交叉法量取各處理的菌落直徑，計(jì)算平均抑制率。

平均抑制率=[（對(duì)照組菌落直徑平均值-處理組菌落直徑平均值）/（對(duì)照菌落直徑平均值-5.0）] ×100%。

1.3 解淀粉芽胞桿菌WH1G對(duì)草莓炭疽病菌抑菌活性測(cè)定

將解淀粉芽胞桿菌WH1G接種于5 mL改良NA液體培養(yǎng)基中，置于28℃搖床180 r/min培養(yǎng)48 h后用無(wú)菌水稀釋成菌含量1.0×1010cfu/mL，采用平板對(duì)峙法[9] 測(cè)定其對(duì)草莓炭疽病菌的抑制活性。用直徑為5 mm的無(wú)菌打孔器在草莓炭疽病菌菌落邊緣打取菌餅，接種于PDA平板中央，在距離中心3 cm處對(duì)稱放置4個(gè)直徑為5 mm的濾紙片，其中3個(gè)濾紙片加2 μL解淀粉芽胞桿菌WH1G菌懸液，另外一個(gè)濾紙片滴加2 μL NA液體培養(yǎng)基，另設(shè)清水對(duì)照，每處理設(shè)3次重復(fù)，將平板置于28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。待對(duì)照菌落長(zhǎng)至培養(yǎng)皿2/3時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算平均抑制率。

1.4 化學(xué)藥劑對(duì)解淀粉芽胞桿菌WH1G生物活性的影響

將1.2篩選出來(lái)的對(duì)草莓炭疽病菌毒力較強(qiáng)的化學(xué)藥劑分別配成質(zhì)量濃度為50、100、150、200 mg/L的改良NA培養(yǎng)基平板，將10 μL解淀粉芽胞桿菌WH1G的菌懸液滴在含藥平板中央，用玻璃棒均勻涂布于培養(yǎng)基表面，每處理重復(fù)3皿，以加同等體積的無(wú)菌水為對(duì)照，28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2 d。分別采用平板稀釋法檢測(cè)菌體生長(zhǎng)情況，統(tǒng)計(jì)并記錄菌落數(shù)量。

1.5 咪鮮胺與解淀粉芽胞桿菌WH1G復(fù)配劑的毒力測(cè)定

1.5.1 單劑對(duì)草莓炭疽病菌的毒力測(cè)定

用無(wú)菌水將解淀粉芽胞桿菌WH1G的菌懸液配制成不同含菌量的菌懸液，分別為1.0×105、1.0×106、1.0×107、1.0×108、1.0×109 cfu/mL。同時(shí)將97%咪鮮胺TC配制成不同質(zhì)量濃度梯度的藥液，分別為0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/L。

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定單劑毒力。用十字交叉法測(cè)量炭疽菌在含不同質(zhì)量濃度的咪鮮胺平板及不同含菌量的解淀粉芽胞桿菌WH1G平板上的菌落直徑，根據(jù)各處理的平均菌落直徑計(jì)算抑制率。將抑制率換算成抑制幾率值。分別根據(jù)咪鮮胺質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)（X）與抑制幾率值（Y）、生防菌濃度對(duì)數(shù)（X）與抑制幾率值（Y），采用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算出各處理的回歸方程Y=aX+b、EC50及相關(guān)系數(shù)r。

1.5.2 復(fù)配劑對(duì)草莓炭疽病菌的毒力測(cè)定

根據(jù)97%咪鮮胺TC及解淀粉芽胞桿菌WH1G單劑的毒力測(cè)定結(jié)果，分別配制兩種單劑的有效中濃度為藥液。再將咪鮮胺與生防菌WH1G按體積比為10∶0、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶10配成10種配比的復(fù)配液。以加入等量無(wú)菌水為空白對(duì)照，每處理設(shè)3次重復(fù)。測(cè)量各處理平板的菌落直徑，計(jì)算平均抑制率、預(yù)期抑制生長(zhǎng)率及毒性比率。根據(jù)毒性比率值，判斷不同配方的協(xié)同作用效果。

毒性比率>1，表示為增效作用；毒性比率<1，表示為拮抗作用；毒性比率=1，表示為相加作用[19]。其計(jì)算公式為：

毒性比率=實(shí)際抑制生長(zhǎng)率/預(yù)期抑制生長(zhǎng)率。

預(yù)期抑制生長(zhǎng)率=生防菌WH1G菌懸液EC50劑量實(shí)際抑制率×配比中的百分率+咪鮮胺EC50劑量實(shí)際抑制率×配比中的百分率。

已有研究結(jié)果[2427]表明，化學(xué)藥劑有助于生防微生物克服自然環(huán)境中的各種障礙，彌補(bǔ)生防菌發(fā)揮作用慢、田間防效不穩(wěn)定等缺點(diǎn)，從而更好地發(fā)揮生物防治作用。但是對(duì)于生防微生物的安全性、質(zhì)保期、使用規(guī)范及實(shí)現(xiàn)化學(xué)藥劑和生防菌協(xié)同增效的具體作用機(jī)制還有待于深入研究，從而為菌劑更好地開(kāi)發(fā)利用提供指導(dǎo)作用。

草莓炭疽病的防治只有堅(jiān)持“預(yù)防為主、綜合防治”的植保方針，以農(nóng)業(yè)防治為基礎(chǔ)，運(yùn)用生物防治和高效低毒農(nóng)藥協(xié)同防治的多種措施才能達(dá)到理想的防治效果。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）